Itogavya / Инфекция и иммунитет

считают реакцию, оцененную не менее чем двумя крестами. Всего на постановку реакции и ее учет тратится-около 30-40 мин. Специфичность ЛАГ оценивается с помощью трех контрольных тестов, содержащихся в коммерческих тест-системах (заведомо положительная реакция, заведомо отрицательная, контроль качества латекс-суспензии по ЛАГ несенсибилизированных, т.е. не несущих антител, латексов с исследуемым материалом. Все ингредиенты ЛАГ, включая контроля, входят в состав тест-системы. В качестве носителей специфических антител в нашей стране используются: полистироловые монодисперсные латексы с разными диаметрами частиц (0,3; 0,8; 0,66; 0,75 мкм).

в) реакция агрегат-гемагглютинации (РАГА): Реакция агрегат-гемагглютинации (РАГА) позволяет быстро обнаружить в крови больного как свободно циркулирующие антигены (антигенемия), так и антигены, связанные с антителами (циркулирующие иммунные комплексы - ЦИК). Для РАГА используют эритроциты, сенсибилизированные соответствующими антителами. Добавление сыворотки больного, в которой содержатся антигены, к сенсибилизированным эритроцитам, на которых фиксированы антитела, приводит к склеиванию (агглютинации) эритроцитов и антигенных комплексов.

28. Что такое факторы инвазии? Чем они представлены.

Факторы инвазии – это факторы, с помощью которых бактерии проникают в клетку. У Г- они могут быть представлены белками наружной мембраны. Также сюда можно отнести, например, фермент гиалуронидазу, разрушающую соединительную ткань.

29. Формы иммунного ответа. Что такое иммунологическая толерантность, и чем она обусловлена.

Формы иммунного ответа: -синтез антитела

-образование клеток иммунной памяти -реакции гиперчувствительности немедленного типа

-замедленного типа(+ трансплантационный иммунитет) -иммунологическая толерантность -идиотип-идиотипические взаимодействия

Под иммунологической толерантностью (отсутствием иммунного ответа) понимают специфическое подавление иммунного ответа, вызванное предварительным введением антигена. Толерантность может проявляться в подавлении специфического иммунного ответа. Толерантность может быть полной (образование антител не происходит) либо частичной (существенное снижение иммунного ответа.

Особенности:

1)развитие этого состояния индуцируется только веществами антигенной природы

2)толерантность антиген-специфична (проявляется только в отношении того антигена, который индуцировал ее формирование).

3)искусственно полученная толерантность проявляется в разной степени, и продолжительность ее сохранения сильно варьирует.

30. Классификация диагностических серологических реакций по технике постановки и механизму протекания.

Реакции агглютинации

Реакции преципитации

Реакции лизиса

Реакции нейтрализации

Реакция иммунофлуоресценции

Иммуносорбентные реакции

31.Какие факторы патогенности являются «препятствующими фагоцитозу» и какие «подавляющими фагоцитозу»?

Факторы адгезии, факторы инвазии -факторы, препятствующие фагоцитозу;

Факторы, подавляющие фагоцитоз, ферменты «защиты и агрессии», токсины микробов (эндо- и экзотоксины).

1.Факторы, препятствующие фагоцитозукомпоненты клеточной стенкипептидогликаны, белок А, Белок М, антиген-6, микрокапсула

2.Факторы, подавляющие фагоцитозкапсулы, продукты жизнедеятельности бактерия.

32. Формы иммунного ответа. Иммунологическая память, ее природа.

Формы иммунного ответа: -синтез антитела

-образование клеток иммунной памяти -реакции гиперчувствительности немедленного типа

-замедленного типа(+ трансплантационный иммунитет) -иммунологическая толерантность -идиотип-идиотипические взаимодействия

Иммунная память – одна из форм иммунного ответа. Она означает способность организма человека или животного реагировать на повторное введение того антигена, которым он был иммунизирован ранее, быстрее и с большей силой. Носителями иммунной памяти становятся Т и В-лимфоциты после взаимодействия с соответствующим антигеном, или так называемые антигенстимулированные лимфоциты. Клетки памяти представляют собой ту часть Т и В-антигенстимулированых лимфоцитов, которые после 2-3 делений переходят в покоящееся состояние и длительное время рециркулируют в организме. Таким образом, они служат своеобразным резервом иммунокомпетентных клеток, способных при повторной встрече с соответствующим антигеном быстро превращаться в клеткиэффекторы иммунного ответа.

