Примерная схема окраски препаратов гематоксилин — эозином

1. Парафиновые  или замороженные срезы доводят до воды.

2. Окраска гематоксилином — в течении  3-5 минут.

3. Промывка в воде – 2 минуты.

4. Дифференцировка в спирте, подкисленном соляной кислотой (1% раствор соляной кислоты в 70 % спирте), несколько секунд с последующим восстановлением подщелоченной водой (около 1 минуты). Этот этап желателен, но не обязателен.

5. Промывка в проточной воде.

6. Ополаскивание дистиллированной водой.

7. Окраска 1 % эозином – 1-2 минуты.

8. Ополаскивание дистиллированной водой.

9. Обезвоживание в спирте – 2мин.

10. Просветление в ксилоле – 2 мин

11. Заключение среза – капля бальзама, покровное стекло.

ПРАВИЛА РАБОТЫ СО СВЕТОВЫМ МИКРОСКОПОМ

Для того, чтобы ваша работа на занятии была продуктивной и для предупреждения разрушения изучаемых на занятиях гистологических препаратов и микроскопа необходимо соблюдать при микроскопии следующие основные правила:

Необходимо взять из шкафа хранения микроскоп и коробку с гистологическими препаратами с одним номером. Номер записать в альбом. На последующих занятиях вы будете пользоваться только этим комплектом.

Микроскоп устанавливается на левую от вас часть стола (в правой части располагается альбом).

Проверьте, в каком положении находится револьверное устройство микроскопа. Должен быть установлен объектив с малым  увеличением (4х или 10х), который обычно используют для начала работы. При правильной установке в определенном положении объектива слышен щелчок и рукой ощущается фиксация револьверного устройства.

Проверьте расстояние от нижнего края объектива до предметного столика микроскопа  — оно должно быть не менее 1 см.

Включите источник освещения и проверьте, виден ли в окуляре свет. При отсутствии освещенности поля зрения проверьте исправность источника света, настройку зеркала (если источник освещения внешний), открытие диафрагмы конденсора (если имеется), правильное положение  объектива.

При правильном освещении поле зрения микроскопа должно быть равномерно освещено. Темная полоска в поле зрения – окулярная указка, предназначенная для обозначения структур в препарате студентом или преподавателем. Необходимо отрегулировать яркость поля зрения настолько, чтобы освещение воспринималось комфортным для глаза.

Установить гистологический препарат на предметный столик микроскопа. Перед установкой проверить – покровное стекло должно находиться на верхней поверхности предметного стекла. Расстояние от нижнего края объектива до стекла около 1 см, гистологический срез должен быть освещен и находиться непосредственно под  объективом.

Проконтролировать, имеется ли изменение цвета в поле зрения окуляра. Если поле зрения остается светлым, необходимо перемещением препарата добиться его изменения до цвета исследуемого препарата.

Используя макровинт микроскопа (большая круглая ручка на станине) добиться появления изображения препарата в поле зрения микроскопа. Микровинтом (малая ручка на станине или круг в основании, площадке микроскопа) добиться максимально возможной резкости изображения микропрепарата.

Для увеличения изображения не касаясь препарата повернуть револьвер с объективом с большим увеличением (20х или 40х) к препарату до защелкивания фиксатора.  Осторожно, чтобы не сломать препарат, подстроить резкость изображения микровинтом!  При включенном большом увеличении извлекать гистологический препарат из-за возможности его поломки запрещается!

После завершения микроскопии препарата на большом увеличении револьвер микроскопа переводится на объектив с малым увеличением до защелкивания фиксатора и препарат убирается со столика и помещается на свое место в коробке. Микроскоп готов к микроскопии следующего препарата.

После окончания  работы микроскоп и коробка с препаратами убирается в шкаф для хранения. Проверяется: револьвер микроскопа включен  на малое увеличение, на предметном столике не гистологического препарата, в коробке для хранения препаратов нет свободных мест.

Шкаф для хранения сдается дежурному группы и лаборанту кафедры.