2. Методы

Протокол исследования и согласительная форма были одобрены AEMCIRB (Albert Einstein Medical Center Institutional Review Board). Списки были составлены из участников предыдущего исследования, проведенного в 1984-1985 гг.., у которых титры анти-HBs после завершения первичного курса иммунизации рекомбинантной вакциной против гепатита В (три дозы RECOMBIVAX HB^, Merck & Co., Inc.) составляли  10 mIU/ml. В группу обследуемых вошли подростки, привитые в детском возрасте (1-10 лет) и взрослые, не получавшие какой-либо дополнительной дозы вакцины. Все участники предыдущего исследования вакцинировались с интервалами 0, 1, 6 месяцев; дети получали HBsAg в дозировке 1.25 mcg/0.25 ml , 2.5 mcg/0.5 ml или 5 mcg/0.5 ml, взрослые – 10 mcg/1.0 ml. В списки потенциальных кандидатов вошли 80 человек, вакцинированных в детском возрасте и 18 взрослых. Всем им было сообщено о предстоящем исследовании почтовым сообщением, за которым через две недели следовал телефонный звонок. Три письма и телефонный звонок были адресованы тем, с кем не удалось установить связь с первой попытки.

Процедура исследования включала (1) опрос относительно проведения бустерной вакцинации или возможного контакта с HBV (прошедшие бустерную вакцинацию не могли участвовать в исследовании); (2) исходный анализ крови на наличие анти-HBs и тест на анти-HBc; (3) введение 5 mcg/0.5 ml бустерной дозы RECOMBIVAX HB^ подросткам, прошедшим первичный курс иммунизации в детском возрасте (Группа 1), или 10 mcg/1.0 ml бустерной дозы RECOMBIVAX HB^ - тем, кто прививался уже во взрослом возрасте (Группа 2); (4) анализ крови через 1 и 4 недели после бустерной вакцинации для оценки анти-HBs ответа. Участникам исследования были выданы вакцинальные регистрационные карты, в которых их просили записывать температуру тела через 4-6 часов после прививки и ежедневно в одно и то же время в течение 5 дней, а также отмечать любые реакции в месте инъекции или жалобы общего характера.

Проба сыворотки “пред-вакцинального” образца крови отправлялась в CCLS (Covance Central Laboratories Services – Indianapolis, IN), где проводилось тестирование на предмет наличия анти-HBc иммуноферментным анализом (ИФА). Равное количество сыворотки «пред-вакцинального» образца, а также крови, взятой через 1 и 4 недели после бустерной вакцинации, проходили анализ в Исследовательской Лаборатории Merck (West point, PA) радиоиммунным методом с использованием тест-систем AUSAB^(Abbott Laboratories – North Chicago, IL).

За анамнестический (вторичный) ответ на бустерную вакцинацию принималось четырех- или более кратное увеличение титра анти-HBs через 1 неделю после иммунизации у тех вакцинируемых, у которых были обнаружены антитела при предварительном обследовании, или появление анти- HBs в титре  10 mIU/ml у тех, у кого их до введения бустерной дозы не было.

3. Результаты

Были отобраны двадцать пять человек (девять мужчин и 16 женщин), участвовавших в предыдущем исследовании, соответствующих перечисленным требованиям и давших согласие на участие в настоящем эксперименте. Среди них: 18 (22%) из 80 подростков, прошедших первичный курс вакцинации в детском возрасте от 13 месяцев до 9 лет (Группа 1) и 7 (22%) из 18 взрослых людей, первично вакцинированных в возрасте 30-54 года (Группа 2). Восемь участников предыдущего исследования уже прошли бустерную иммунизацию и не соответствовали критериям отбора. Другие 30 человек отказались участвовать в исследовании, и с 35 - так и не удалось связаться. К моменту бустерной вакцинации возраст подростков, входящих в Группу 1, варьировал от 14 до 23 лет, в то время как возраст участников Группы 2 составил 43-67 лет.

Все участники исследования хорошо перенесли бустерную вакцинацию без клинически выраженных реакций. Из 18 подростков, входящих в Группу 1, пять отметили небольшую болезненность в месте инъекции в первые два дня после вакцинации, жалоб общего характера не было. В Группе 2 (7 человек) было зарегистрировано две жалобы на болезненность в области укола. Двое участников жаловались на тошноту на второй день после прививки, и один – отметил мышечную боль на 1 и 2 дни после вакцинации.

