Культуральная посуда и расходные материалы

Посуда для работы с культурами клеток максимально унифицирована во всем мире. Это во-первых связано с тем, что культуры клеток очень чувствительный объект исследования, и данные, которые получают ученые е во всем мире, должны быть максимально воспроизводимы. А во-вторых, эта посуда должна быть совместима с используемым оборудованием (микроскопы, фотометры, инкубаторы и т.д.). Отсюда и некие общепринятые стандарты объемов, диаметров, качества материала и т.д. культуральной посуды, или как еще говорят – культурального пластика.

К ультуральные флаконы (матрасы) и чашки Петри . Особенности, на которые следует обращать при работе с культуральным матрасом – наличие встроенного HEPA-фильтра в крышке (А). Эта так называемая вентилируемая крышка обеспечивает, во-первых, улучшение газообмена культуры, а во-вторых, дополнительно снижает риск заражения культуры из воздуха вне флакона. Такая вентиляция необходима для роста ряда нормальных адгезионных культур (фибробластов, эпителиальных клеток, например). Для суспензионных культур (лейкоциты, например) такая вентиляция не нужна (Б). Стоит также обращать внимание на материал матраса или чашки. Если планируется использовать флуоресцентную микроскопию клеток, то необходимо узнать, не обладает ли материал посуды аутофлуоресценцией. Кроме того, в зависимости от нужд исследователя, выпускаются культуральные флаконы и чашки Петри с так называемой «обработанной поверхностью» – покрытием из ряда веществ, стимулирующих в той или иной степени прикрепление клеток адгезионных культур ко дну - коллагеном, полилизином и др.

Культуральные планшеты. Культуральные планшеты используют в зависимости от поставленной задачи. Как правило, они изготавливаются из пластика с адгезивным покрытием или без него. К планшетам, которые планируется использовать для дальнейшего высокочувствительного анализа растущих в них клеток предъявляются особые требования материала, которые нужно уточнять у поставщика. Так, например, при использовании таких методов, как планшетная колориметрия, флуориметрия и конфокальная микроскопия, желательно использовать планшет из черного пластика с дном из фтороуглеродной пленки, минимализирующей искажения флуоресцентного изображения или регистрацией приборами интенсивности окрашивания или флуоресценции исследуемого объекта в лунках планшета.

К роме того, в зависимости от операций, которые планируется проводить с клетками в планшете, можно выбрать планшеты со съемными лунками-вкладышами, например.

Следует четко понимать разницу между культуральными планшетами и планшетами диагностическими – например, иммунологическими и ПЦР-планшетами. Эти планшеты служат для анализа продуктов метаболизма клеток и их поверхность неприспособленна для адгезии и роста клеток.

Д озирующие приспособления. Для дозирования жидкостей (объемы от 1 мл) обычно используют стерильные серологические пипетки однократного использования (А) и автоматические дозаторы (Б) со сменными носиками (объемы менее 1 мл). Автоматические дозаторы бывают в свою очередь с механическим или электронным управлением. Забор и дозирование жидкостей серологическими пипетками осуществляется специальным электрическим ручным насосом (В). Для работы под ламинаром выделяют отдельный серологический насос и набор автоматических дозаторов, которые будут использоваться только под ламинаром, и находиться в нем стационарно. Для работы с автоматическими пипетками используют стерильные носики для автоматических пипеток. Наконечники дозаторов одноразовые и повторно не используются.

П робирки общего и спецназначения. Можно выделить 4 типа пробирок, которые при культивировании клеток используются наиболее часто. 1-й тип – центрифужные конические пробирки (А) – используются для центрифугирования, например суспензии клеток, с целью отбора клеточного материала и т.д. Коническое дно изготавливается для удобства отбора при малом количестве осадка. 2-й тип – модифицированные конические центрифужные пробирки с встроенным фильтром. В зависимости от пористости фильтра используют для разделения элементов крови, получение клеточного материала при фильтрации суспензий клеток, концентрировании белковых растворов и т.д. Следует обращать внимание на пористость фильтра и его материал, из которого он сделан, соответствует ли он поставленной задаче (способность сорбировать белки, устойчивость к используемым реагентам и т.д.). 3-й тип – микропробирки – используют для пробоподготовки и хранения доз веществ, используемых в сверхмалой концентрации или количестве (факторы роста, например), а также центрифугировании малых объемов. Прежде чем работать с этими тремя типами пробирок, следует узнать пределы нагрузок, выдерживаемые пробирками при центрифугировании. 4-й тип – криопробирки (Г). Используются для замораживания и хранения клеток при температуре жидкого азота.

Фильтры-насадки на шприцы. Используется для подготовки проб, очистки и стерильной фильтрации малых объемов жидкостей до 100 мл. При выборе фильтра для работы, в зависимости от поставленной задачи, нужно учитывать материал фильтрующей мембраны, диаметром пор мембраны, и объем фильтруемой жидкости. Материалом мембраны может быть ацетат целлюлоза, полиэфирсульфон, регенерированная целлюлоза, п олитетрафторэтилен, стекловолокно. Каждый из этих материалов рассчитан на определенное применение. Так например, ацетат целлюлозы обладает очень низкой степенью адсорбции белков, а полиэфирсульфон, напротив, высокой степенью адсорбции белков. Поэтому первый материал подходит для стерильной фильтрации белковых растворов, второй – нет. Кроме того, нужно знать диапазон pH и температуры, при котором материал фильтра сохраняет структурную целостность, а также гидрофобен ли материал фильтра, или гидрофилен.

Применение	Гидрофобный материал					Гидрофильный материал
	Размер пор фильтрующей мембраны, мкм
	0,2	0,45	0,8	1,2	5,0	0,2	0,45
Удаление клеточных остатков вместо центрифугирования	+	+	+
Приготовление и очистка рабочих растворов красителей и индикаторов		+	+
Стерильная вентиляция культуральных сосудов						+	+
Стерилизующая фильтрация питательных сред и воды	+
Очистка растворов от взвешенных частиц перед аналитическими измерениями (фотоколориметрия, спектроскопия)		+	+	+	+
Фильтрация эллюирующих буферов перед подачей их в колонку при ВЭЖХ		+
Очистка газов для газовой хроматографии перед подачей в колонку.						+	+
Очистка сыворотки и аминных жидкостей при фотометрическом определении билирубина			+	+
Осветляющая фильтрация буферов и загустителей для ПАГ-электрофореза		+	+	+
Очистка сыворотки для ПАГ-электрофореза		+	+

Скребки. Используют для эффективного удаления адгезивных клеток с поверхности культуральных сосудов. Лезвие скребка обычно изготавливается из полиэтилена, во избежание повреждения клеток. Выпускаются с поворотным лезвием (для облегчения снятия клеток с труднодоступных мест флакона – в углах или под горлом) и с фиксированным лезвием.

К амера для подсчета клеток. Предназначена для подсчета клеток в суспензии под микроскопом в проходящем свете в ручном режиме (исследователем) или в автоматическом режиме (прибором-цитометром). Камеры для использования в ручном режиме обычно содержат от 1 до 4-х рабочих полей для подсчета. Камеры для автоматических цитометров содержат обычно одно рабочее поле.