Фотоэлектроколориметрический метод анализа глюкозы

Фотоэлектроколориметрия так же как и спектрофотометрия, чаще всего используется для определения препаратов биологически активных веществ и и х синтетических аналогов.

Проведение фотоэлектроколориметрического анализа возможно благодаря способности глюкозы давать большое количество окрашенных соединений со многими органическими и неорганическими реагентами.

В результате проведения фотометрической реакции исследуемый компонент – глюкозу переводят в окрашенное соединение:

Глюкоза + реагент = окрашенное соединение

Условия проведения фотометрической реакции должны обеспечивать полноту образования и устойчивость получающегося окрашенного комплекса:

на образование окрашенного комплекса существенное влияние оказывает рН раствора. Необходимо изучить влияние рН на интенсивность окраски раствора при постоянных концентрациях глюкозы и реагента.
реагент добавляют к глюкозе в количестве достаточном для обеспечения полного перевода глюкозы в окрашенное соединение. Оптимальной концентрацией реагента является такая, выше которой дальнейшее образование реагента не увеличивает светопоглощение раствора.
интенсивность окраски может измениться во времени, поэтому надо исследовать зависимость А=f(t), на основании которой установить оптимальное время для проведения фотометрической реакции.

Количество глюкозы можно определять или по количеству выделившегося окрашенного соединения или по избытку непрореагировавшего реагента (если он окрашен).

Реагентом фотометрической реакции может служить раствор калий гексацианоферрата (III). Определение основано на том, что глюкоза в щелочной среде может восстанавливать в . Количество глюкозы можно определить или по количеству выделившегося или по остатку непрореагировавшего .

нм

Методика определения.

Аппаратура и реактивы

а) Фотоэлектроколориметр любой марки.

б) Спектрофотометр

Стандартный раствор глюкозы (2 мг/мл)

(растворяют 1,09 г чистой кристаллической глюкозы в мерной колбе вместимостью 500 мл).

Растворяют

(растворяют 2 г соли в 200 мл воды).

Раствор KOH, 1,25 моль/л
7 конических колб, водяная баня, мерные пробирки (50 мл).

Ход работы:

Построение калибровочного графика:

В 7 конических колб наливают по 10 мл раствора , 5 мл раствора КОН и соответственно 1; 2; 3; 4; 5; 6; 7 мл стандартного раствора глюкозы. В каждую пробирку добавляют дистиллированную воду до метки. Растворы кипятят на водяной бане 1 минуту, охлаждают, измеряют оптическую плотность (А) при нм в кювете, с толщиной поглощающего слоя l=10 мм. Поглощение раствора обусловлено непрореагировавшим избытком , поэтому оптическую плотность измеряют от колбы №7 до колбы №1. реакция между глюкозой и протекает не строго стехиометрически, поэтому получающийся график не прямолинеен. Однако наличие семи точек для построения калибровочного графика позволяет построить его достаточно достоверно.

Таблица для построения калибровочного графика

№ колбы	1	2	3	4	5	6	7	8
Прилито стандартного раствора глюкозы (мл)	1	2	3	4	5	6	7	х
С·10^-4(моль/л)	5,6	11,2	16,8	22,4	28	33,6	39,2	Х
А₁	0,157	0,143	0,123	0,110	0,089	0,045	0,026	0,035
А₂	0,158	0,145	0,120	0,112	0,091	0,043	0,030	0,033
А₃	0,159	0,147	0,117	0,109	0,090	0,047	0,034	0,037
А_ср	0,159	0,145	0,120	0,110	0,090	0,045	0,030	0,035