Через 4 недели после бустера	Кратное увеличение	52а					319а
	GMT (mIU/ml)	13125					9562
	n	18	0	0	0	18	7	0	0	1	6
	%	100	0	0	0	100	100	0	0	14.3	85.7
Через 1 неделю после бустера	Кратное увеличение	11а					24а
	GMT (mIU/ml)	2776					735
	n	18	0	0	2	16	7	-	1	1	5
	%	100	0	0	11	89	100	14.3	14.3	57	71.4
Перед бустерной вакцинацией	GMT (mIU/ml)	254					30
	N	18	1	2	2	13	7	1	1	1	4
	%	100	6	11	11	72	100	14.3	14.3	57	14.3
После первичной вакцинации	GMT (mIU/ml)	7164					3078
	n	18	0	0	0	18	7	0	0	0	7
	%	100	0	0	0	100	100	0	0	0	100
Титр Анти-HBs		все	2	<2-9.9	10-99	100	все	2	<2-9.9	10-99	100
Группаа (возраст во время бустера)		Группа1					Группа 2

В Таблице 1 показано, каким образом распределялись уровни анти-HBs в Группах 1 и 2 после первичного курса иммунизации рекомбинантной вакциной, до бустерной вакцинации и через 1 и 4 недели после нее. У всех участников исследования в обеих группах титры анти-HBs антител через месяц после первичного курса иммунизации составляли  100 mIU/ml, однако, через 13 лет произошло значительное снижение содержания антител. В группе подростков (Группа 1) GMT анти-HBs упал с 7164 mIU/ml до 254 mIU/ml, и у троих из 18 (17%) уровень антител оказался < 10 mIU/ml. Сходная динамика наблюдалась в Группе 2, где GMT снизился c 3078 mIU/ml до 30 mIU/ml, и двое из семи (29%) имели < 10 mIU/ml анти-HBs. Все участники исследования были анти-HBc-отрицательны.

Бустерная доза вакцины вызвала стремительный синтез антител. Через 1 неделю у 100% подростков в Группе 1 содержание антител составляло  10 mIU/ml, а у 89% -  100 mIU/ml (Таблица 1). Несмотря на то, что только у 12 (67%) из 18 подростков произошло четырехкратное увеличение титра антител через неделю после бустерной вакцинации, у остальной части содержание анти-HBs существенно выросло ( 300 mIU/ml) по сравнению с пред-бустерным уровнем (данные не приводятся). В целом, у вакцинируемых Группы 1 произошло 11-кратное увеличение GMT через 1 неделю после бустерной вакцинации, а через 4 недели средне-геометрический титр антител в 52 раза превышал первоначальный уровень. GMT через 4 недели, составляющий 13125 mIU/ml, превышал GMT, равный 7164 mIU/ml, отмеченный 13 годами ранее после первичного курса вакцинации (Таблица 1).

Реакция на бустерную вакцинацию Группы 2 в общих чертах напоминала вышеописанную у подростков. Через неделю шесть (86%) из семи взрослых имели 10 mIU/ml, а пять (71%) -  100 mIU/ml анти-HBs. У пяти (71%) из семи вакцинируемых было зарегистрировано, по крайней мере, четырехкратное увеличение титра антител через неделю после бустерной вакцинации (данные не приводятся), однако, все семь человек имели  10 mIU/ml анти-HBs через 4 недели. В целом в Группе 2 произошло 24-кратное увеличение GMT через неделю после бустерной вакцинации и 319-кратное – через 4 недели. Как и в группе подростков, GMT в Группе 2 через 4 недели после бустерной вакцинации, составивший 9562 mIU/ml, превысил уровень GMT в 3078 mIU/ml, наблюдавшийся после первичной вакцинальной серии (Таблица 1).

Так как уровень анти-HBs антител  10 mIU/ml считается протективным, особый интерес представляет ответ на бустерную вакцинацию тех, у кого содержание антител после первичного курса иммунизации упало ниже 10 mIU/ml. Так, у трех подростков (Группа 1) с уровнем антител < 10 mIU/ml до введения бустерной дозы, наблюдалось, по меньшей мере, четырехкратное увеличение содержания антител через неделю после бустерной вакцинации. Что сопровождалось 119-кратным ростом GMT с 1.3 до 155 mIU/ml, достигнув суммарного увеличения в 1298 раз (1678 mIU/ml) через 4 недели. Из двух взрослых (Группа 2) с титром антител < 10 mIU/ml, у одного наблюдался умеренный рост титра с 9 до 17 mIU/ml в течение первой недели, однако, к 4 неделе произошло резкое увеличение содержания анти-HBs до 1730 mIU/ml. У другого – пост-бустерный рост титра достиг через неделю 3279 mIU/ml (до бустерной вакцинации антитела не выявлялись – данные не приводятся).