33. Понятие об иммунных сыворотках, их классификация, получение, титрование, практическое использование.

Иммунные сыворотки- препараты крови человека или животных, содержащие АТ к микробам или их токсинам. Они готовятся для лечебных и диагностических целей.

Сыворотки

Лечебно-профилактические:

-антитоксические (дающие быстрый терапевтическийй эффект благодаря нейтрализации микробного токсина в организме больного: противодефтерийная, противостолбнячная и т.д.)

-антибактериальные (оказывают более медленное действие: противоменингококковая,

противострептококковая -противовирусные

Диагностич-е: -агглютинирующие

-преципитирующие -гемолитические -меченые

Получение: лечебные и диагностич-е сыворотки готовят путем иммунизации животных соответств-ми АГ. Первым этапом в технике получения ИС является приготовление АГ. АГ могут быть любое вещ-во белковой природымикробы или др. кл-ки, продукты микробов (токсины), и др. н/р сыворотка.

По окончании курса иммунизации у жив-х стерильно берут кровь и получают из нее после свертывания сыворотку: 1) помещают кровь в термостат при 37 градусов для ускор-я свертывания 2) затем в ледник на сутки 3) к полученной прозрачной сыворотке прибавляют для консервированияя 0,5% хлороформа.

Лечебные сыворотки выд-т на леднике в течении 4-6 месяцев.

Затем сыворотки титруют на содержание АТ, проверяют на стерильность и безвредность и расфасовывают по ампулам. ИС сохраняются на холоду и в темноте. Срок годности 1 год. В настоящее время сыворотки выпускают в высушенном виде, что значит.

34. Методы определения токсигенности бактерий.

Наличие токсина определяют с помощью различных серологических реакций (преципитации в агаре, ИФА и др.). Применяют также метод ПЦР, позволяющий обнаружить присутствие у выделенных бактерий tox-гена, контролирующего синтез дифтерийного токсина. До последнего времени общепринятым методом определения токсигенности являлась реакция преципитации в агаре с антитоксической противодифтерийной сывороткой. Методы ИФА и ПЦР, разработанные в последние годы, являются более чувствительными и позволяют получить результат в течение 3—5 ч.

Определение токсигенности в реакции преципитации: в чашку Петри с питательным агаром, содержащим 15—20 % лошадиной сыворотки, 0,3 % мальтозы и 0,03 % цистина, кладут полоску фильтровальной бумаги, пропитанную антитоксической противодифтерийной сывороткой, содержащей 5000 АЕ/мл. Чашку подсушивают при 37 "С в течение 30 мин и засевают исследуемые культуры в виде перпендикулярных к бумаге штрихов на расстоянии 0,6—0,8 см от края бумаги. В качестве контроля используют заведомо токсигенную культуру. Посевы инкубируют при 37 "С до следующего дня. При размножении токсигенной культуры в месте соединения токсина с антитоксическими антителами в плотной питательной среде образуется преципитат в виде белых линий — "усов"

35. Формы иммунного ответа. Гиперчувствительность немедленного типа, механизм ее развития, клинические проявления.

Формы иммунного ответа: -синтез антитела

-образование клеток иммунной памяти -реакции гиперчувствительности немедленного типа

- замедленного типа(+ трансплантационный иммунитет) -иммунологическая толерантность -идиотип-идиотипические взаимодействия

К реакциям гиперчувствительности немедленного типа относятся: сывороточная анафилаксия, лекарственная анафилаксия, сывороточная болезнь, сенная лихорадка, бронхиальная астма, крапивница и другие аллергические реакции, в том числе к таким аллергенам, как пыльца некоторых растений, красители, шерсть и т.п. В их основе лежат общие механизмы, которые изучены при анафилаксии.

Механизм развития: реакции анафилаксии, как и другие реакции ГНТ, являются иммунологически специфичными и проявляются в отношении того антигена, к которому организм сенсибилизирован. Для возникновения состояния сенсибилизации достаточно введения очень малых доз антигена (аллергена). Состояние повышенной чувствительности развивается через 7-14 дней после введения антигена и сохраняется месяцами и годами. Для его выявления вводят внутривенно вторую, разрешающую дозу антигена.

