Применение идентификационных карт для определения групп крови ав0 в гелевом тесте микрометодом (id-карты ДиаМед)
Идентификационные карты ID-ДиаМед фирмы «ДиаМед» (Швейцария) предназначены для одновременного определения группы крови АВ0 и резус-принадлежности в эритроцитах человека. ID-карты ДиаМед можно использовать взамен или параллельно с изогемагглютинирующими сыворотками, моноклональными реагентами анти-А, анти-В, анти-D.
ID-карты ДиаМед представляют собой пластиковые карточки, в которые встроено по шесть пробирок. В пяти пробирках содержится смесь геля и антисывороток, шестая контрольная пробирка содержит нейтральный гель без антител.
Принцип метода основан на разделении эритроцитов при центрифугировании после реакции гемагглютинации в геле. Образующиеся агглютинаты не проходят через гель из-за большого размера и остаются в верхней части пробирки (положительный результат).
При отсутствии антигена в исследуемом образце эритроциты не образуют агглютинатов с антисывороткой, при центрифугировании легко проходят через гель и оседают на дне пробирки (отрицательный результат).
Перечень необходимого оборудования, реактивов, препаратов, изделий медицинской техники
ID-центрифуга для центрифугирования карт;
пипетки полуавтоматические одноканальные со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкости 0,01; 0,05 и 0,5 мл;
штатив для пробирок и карт;
пробирки вместимостью 5 и 10 мл;
раствор для разведения 1 (модифицированный раствор бромелина);
раствор для разведения 2 (модифицированный раствор низкой ионной силы – LISS).
Технология использования способа
Для проведения исследования используют консервированную кровь или кровь, взятую без консерванта. Приготовить взвесь исследуемых эритроцитов в растворе для разведения 1, если используются ID-карты, содержащие антитела сыворотки крови человека, для чего:
выдержать раствор для разведения 1 до достижения комнатной температуры (+18° – +25°С);
в промаркированной пробирке приготовить 5%-ую взвесь типируемых эритроцитов в растворе для разведения 1, поместив в пробирку 0,5 мл раствора для разведения 1 и 0,05 мл цельной крови или 0,025 мл эритроцитарной массы;
выдержать пробирку при комнатной температуре (+18°–+25°С) в течение 10 минут.
Приготовить взвесь исследуемых эритроцитов в растворе для разведения 2, если используются ID-карты, содержащие моноклональные антитела, для чего:
выдержать раствор для разведения 2 до достижения комнатной температуры (+18° – +25°С);
в промаркированной пробирке приготовить 5%-ую взвесь типируемых эритроцитов в растворе для разведения 2, поместив в пробирку 0,5 мл раствора для разведения 2 и 0,05 мл цельной крови или 0,025 мл эритроцитарной массы.
С промаркированной ID-карты снять защитную фольгу и внести в каждую пробирку по 0,01 мл исследуемых эритроцитов, приготовленных в растворе для разведения 1, или по 0,0125 мл (12,5 мкл) исследуемых эритроцитов, приготовленных в растворе для разведения 2.
Центрифугировать ID-карты в центрифуге в течение 10 минут.
Оценить результаты исследования (рисунок 1, таблица 4).
Рисунок 1. Оценка результатов реакции агглютинации
в гелевом тесте
Характер агглютинации при выявлении антигенов в гелевом тесте зависит от количества антигенных детерминант, присутствующих на одном эритроците. Образцы эритроцитов с большим количеством антигенных детерминант имеют характер агглютинации 4+, характер агглютинации эритроцитов со слабыми вариантами антигенов соответствует диапазону от 3+ до +.
Таблица 4
Результаты исследования антигенов группы крови АВ0 и
резус-принадлежности в ID-карте АВ0/Rh
Выявляемые антигены |
Контроль |
Заключение об АВ0 и резус-принадлежности исследуемого образца крови |
||||
А |
В |
АВ |
D |
CDE |
||
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
AB Rh+ |
+ |
+ |
+ |
- |
- |
- |
AB Rh- |
+ |
- |
+ |
+ |
+ |
- |
A Rh+ |
+ |
- |
+ |
- |
- |
- |
A Rh- |
- |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
B Rh+ |
- |
+ |
+ |
- |
- |
- |
B Rh- |
- |
- |
- |
+ |
+ |
- |
0 Rh+ |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
0 Rh- |
Специфичность исследования подтверждается по отрицательному результату в пробирке с контролем ID-карты. При наличии положительных и слабоположительных реакций в контроле необходимо повторить исследование с отмытыми эритроцитами и провести дополнительное исследование по выявлению холодовых и тепловых аутоантител. В случае выявления аутоантител типирование антигенов эритроцитов проводят после предварительной аутоадсорбции и элюции аутоантител.
Подробная инструкция по применению прилагается к каждому набору идентификационных карт ID-ДиаМед фирмы «ДиаМед» (Швейцария) или других производителей.
Дополнение 3