Набивка колонки

Набивка колонки - очень ответственный процесс, от качества выполнения которого практически полностью зависит успех дальнейшего эксперимента. Основной опасностью при набивке являются неоднородности, которые могут образоваться по разным причинам и привести к размыванию пиков и, в конечном итоге, к неудовлетворительному результату хроматографии. Неоднородности могут образовываться от:

1) неравномерного заполнения колонки в результате слишком быстрого осаждения сорбента или неравномерности осаждающего потока;

2) посторонних включений в сорбент (пузырьки воздуха, грязь, колонии микроорганизмов и т.д.);

3) неоднородности размеров гранул сорбента.

Для недопущения неравномерного заполнения колонки необходимо заполнять колонку однородной, свежеприготовленной  суспензией постепенно добавляя новые порции суспензии до заполнения сорбентом требуемого объема колонки, после этого следует установить верхний адаптор не допуская образования пузырьков воздуха и пустить поток подвижной фазы для окончательного осаждения сорбента. Следует отметить, что для достижения нужного результата обязательным условием является чистота мембран и одинаковая проницаемость по всей площади.

Типы сорбентов

Поскольку частицы сорбента имеют большую поверхность и состоят из ряда более и менее глубоких пор, то величина этих пор будет влиять на скорость массопереноса и размывание хроматографического пика. Учитывая это обстоятельство, были предложены поверхностно-пористые сорбенты для жидкостной хроматографии. Использование поверхностно-пористых сорбентов позволило значительно повысить эффективность колонок ВЭЖХ в начале семидесятых годов*.

Однако, в последние годы эти сорбенты применяются редко. Колонки, заполненные поверхностно-пористыми сорбентами, уступают объемно- пористым сорбентам с малым размерам частиц по эффективности.

Уменьшение диаметра частицы, сокращает длину диффузионного пути молекул анализируемого вещества в порах сорбентов обоих типов.

Типы сорбентов для ВЭЖХ*. а – поверхностно-пористый; б - объемно-пористый; в – объемно-пористый с частицами малого диаметра.

Применение

В настоящее время ВЭЖХ по темпам развития вышла на первое место среди инструментальных методов, этот метод даёт возможность исследования практически любых объектов без каких-либо ограничений по их физико-химическим свойствам, например, по температурам кипения или молекулярной массе. Метод ВЭЖХ применяется в санитарно-гигиенических исследованиях, экологии, медицине, фармацевтике, нефтехимии, криминалистике, для контроля качества и сертифкации продукции.

Сегодня ВЭЖХ представляет собой хорошо оформленный инструментальный метод и находит широкое применение в таких областях, как химия, нефтехимия, биология, биотехнология, медицина, пищевая промышленность, охрана окружающей среды, производство лекарственных препаратов и во многих других.

Анализ многокомпонентных лекарственных смесей

Доказательство подлинности

Определение подлинности лекарственных средств методом ВЭЖХ основано на сопоставлении хроматографической подвижности испытуемого образца с подвижностью эталона. В качестве эталона может использоваться стандарт данного лекарственного вещества либо другое лекарственное вещество.

Данное испытание обеспечивает значительно большую достоверность, чем аналогичный эксперимент, выполняемый методом ТСХ.

Использование ВЭЖХ для доказательства подлинности особенно целесообразно, если необходимо идентифицировать один препарат из группы близкородственных

Определение примесей

Возможны несколько подходов к оценке чистоты лекарственных препаратов. В одних случаях анализ преследует цель контроля определенной примеси, существенно ухудшающей качество продукта: например, когда примесь токсична по сравнению с основным соединением. Ее содержание нормируется конкретным показателем, и именно эту примесь необходимо оценить количественно по возможности более строгим методом.

Универсальность ВЭЖХ делает этот метод незаменимым не только в контроле производства и качества продукции, но в первую очередь на ранних стадиях разработки новых лекарственных средств. Можно утверждать, что своевременное привлечение ВЭЖХ помогает уяснить многие аспекты поведения изучаемых веществ и потому способствует как повышению качества, так и ускорению темпов научно-технических разработок.