В развитии анафилаксии можно выделить следующие три стадии:

1)иммунологическая – определяет специфичность анафилаксии, характеризуется взаимодействием антигена с антителом, фиксированным на клетках сенсибилизированного организма.

2)патохимическая – характерна активация протеолитических ферментов, в результате действия которых из клеток высвобождаются БАВ, которые участвуют в механизме развития анафилаксии. 3)патофизиологическая – развивается в результате действия биологически активных веществ на различные системы органов, в особенности на гладкую мускулатуру.

36. Вакцины. Определение понятия, классификация, получение, использование. Вакцины- препараты, используемые для искусственного создания приобретенного активного специфического иммунитета против опред-х возбудителей или их токсинов.

По составу раз-т: моновакцины (АГ одного серовара), поливакцины (АГ нескольких сероваров), комплексные (АГ нескольких видов МО, либо одного и того же, но в раз-х вариантах)

По природе составл-х компонентов: живые (из штаммов и вирусов с ослаб-й вирулентностью; туляремийная, бруцелезная, гриппозная, коревая), убитые (против кишечных инфекций, лептоспироза, коклюша; менее иммуногенны), химические (из различ. антигенных компонентов как бактерий. так и вирусов), искусственные (полностью синтетические) хим-е вакцины, вакцины, получ-е методом генной инженерии и кассетные.

Вакцина изготавлив-ся из ослабленных или убитых МО, продуктов их жизнидеятельности или их АГ. Вакцинацию проводят с целью вызвать иммунитет к болезни, кот-й предотвратит заражение, или ослабит его последствия.

37. Комплемент. Состав и основные функции.

Комплемент – большая группа взаимодействующих между собой сывороточных белков и гликопротеинов , имеющихся у всех позвоночных (белки С1 – различные факторы и инактиваторы, всего около 20 компонентов). Синтезируется иммунокомпетентными клетками.

Основные функции:

1)лизис чужеродных клеток,

2)опсонизация – т.е. чужеродные клетки становятся более доступными для макрофагов,

3)стимуляция хемотаксиса,

4)стимуляция фагоцитоза,

5)повышение сосудистой проницаемости, усиление лейкоцитоза,

6)стимуляция анафилотоксинами процессов, в результате которых выбрасываются БАВ.

38.Как осуществляется процессинг антигена и его презентация иммунокомпетентным клеткам?

Процессинг антигенов- это их судьба в организме. Одной из важнейших функций макрофагов является переработка антигена в иммуногенную форму (это собственно и есть процессинг антигена) и представление его иммунокомпетентным клеткам. В процессинге, наряду с макрофагами, участвуют В- лимфоциты, дендритные клетки, Т- лимфоциты. Под процессингом понимают такую переработку антигена, в результате которой пептидные фрагменты антигена (эпитопы), необходимые для передачи (представления), отбираются и связываются с белками МНС класса 2 (или класса 1). В таком комплексном виде антигенная информация передается лимфоцитам. Дендритные клетки имеют значение в фиксации и длительном хранении (депонировании) переработанного антигена.

39. Реакция Кумбса, сущность, преимущества перед другими серологическими реакциями.

Для выявления неполных АТ используют спец-ю р-цию Кумбса. Р-я протекает в 2 этапа:

3.взаимодействие АГ с неполными АТ

4.взаимодействие антиглобулиновой сыворотки (антиглобулиновых АТ) с АТ, адсорбированными на АГ. В силу того, что антиглобулинновые АТ двувалентны, они связывают два одновалентных АТ, адсорбированных соответственно на двух АГ, что приводит к склеиванию АГ, к их агглютинации.

При помощи реакций прямой и пассивной агглютинации определяют полные АТ. Неполные АТ не выявляются этим методом, т.к. Соединяясь с АГ блокируют его, но не могут вызвать аггрегации АГ в крупные конгломераты.

40.Пути активации системы комплемента.

Три пути активации комплемента:

1)классический, инициируемый комплексом антиген-антитело,

2)альтернативный, инициируемый эндотоксинами,

3)механизм С-шунта; при дефиците С4-компонента, требует активации С1-компонента.

