5. Реакция связывания комплемента.

Эта реакция относится к реакциям иммунитета между антигенами (АГ) и антителами (АТ). Детерминанта АГ связывается с активным центром АТ. Соединение АГ и АТ осуществляется посредством водородных и гидрофобных связей, взаимодействия ионов, кулоновских и ван-дер-вальсовых сил. Прочность соединения АГ с АТ обеспечивается не только силами связывания, но и оптимальной стерической адаптацией активного центра АТ к АГ-детерминанте.

Серологические реакции протекают в две фазы. Первая – специфическая невидимая, - заключается во взаимодействии АГ с АТ. Вторая фаза – видимая, - проявляется в зависимости от типа реакции, который определяется свойствами АГ, АТ и другими ингридиентами реакций. В основе РСК лежит реакция лизиса антигена (цитолиза или бактериолиза) под действием антител с участием комплемента.

Ингредиенты реакции: 3 (три) системы, 5 (пять) компонентов. Бактериологический (вирусологический) метод. Диагностическая система: антиген (первый компонент) не известен – выделенная чистая культура; антитело (второй компонент) известен – диагностическая сыворотка (содержит известные АТ, получена путем иммунизации животного известным АГ). Комплемент (вторая система, третий компонент) – получается из сыворотки крови морской свинки. Индикаторная система (здесь все известно): эритроциты барана (антиген) (четвертый компонент) и гемолитическая сыворотка (антитела, получаемся путем иммунизации кролика эритроцитами барана) (пятый компонент).

Серологический метод. Диагностическая система: антиген (первый компонент) известен – диагностикум; антитело (второй компонент) не известен –сыворотка крови обследуемого (содержит не известные АТ). Комплемент (вторая система, третий компонент) – получается из сыворотки крови морской свинки. Индикаторная система (здесь все известно): эритроциты барана (антиген) (четвертый компонент) и гемолитическая сыворотка (антитела, получаемся путем иммунизации кролика эритроцитами барана) (пятый компонент).

Система комплемента представлена большой группой взаимодействующих между собой белков (20 белков идентифицированы иммунологически) и гликопротеидов сыворотки крови, обозначаемых символом «С», а девять основных компонентов комплемента – цифрами: С1, С2, С3, … С9. Каждый компонент расщепляется на субъединицы, обозначаемые буквами – Сlq, C3a, C3b и т.д. Вырабатываются белки комплемента макрофагами, нейтрофилами, клетками печени и составляют 5-10% всех белков сыворотки. В организме комплемент находится в неактивном состоянии и активируется рядом факторов. После активации его действие носит каскадный характер, что приводит к образованию мембраноатакующего комплекса и последующему лизису клетки мишени.

Функция системы комлемента: Лизис чужеродных клеток и бактерий; Опсонизация чужеродных клеток, включая бактерии, которые становятся более доступными для макрофагов благодаря феномену иммунного прилипания (обусловлен фиксацией С3b компонента на бактериях и наличием рецептора для С3b на макрофагах). Стимуляция хемотаксиса. Стимуляция фагоцита (обусловлена присоединением к иммунному комплексу Cq или C3b). Опосредует процесс воспаления (повышение сосудистой проницаемости – С5а, С3а; усиление выброса биологичеси активных веществ- анафилотоксинов – С5а, С3а).

Известны два основных пути активации комплемента: классический (активируется комплексом антиген-антитело – IgG, Ig M); альтернативный (индуцируется ЛПС, антигенами вирусов, грибов, простейших, иммунными комплексами с Ig A, Ig E и т.д.). С3 компонент комплемента играет центральную роль в обоих путях активации комплемента.

Реакция основана на способности комплемента – комплексной системы белков нормальной сыворотки позвоночных, фиксироваться на комплексе АГ-АТ и последующем лизисе антигена. Самого комплемента ровно столько, чтобы он связался только с одной системой (опытной или индикаторной).

Если АГ и АТ в опытной системе соответствуют друг другу (комплементарны), то результатом этого взаимодействия является связывание комплемента. Комплемент лизирует этот комплекс и расходуется, поэтому эритроциты хоть и связываются с гемолитической сывороткой, но не могут лизироваться, так как нет комплемента и выпадают на дно пробирки в виде осадка. Таким образом, отсутствие гемолиза – положительный результат.

Индикаторная система выявляет свободный, не связавшийся комплемент. Если АГ и АТ опытной системы не соответствуют друг другу (некомплементарны) комплемент остался свободным, и он свяжется с комплексом эритроциты – гемолитическая сыворотка и будет лизировать эритроциты. Визуально видна «лаковая» кровь. Это (наличие гемолиза) означает отрицательный результат РСК.