1. Определение проводится в помещении с хорошим освещением, при температуре от 15 до 25º

2. Ампулой стандартной сыворотки без этикетки пользоваться запрещается Ход работы:

1. На белую тарелку поместить по 1 крупной капле сыворотки I, II, III, IV группы в соответствующий сектор в двух сериях.

2. Обработать спиртом и проколоть палец стерильным скарификатором. Первую каплю снимают марлевым шариком. Последующие капли при помощи стеклянных палочек помещают рядом с каждой каплей сыворотки. При этом капля вносимой крови должна быть в 5-10 раз меньше капли сыворотки.

3. При помощи разных стеклянных палочек перемешать каплю крови и сыворотки

4. Слегка покачивая тарелку наблюдать за появлением реакции агглютинации 3 мин.

5. Затем в каждую каплю добавить по 1 капле изотонического раствора хлорида натрия 0,9 %.

6. Наблюдать за реакцией еще 2 мин. (всё наблюдение длится 5 мин.). После всего делаем вывод о групповой принадлежности.

Результаты:

1. Все 3 сыворотки в обеих сериях не дают реакции агглютинации. Исследуемая кровь - I (0)

2. Реакция изогемагглютинации отрицательная с сывороткой II(А) группы обеих серий и положительная с сыворотками I (0) и III (В) групп. Исследуемая кровь – II (А)

3. Реакция изогемагглютинации отрицательная с сывороткой группы III (В) обеих серий и положительная с сыворотками I (0) и II (А) групп. Исследуемая кровь – III (В)

4. Сыворотки I (0), II (А), III (В) дают положительную реакцию в обеих сериях. Кровь принадлежит IV (АВ) группе.

5. Прежде чем дать такое заключение, необходимо провести реакцию изогемагглютинации со стандартной сывороткой IV (АВ) группы по той же методике. Отрицательная реакция изогемагглютинации позволяет окончательно отнести исследуемую кровь к IV (АВ) группе.

Техника определения групп крови с помощью цоликлонов Анти-а, Анти-в, Анти – ав

Оборудование:

1. Эритротест - цоликлоны Анти-А, Анти-В, Анти – АВ

2. Сухие чистые пипетки

3. Изотонический раствор хлорида натрия 0,9 %.

4. Сухая тарелка.

5. Скарификаторы

6. Стерильные марлевые шарики

7. Спирт

8. Стеклянные палочки

Ход работы:

1. Нанесите на планшет или пластину индивидуальными пипетками Цоликлоны Анти – А, Анти – В и Анти АВ по одной большой капле (0,1мл.) под соответствующими надписями.

2. Рядом с каплями антител нанесите по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01-0,03мл.)

3. Смешайте кровь с реагентом.

4. Наблюдайте за ходом реакции с Цоликлонами визуально при лёгком покачивании пластины или планшета в течение 3 минут. Агглютинация эритроцитов с Цоликлонами обычно наступает в первые 3-5 сек, но наблюдение следует вести 3 мин. ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами

5. Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. Агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких красных агрегатов, быстро сливающихся в крупные хлопья. При отрицательной реакции капля остаётся равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются.

6. Интерпретация результатов реакции агглютинации исследуемой крови с Цоликлонами представлена в таблице.

Результат реакции* с Цоликлоном: Анти-А Анти-В Анти-АВ			Исследуемая кровь принадлежит к группе**
-	-	-	0(I)
+	-	+	А(II)
-	+	+	В(III)
+	+	+	АВ(IV)

* Знаком плюс (+) обозначено наличие агглютинации, знаком минус (-) – отсутствие агглютинации.

** Окончательно АВО принадлежность устанавливается по результатам перекрёстного определения: антигенов А и В на эритроцитах и изогемагглютининов в сыворотке.