41.Антигены микробной клетки. Для чего необходимо знать антигенное строение микробной клетки?

Бактериальная кл-ка представляет собой целый комплекс АГ. Аг-ми св-ми обладают: жгутики, капсула, клеточная стенка, цитоплазматическая мембрана. Рибосомы и др. компоненты цитоплазмы, а также продукты белковой природы, выделяемые бактериями во внешн. среду, в том числе токсины и ферменты.

По хим-й природе, локализации в клетке и функциональному назначению различают:

-Соматические О-антигены (термостабильны,Они представлены липолисахаридами содержащимися в клет. стенке)

-Жгутиковый Н-антигены (термолабильны, имеют белковую природу, сократит-й белок флагеллин

-Поверхностный (капсульный) — полисахарид, по степени устойчивости к высоким температурам он подраздел-ся на: L- белковой природы, В- полисахарид (при 100 градусах разруш-ся), А- полисахарид (разруш-ся при температуре выше 100 градусов)

-Протеактивные АГ — могут быть использованы в практике иммунизации против некоторых инфекционных болезней, в частности против сибирской язвы и чумы

-Перекрестно-реагирующий АГ (присутствует у разных организмов, напр. наличие общих АГ у

эритроцитов чел-ка и стафилокков. Если имеется сходство антигенной структуры хозяина и возбудителя, макроорганизм не способен вырабатывать иммунитет, и болезнь протекает более тяжело.

-Суперантигены (белки, кот-е связ-ся с отличным от др. АГ способом с рецепторами Т-лимфоцитов, актив-т их. Т-лимфоциты нач-т быстро размножаться и секретир-ть избыточное кол-во интерлейкина-2, кот-й вызыв-т отравление. Избыточное кол-во Т-лимфоцитов может привести к различным аутоиммунным заболеваниям и подавлению самой иммунной сист.

Аг-нное строение микрб-х кл-к необхдимо знать для: -изготовл-я новых вакцин -совершенствования классификации МО -идентификации возбудителей болезней

42. Что такое моноклональные антитела? Какими свойствами они обладают и как их получают?

Моноклональные АТАТ, синтезируемые и секретируемые одним клоном антителобразующих клеток, т.е. клеток, генетически идентичных, происходящих из одного и того же зрелого В-лимфоцитов.

Св-ва моноклональных АТ: класс иммуноглобулина, структура полипептидных цепей и активных центров, т.е.антительная специфичность у клонов идентичны.

Получение моноклональных АТ стало возможна после получения клеточных гибридов -гибридом путем слияния нормальных лимфоцитов иммунизированных животных с культивированными в пит-й среде клетками миеломных штамов.Слияние лимфоцитов с миеломными кл-ми осущ-ся с помощью полиэтиленгликоля. Сливш-ся гибридомные кл-ки получ-т от лимфоцитов способность синтезировать опред-й АТ (моноклональные АТ_ и способность выживать в среде ГАТ. От миеломного партнера они получают способность размножаться бесконечно in vitro.

Моноклональные антитела - антитела, продуцируемые одним клоном антителообразующих клеток. По всем параметрам антитела, вырабатываемые одним клоном, идентичны (по классу иммуноглобулинов; по их типу и антительной специфичности). Они взаимодействуют только с одним антигеном, и это обстоятельство значительно повышает специфичность всех иммунологических реакций, в которых они участвуют. Получение моноклональных антител стало возможным после того, как в 1975 году Кёллером и Мильштейном была разработана методика получения клеточных гибридов -гибридом путем слияния нормальных лимфоцитов иммунизированных животных с культивируемыми в питательной среде клетками миеломных штаммов. Были использованы такие штаммы, которые не содержали фермента гипоксантин-фосфорибозилтрансферазы (поэтому они погибают в селективной среде, содержащей гипоксантин, аминоптерин и тимидин - ГАТ).

Лимфоциты в такой среде не гибнут. Слияние лимфоцитов с миеломными клетками осуществляется с помощью полиэтиленгликоля. Слившиеся гибридомные клетки получают от лимфоцита способность синтезировать определенные антитела (моноклональные антитела, т.е. антитела одной специфичности) и способность выживания в среде с ГАТ. От миеломного партнера они получают способность размножаться бесконечно in vitro.

