Реакция торможения гемагглютинации

Реакция вирусной гемап лютинации

Некоторые вирусы агглютинируют эритроциты определён­ных видов птиц и млекопитающих. Вирусы гриппа агглютини­руют эритроциты кур, морских свинок, вирусы клещевого энце­фалита - эритроциты цыплят, гусей, аденовирусы - эритроциты мышей, обезьян, свиней.

Реакцию вирусной гемагглютинации ставят на предметных стёклах, в пробирках, в лунках полистероловых планшетов. Ком­поненты реакции - вируссодержащий материал (аллантоисная и амниотическая жидкости), 1% взвесь эритроцитов к исследуемо­му вирусу. Постановка реакции на стекле: перечисленные компо­ненты смешивают и через 1-2 мин отмечают результат реакции. При положительном результате регистрируют появление хлопье­видного осадка, агглютинацию эритроцитов.

Постановка реакции в пробирках:

Готовят ряд двукратных разведений вируссодержащего мате­риала с помощью изотонического раствора хлорида натрия (1:2,1:4, 1:8,1:32, 1:64), во все пробирки вносят 1% взвесь эритро­цитов. Пробирки встряхивают и оставляют при 37, 22 или 4°С в зависимости от свойств вируса. Регистрация реакции проводится после оседания эритроцитов в контроле. В положительном случае степень агглютинации эритроцитов отмечают плюсами (оценка по 4х-крестовой системе). При чёткой реакции ++++ образуется плёнка из склеенных эритроцитов на дне пробирки (зонтик). Ус­танавливают титр реакции, за титр принимают предельное раз­ведение вируссодержащего материала, которое вызвало агг­лютинацию эритроцитов на ++. Указанное разведение содер­жит одну гемагглютинирующую единицу вируса (1АБ).

Видовую принадлежность вирусов устанавливают' с помо­щью РТГА (реакции торможения гемагглютинации).

РТГА, Сущность реакции

При взаимодействии вирусных антигенов (гемагтлюти-нинов) и специфических антител происходит образование иммунного комплекса антиген-антитело, торможение гемагг­лютинации.

С помощью данной реакции возможно проведение видовой идентификации вирусов и осуществление серологической диаг­ностики вирусных инфекционных заболеваний.

В качестве антигена в реакции используют тот же матери­ал, что и в реакции гемагглютинации. При типировании вирусов применяют нативный инфекционный материал, а при титровании антител в сыворотках больного — инфекционный материал, со­держащий вирус известного типа или инактивированный гемагг-лютинирующий диагностикум.

Для ориентировочного типирования выделенных вирусов ис­пользуют капельный метод на стекле, а для окончательного уста­новления типовой принадлежности выделенного вируса и титро­вания антител в сыворотках реконвалесцентов применяют реак­цию в развёрнутом ряду.

При постановке ориентировочной реакции торможения гемагглютинации (РТГА) на стекле на чистые обеззараженные предметные стекла наносят на некотором расстоянии друг от друга по одной капле типоспецифических иммунных и нормаль­ной сывороток. Затем к ним добавляют по одной капле испытуе­мого материала и 5% взвеси эритроцитов. Компоненты переме­шивают и учитывают результаты после появления хлопьевидного осадка в смеси, содержащей нормальную сыворотку.

Иммунная сыворотка, специфическая для выделенного виру­са, подавляет его гемагглютинирующую активность, и эритроци­ты не агглютинируются.