Приготовление некоторых реактивов.

Приготовление реактива Ларионовой. Готовят насыщенный раствор хлорида натрия (20 – 30 г соли растворяют в 100 мл воды при подогревании, дают отстояться до охлаждения). Надосадочную жидкость сливают, фильтруют. К 99 мл фильтрата добавляют 1 мл концентрированной азотной кислоты. Вместо азотной кислоты можно добавить 2 мл концентрированной соляной кислоты.

Реактив НАДИ. За 1-2- часа до занятия готовят 1%-ный водный раствор диметилпарафенилендиамина и смешивают его с равными объемами 1%-ного раствора альфа-нафтола в спирте и 1,5%-ного раствора карбоната натрия. Реактив НАДИ окрашен в темно-коричневый цвет, но не должен иметь розового оттенка.

Фенол, насыщенный водой, для хроматографии аминокислот. 50-100 г фенола помещают в делительную воронку, энергично взбалтывают с 25-50 мл воды и оставляют стоять в воронке до разделения слоев (7-10 часов). Нижний слой фенола сливают в банку и используют для хроматографии.

Растворы аминокислот для хроматографии. Аминокислоты растворяют в концентрации около 1/25 м.

В 10 мл растворяют:

Глутаминовой кислоты	60 мг
Аланина	40 мг
Лейцина	50 мг

Можно также пользоваться следующими комбинациями аминокислот (на 10 мл воды):

Глутаминовой кислоты	60 мг	Глутаминовой кислоты	60 мг
Глицина	40 мг	Лейцина	50 мг
Аланина	40 мг
Аспарагиновой кислоты	60 мг	Аспарагиновой кислоты	60 мг
Серина	40 мг	Глицина	40 мг
Лейцина	60 мг	Лейцина	60 мг

Учебное издание

1 Приготовление мышечного экстракта.

1. На технических весах взвесьте 10 г мышечной ткани мяса.

2. Отмерьте 50 мл охлажденного 0,04 М раствора никотинамида и залейте им взятую навеску. Затем мышцы измельчите ножницами, добавьте кварцевый песок, разотрите в ступке до получения гомогенной массы и экстрагируйте 30-40 мин.

3. После этого полученный экстракт перенесите в центрифужные пробирки и центрифугируйте при 3000 об/мин в течение 10 мин.

Получение безбелкового фильтрата.

1. 3 мл мышечного экстракта (см. выше) внесите в центрифужную пробирку и добавьте осторожно (!) такое же количество 5%-ного раствора трихлоруксусной кислоты (ТХУ). При наличии белка раствор мутнеет.

2. Центрифугируйте при 3000 об/мин в течение 5 мин. Белок при этом осаждается.

3. Надосадочную жидкость (безбелковый фильтрат, он должен быть прозрачным!) используйте в опыте.

76