Накопившийся гибридомный клон может быть размножен, а синтезируемые им моноклональные антитела могут быть получены в неограниченном количестве.

Уже созданы фирмы по выработке моноклональных антител любой специфичности в качестве уникальных реагентов, диагностических и лечебных препаратов.

Получение лимфоцитарных гибридом включает в себя несколько этапов:

1.Получение миеломкой линии.

2.Получение селезеночных клеток от иммунизированного организма.

3.Создание в культуре условий для того, чтобы хотя бы некоторые клетки одной и другой популяции могли осуществить слияние.

4.Выделение слившихся клеток и накопление их клонов.

5. Отбор заданного клона, его накопление и использование. Накопление клона осуществляется in vitro или путем введения животным.

При этом на всех этапах образующиеся клетки необходимо консервировать в жидком азоте, чтобы в любое время можно было вернуться к любому этапу и сохранить на будущее нужные клоны.

В качестве миеломных клеток чаще всего используются мышиные или крысиные клеточные линии. Гибридомы создают не только на основе В - лимфоцитов, обеспечивающих возникновение культур, синтезирующих моноклональные антитела, но и на основе Т - лимфоцитов. Уже сконструированы культуры Т - гибридом, синтезирующие лимфокины.

43. Что такое фагоцитоз? Его механизм и стадии. Понятие о завершенном и незавершенном фагоцитозе.

Фагоцитоз — это поглощение клетками каких-либо частиц с последующим их перевариванием. Стадии фагоцитоза:

1)хемотаксис – целенаправленное движение фагоцита при получении определенного химического сигнала,

2)адгезия, т.е. прилипание бактерии к фагоциту,

3)поглощение бактериальной клетки,

4)исход фагоцитоза – три варианта:

28.завершенный фагоцитоз – полное внутриклеточное переваривание,

29.незавершенный фагоцитоз – приживление и активное размножение бактерий внутри фагоцита,

30.выталкивание объекта обратно в окружающую среду.

44.Что такое трансплантационный иммунитет и какими клетками иммунной системы он опосредуется?

Под трансплантационным иммунитетом понимают отторжение генетически отличающегося от хозяина трансплантата. Хотя по отношению к антигенам трансплантата организм также может вырабатывать антитела, главная роль в механизме трансплантационного иммунитета, как и всех реакций ГЗТ, принадлежит популяции Т-лимфоцитов, которые получили название Т-цитотоксических лимфоцитов, или Т-киллеров. Ведущая роль лимфоцитов в реакциях трансплантационного иммунитета подтверждается следующими феноменами:

1) Феномен «трансплантат против хозяина».

2)Трасфер – реакция (местное проявление реакции «трансплантат против хозяина»). Суть этого явления в том, что если организму, который был предварительно сенсибилизирован трансплантатом аллогенного донора, ввести внутрикожно лимфоциты того же донора, через 24-48 часов на месте введения наблюдается кожная реакция.

45. Иммуносорбентные реакции, механизмы их протекания.

В основе иммуносорбентного анализа твердой фазы лежит сорбция анатител (для обнаружения неизвестного антигена) или антигена (для обнарудения соответствующих антител) и специфических антител, меченных ферментом (имф) и изотопом (рим). Практически эти методы могут быть использованы для диагностики любого инфенкионного заболевания. С помощью этих методов можно определять как антигены, так и антитела к ним. Этот метод включает три этапа:

1-ый этап – адсорбция специфических антител на стенках луночек. обычно планшеты в коммерческих тест-системах уже имеют сенсибилизированные луночки, т.е. на их дне и стенках антитела уже адсорбированы.

2-ой этап – связывание антигена из суспензии исследуемого материала за счет реакции антителоантиген. после этого луночки промывают раствором, содержащий слабый неионный детергент, для удаления из системы других, неспецифически связанных с антителами компонентов.

3-ий этап – обработка твердой фазы с фиксированными на ней комплексами антитело-антиген специфическими антителами против данного антигена, но меченными либо ферментом, либо изотопом. Такие меченые антитела присоединяются к антигенам, а избыток удаляется из системы промыванием. В случае присутствия искомого антигена на поверхности твердой фазы формируется комплекс: антитело- антиген-меченое антитело.

