Контрольные вопросы

1. Что происходит в организме человека при отсутствии или недостатке витаминов в пище? Совместимые и несовместимые витамины. Примеры.

2. Использование витаминов в пищевой промышленности.

3. Количественное определение витамина С. Принцип метода.

4. Количественное определение витамина Р. Принцип метода.

5. Что происходит с витаминами при нагревании?

6. Какова устойчивость витаминов под действием света?

7. Что такое явление синергизма? Поясните на примере витаминов С и Р.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №11.

Открытие ферментов в биологических объектах

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ: Выделить ферменты разных классов из различных биологических объектов.

Теоретические основы занятия

Ферменты — это белки, обладающие каталитической активностью. В клетках и жидкостях организма они выполняют роль биологических катализаторов, осуществляя свое действие путем снижения энергии активации.

Источником для получения ферментов служат различные биологические объекты: свежие и свежезамороженные животные и растительные ткани, семена растений, биологические жидкости, микроорганизмы. Извлекают ферменты из этих объектов посредством экстрагирования водой, водными растворами глицерина, нейтральных солей, буферными растворами при одновременном механическом разрушении клеточных структур.

11.1. Открытие альдегидоксидазы в сыром молоке

Альдегидоксидаза относится к классу оксидоредуктаз. Окисляемыми субстратами, на которые действуют оксидоредуктазы, могут быть спиртовая группа (–ОН), альдегидная (–СНО), кетонная (- СО), этильная (–СН2–СН2–) и др., а также восстановленные формы пиридиновых коферментов — никотинамидадениндинуклеотида (НАД) и никотинамидадениндинуклеотидфосфата (НАДФ) и др.

Ход работы

В три пробирки наливают по 5мл свежего молока. Одну пробирку кипятят в течение 2-3 минут и остужают (1 пробирка). В 1 и 2 пробирки наливают по 1мл 0,4% раствора формалина, а в 3 пробирку - 1мл воды. Во все три пробирки приливают по 1мл 0,01% раствора метиленового синего.

Содержимое пробирок хорошо перемешивают и заливают в каждую по 3-4 капли вазелинового масла для предохранения жидкости от соприкосновения с кислородом воздуха.

Все три пробирки помещают в водяную баню при температуре до 40 С. Через 15-30 минут в одной из пробирок происходит обесцвечивание жидкости.

В какой и почему? Почему не происходит обесцвечивание в двух других? Сделайте вывод.

11.2. Выделение уреазы из соевой муки

Уреаза относится к классу гидролаз и отличается высокой специфичностью действия, субстратом для нее является мочевина (диамид угольной кислоты). Обнаружена во многих бактериях, грибах, растениях (особенно большие количества уреазы содержатся в семенах бобовых, например сои), а также у некоторых беспозвоночных. Уреаза – первый фермент, полученный в кристаллическом виде (Дж. Самнер, 1926). Благодаря высокой специфичности уреазы её применяют для количественного определения мочевины.

Ход работы

4-5 г соевой муки тщательно растирают в фарфоровой ступке в смеси из 48 мл воды и 2 мл 0,1н HCI и нескольких капель толуола. Смесь взбалтывают 1 час, а затем центрифугируют 15 минут при 5 тыс. об/мин. Полученный прозрачный раствор используют в качестве препарата уреазы для дальнейших опытов.