3. Принцип работы прибора

Собранный блок фильтрации (прибор включен в сеть) при закрытом затворе (рычаг затвора поднят вверх) заполняется доверху электропроводящей жидкостью (суспензией клеток или ресуспендирующим раствором). Между колонкой и верхним резервуаром помещается фильтр. Сверху на резервуаре помещается датчик (надевается как колпачок - сверху до упора), соединённый с электронным блоком регистрации. Если на табло блока регистрации были до этого какие-нибудь показания (при первом включении прибора в сеть показания табло «00.99»), то при погружении всех трёх электродов в жидкость, налитую в кювету верхнего резервуара (до верхней кромки), они автоматически сбрасываются на нуль (обнуляются – «00.00»).

Затвор блока фильтрации подпружинен и открывается резко, - щелчком. При открывании затвора под действием силы тяжести жидкость начинает вытекать через фильтр, соответственно снижается и её уровень в резервуаре.

При опускании жидкости ниже уровня короткого электрода (что соответствует вытеканию примерно 30 мкл раствора) автоматически начинается отсчёт времени на табло блока регистрации. При опускании жидкости ниже уровня остальных двух электродов (что соответствует вытеканию ещё 250 мкл) отсчёт времени автоматически останавливается. Показания на табло (время фильтрации 250-ти мкл жидкости) сохраняются до следующего замыкания всех электродов (следующего цикла измерения скорости фильтруемости, когда датчик снова надевается на кювету верхнего резервуара).

Благодаря оригинальной конструкции блока регистрации и датчика полностью исключается влияние степени поляризации и растворения электродов. Соответственно эти процессы не сказываются на результатах измерений, исключено также и влияние самого датчика на биофизические характеристики суспензии клеток.

ПРИБОР ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДЕФОРМИРУЕМОСТИ

ЭРИТРОЦИТОВ АВТОМАТИЧЕСКИЙ

ИДА-4

ИНСТРУКЦИЯ ПО ЭКСПЛУАТАЦИИ

Содержание

1. Подготовка прибора к работе

2. Приготовление рабочей суспензии

3. Проведение измерений

4. Вычисление индекса ригидности

5. Завершение работы

1. Подготовка прибора к работе

Укрепить кронштейн с затвором на высоте 10-20 см. над поверхностью рабочего стола на каком-нибудь штативе за стержень.

Установить в кронштейн, укрепленный на стержне, нижнюю часть резервуара, заполнить ее при закрытом затворе физиологическим раствором, положить сверху (на поверхность жидкости) мембранный фильтр (мембранный фильтр выглядит как тонкая прозрачная пленка, которую пинцетом нужно снять с защитной голубой бумажки) и навинтить верхнюю часть резервуара до упора. При этом необходимо следить, чтобы под фильтром не оставалось пузырьков воздуха. Под резервуаром установить ёмкость для сбора вытекающей жидкости, например чашку Петри.

Прибор готов к измерениям.

2. Приготовление рабочей суспензии

Суспензию эритроцитов для работы на приборе ИДА-4 можно готовить из цельной крови или из отмытых от плазмы эритроцитов. В первом случае необходимо иметь не менее 150 мкл капиллярной или венозной крови, взятой на гепарине, ЭДТА или цитратном растворе. Непосредственно перед измерением кровь разбавляют ресуспендирующим раствором. Если используются фильтры F-3-17 (3-средний диаметр пор, 17-толщина пленки, измеренные в мкм) то гематокрит измеряемой суспензии эритроцитов не должен превышать 0,1%. Если в качестве консерванта использовались цитрат или ЭДТА, то ресуспендирующий раствор не должен содержать кальция (во избежание образования сгустков). Измерения следует проводить не позднее, чем через час после приготовления суспензии. В случае работы с отмытыми клетками целесообразно, чтобы исходная суспензия имела гематокрит 40-70% и находилась в холодильнике или при комнатной температуре не более 4-х часов. Соответствующая ресусперндирующая среда должна содержать глюкозу и альбумин. Ресуспендирующая среда для отмытых эритроцитов или крови, взятой на гепарине может содержать также кальций.

Непосредственно перед измерением исходную суспензию отмытых эритроцитов разбавляют ресуспендирующей средой (можно без альбумина и глюкозы) до гематокрита не превышающего 0,1%.

В качестве примера приведен состав ресуспендирующей среды, забуференной HEPES-ом:

NaCl - 145 мМ - 8480 мг/л;

KCl - 5 мМ - 372 мг/л;

HEPES - 5 мМ - 1190 мг/л;

CaCl₂ 2H₂O - 50 мг/л;

Альбумин сывороточный - 5000 мг/л;

Глюкоза - 1000 мг/л;

pH = 7,4.

Pекомендуется перед проведением измерений профильтровать ресуспендирующий раствор через фильтр с порами 0,2 мкм для удаления взвешенных частиц (пыль, бактерии), влияющих на измерения. Следует иметь в виду, что стерильность раствора не гарантирует отсутствие посторонних частиц на результаты измерений.