Результаты реакции учитывают в зависимости от характера метки. Для ИМФ используют ферментпероксидаза. Субстратом для пероксидазы является ортофенилендиамин в смеси с Н2О2. Добавление в опытную луночку р-ра ОДФ приводит к тому, что он подвергается действию пероксидазы, фиксированной на антителах, образующиеся продукты реакции имеют желтую окраску, интенсивность которой позволяет количественно оценивать результаты опыта фотометрированием.

46. Субпопуляции Т- и В- лимфоцитов, их основные функции.

Иммунокомпетентными клетками организма человека являются Т– и В-лимфоциты.

T-лимфоциты возникают в эмбриональном тимусе. В постэмбриональном периоде после созревания T- лимфоциты расселяются в T-зонах периферической лимфоидной ткани. После стимуляции (активации) определенным антигеном T-лимфоциты преобразовываются в большие трансформированные T- лимфоциты, из которых затем возникает исполнительное звено T-клеток.

Т-клетки участвуют в:

1)клеточном иммунитете;

2)регулировании активности В-клеток;

3)гиперчувствительности замедленного (IV) типа. Различают следующие субпопуляции Т-лимфоцитов:

1)Т-хелперы. Запрограммированы индуцировать размножение и дифференцировку клеток других типов. Они индуцируют секрецию антител В-лимфоцитами и стимулируют моноциты, тучные клетки и предшественники Т-киллеров к участию в клеточных иммунных реакциях. Эта субпопуляция активируется антигенами, ассоциируемыми с продуктами генов МНС класса II – молекулами класса II, представленными преимущественно на поверхности В-клеток и макрофагов;

2)супрессорные Т-клетки. Генетически запрограммированы для супрессорной активности, отвечают преимущественно на продукты генов МНС класса I. Они связывают антиген и секретируют факторы, инактивирующие Т-хелперы;

3)Т-киллеры. Узнают антиген в комплексе с собственными МНС-молекулами класса I. Они секретируют цитотоксические лимфокины.

того антигена, который индуцировал ее развитие. Отличительные особенности ГЗТ:

1)сроки развития – 6-72 часа 2)эффекторы – Т-лимфоциты

3)в очаге воспаления преобладают моноциты и лимфоциты

4)не может быть передано пассивно от сенсибилизированного организма с помощью его сыворотки несенсибилизированному организму.

48. Динамика развития инфекционного процесса. Причины хронизации инфекционного заболевания и формирования носительства.

Динамика развития инфекционного процесса:

1). Инкубационный период – промежуток времени от попадания возбудителя в организм до проявления первых симптомов (продолжительность зависит от величины заражающей дозы, степени патогенности возбудителя, от состояния резистентности организма).

2). Продромальный период = период предвестников (необязательный): неспецифические проявления – слабость, головная боль, общее недомогание и т.д. (24-48 ч).

3). Период расцвета = период развития:

stadium incrementum – нарастание симптомов,

acme – расцвет,

stadium decrementum – угасание симптомов. 4). Период выздоровления = реконвалесценция.

Причиной хронизации инф. заболевания является способность МО подвергаться L- трансформации под влиянием иммунной системы организма и химиопреператов. L-формы не чувствительны к антителам, к антибиотикам и препаратам, вызывающим разрушение клеточной стенки, поэтому они могут персистировать («переживать») в организме. Возвращаясь в исходную форму, возбудитель вызывает обострение болезни (туберкулез).

Часто организм не может избавиться от возбудителя, и тогда человек становится носителем, будучи практически здоровым. Носители – источники заражения для других лиц.

49. Что такое инфекция? Ее основные формы.

«Инфекция» - от «inficio»: «вношу что-либо вредное, заражаю».

Существует 3 смысла понятия: 1) само инфекционное заболевание; 2) возбудитель; 3) сам факт инфицирования.

Инфекция – синоним инфекционного процесса.

Инфекционный процесс – процесс взаимодействия между микроорганизмом (МО) и макроорганизмом, протекающий в определенных условиях среды (в т.ч. социальной).

Три элемента взаимодействия:

1)патогенный МО;

2)восприимчивость макроорганизма (наличие спец. рецепторов);

3)среда.

Взависимости от св-в МО и макроорганизма выделяют формы инфекции: