5.1.3. Стимулювання суперовуляції

Самки ссавців народжуються з великим (кілька десятків і навіть сотень тисяч) числом статевих клітин. Більшість з них поступово гинуть у результаті атрезії фолікулів. Однак, практично всі фолікули, що ростуть, реагують на гонадотропну стимуляцію, яка створює умови для їх дозрівання. Обробка самок гонадотропінами у фолікулярній фазі статевого циклу або в лютеальній фазі циклу в поєднанні з індукуванням регресії жовтого тіла простагландином викликає численну овуляцію або так звану суперовуляцію.

Суперовуляцію у корів-донорів викликають ін'єкцією гонадотропіну в поєднанні з простагландином й іншими біологічно активними речовинами. Час введення гонадотропних гормонів істотно впливає на рівень суперовуляції у корів. Ін'єкцію гормонів розпочинають з 8 по 14 день статевого циклу (залежно від виду препарату гонадотропіну і вибраної схеми). Зазвичай це проводять з 10 по 12 день естрального циклу, тобто в лютеальній фазі циклу (в період, коли найбільш виражена функція жовтого тіла). Введення в цей період екзогенних гонадотропінів викликає посилений ріст фолікулів. Через дві доби вводять простагландин і триразово осіменяють корову-донора з інтервалом у 12 годин. Ембріони вимивають на 7...8 добу після 1-го осіменіння.

У день початку обробки гонадотропіном досліджують стан яєчників ректальним способом, визначають розміри яєчників (наприклад, 2,5x3,0 см лівий яєчник і 1,5x2,0 см правий яєчник), якість жовтого тіла (відмінна, добра, задовільна, незадовільна); до моменту обробки гонадотропіном в яєчниках тварини має бути функціонуюче жовте тіло діаметром близько 1,5 см.

Для гормональної обробки корів використовують в основному два типи гонадотропінів − ліофілізований гонадотропін сироватки жеребних кобил (ГСЖК) і фолікулостимулюючий гормон (ФСГ), який найчастіше одержують із гіпофізу свиней. ГСЖК одержують із сироватки крові кобил у період від 40-го до 100-го дня жеребності. У цей період у крові кобил присутні високі концентрації гонадотропінів. У перший місяць жеребності виявлено високу гонадотропну активність гіпофізу і недостатню активність жовтого тіла, а трохи пізніше в матці утворюються ендометріальні чаші − тимчасові ендокринні залози, які секретують і виділяють у кров гонадотропіни, що викликають ріст і розвиток великих фолікулів. Після овуляції на їх місці утворюються жовті тіла, що виділяють додаткові кількості прогестерону.

Співвідношення ФСГ і ЛГ (лютеїнізуючий гормон) в ГСЖК впливає на ефективність суперстимуляції. Наприклад, за співвідношення ФСГ:ЛГ 1,3:1,0 ін'єкція ГСЖК коровам викликає дозрівання приблизно 6 фолікулів і овуляцію 4 яйцеклітин. Застосовується і комплексний препарат ФСГ і ЛГ (співвідношення 5:1), результати такої стимуляції значно ефективніші за рівнем суперовуляції. ГСЖК має тривалий (до 5 діб) період напіврозпаду в організмі тварини, тому перевагою його використання є виконання лише однієї ін'єкції для появи суперовуляції. Це дозволяє знизити витрати праці і зменшити стресову дію на тварин. Активність ГСЖК позначається в інтернаціональних (ІЕ, IU) або мишиних (м.е., т.и.) одиницях дії. Одна ІЕ еквівалентна близько 2,33...2,43 м.е. Звичайна доза ГСЖК, що вводиться одноразово внутрішньом'язово, становить 2500...3000 ІЕ. Але недолік застосування ГСЖК пов'язаний з тим, що великі його дози можуть викликати кісти яєчників. Кіста яєчника являє собою порожнину із серозним або слизистим вмістом і утворюється із фолікулів, які не розірвалися в результаті переродження і скупчення в них рідини. Такі кісти називають фолікулярними. Причини виникнення кіст в яєчниках пов'язані з невідповідним годуванням, відсутністю моціону, запальними процесами в матці та ін. Кіста яєчника порушує його функцію і тому виникають перегули. Кісти при лікуванні можна роздавлювати пальцями, масажуючи яєчники через пряму кишку. Проте кісти часто після роздавлювання регенерують і тому їх доводиться роздавлювати кілька разів.

ГСЖК вводять на 8... 13 день циклу, найкраще на 10... 12 день, тобто в середині циклу, коли найбільш висока активність жовтого тіла яєчника для упередження передчасної овуляції через утворення великої кількості естрогену в дозріваючих фолікулах. Простагландин F2 вводять внутрішньом'язово дозою 500 мкг (2 мл препарату Естрофан − лютеолітичний аналог простагландину) за 48 годин після введення ГСЖК. Охота у корів наступає за 48 годин після введення Естрофану.

Для викликання суперовуляції у корів застосовують декілька схем гормональної обробки. Найчастіше застосовують таку: з метою підвищення виходу ембріонів тваринам-донорам на початку прояву охоти внутрішньом'язово ін'єктують вітаміни А і Е. Також, одночасно з кормом, один раз на добу протягом 18...25 днів дають йодний калій дозою 100...200 мг на одну голову. Під час уведення гонадотропіну додатково ін'єктують половину дози вітамінів А і Е (табл. 6).

Таблиця 6

Схема обробки корів для викладання суперовуляції

День естрального циклу	Назва препарату	Доза
2	Вітамін А Вітамін Е Йодний калій	150000 м.о. 100 мг 100...200 мг
10...12	ГСЖК ВітамінА Вітамін Е	2500...3000 IE 75000 м.о. 50 мг
12...14	Простагландин клопростенола або ПГF2	500 мкг 30мг
14...16	Охота і осіменіння
21...23	Нехірургічне вимивання ембріонів

Недоліком застосування ГСЖК є важкість підбору точної дози цього препарату. За введення підвищених доз може відбутися кістозне переродження яєчників. Крім того, введення ГСЖК часто призводить до прояву небажаних імунних реакцій, які супроводжуються утворенням антитіл. У цьому разі повторні обробки ГСЖК безрезультатні протягом 60 днів через тривалу дію ГСЖК. Для нейтралізації надлишків сироваткового гонадотропіну, підвищення заплідненості яйцеклітин і якості ембріонів рекомендують застосовувати антисироватку до ГСЖК. її вводять внутрішньом'язово через 24 години після початку прояву охоти і після другого осіменіння дозою 1 ...2 мл залежно від кількості ГСЖК, для забезпечення нейтралізації не менше однієї третини вживаної дози ГСЖК. Більш раннє введення антисироватки призводить до зниження реакції яєчників на ГСЖК у корів-донорів.

За використання ГСЖК і антисироватки стабільні результати одержують при двох повторних обробках тварин. Подальші обробки по цій схемі рівень суперовуляції не знижують, проте зменшують кількість реагуючих на суперстимуляцію тварин (до 50% за третьої обробки) і вихід ембріонів хорошої якості.

ФСГ одержують із гіпофізу тварин, найчастіше свиней. ФСГ має нетривалий період напіврозпаду (до 6 год.). Тому його вводять в організм протягом 4...5 днів уранці і увечері з інтервалом між ін'єкціями 12 год. Введення препаратів ФСГ разом з простагландином Р2_а має переваги перед ГСЖК. По-перше, він забезпечує більший вихід повноцінних ембріонів. ФСГ також знижує відмінності в результатах реакції яєчників окремих корів, дає стабільніші результати. На відміну від ГСЖК за використання ФСГ методику обробки можна стандартизувати (у разі застосування ГСЖК співвідношення в ньому ФСГ і ЛГ коливається залежно від серії). Крім того, препарати ФСГ, на відміну від ГСЖК, не викликають імунної реакції та вироблення антитіл і не спричиняють кістозних змін в яєчниках. Добре зарекомендували себе препарати «ФСГ-П» («FSH-P», США), «Фолікотропін» (Spofa, Чехія), «ФСГ-супер» (м. Боровськ, Росія).

Застосовують різні схеми введення ФСГ. Найбільшого поширення набули схеми (табл. 7) з щоденним зменшенням кількості введеного препарату (хоча застосовуються схеми і з однаковою кількістю гормону), при загальній дозі від 32 до 50 мг ФСГ. Ін'єкції ФСГ починають на 8... 10 день естрального циклу. Кращі результати одержують за введення ФСГ, починаючи з 10 дня циклу.

Таблиця 7

Схема введення ФСГ коровам-донорам ембріонів

День естрального циклу	Назва препарату	Доза
8...10	ФСГ-Р	12мг/15мг
9…11	ФСГ-Р	10мг/12мг
10…12	ФСГ-Р Простагландін F2 клопростенола або ПГF2	6мг/10мг 500мкг 30мг
11…13	ФСГ-Р	5мг
12…14	Охота і осіменіння
19…21	Нехірургічне вимивання ембріонів
Усього ФСГ		32мг/42мг

ФСГ вводять внутрішньом'язово в область крижів. Залишок розведеного ФСГ заморожують і зберігають до наступної обробки.

Допускається лише одноразове заморожування. Зберігання розчиненого ФСГ в холодильнику за температури +5°С допускається в межах 12 годин, після чого його активність знижується.

Недоліком ФСГ є необхідність багатократних ін'єкцій. У зв'язку з цим розроблявся спеціальний препарат Пролонгон, який продовжував би дію ФСГ і зробив можливим його одноразову ін'єкцію. Проте, цей препарат поступається за своєю ефективністю багатократному введенню ФСГ і не набув широкого розповсюдження в практиці трансплантації.