- •Методичні вказівки до лабораторних робіт з біохімії (заочне відділення)
- •Техніка безпеки при роботі у біохімічній лабораторії
- •Забороняється з метою уникнення травм, опіків, нещасних випадків:
- •Перша домедична допомога
- •Заняття 1 Тема: Якісні (кольорові) реакції на амінокислоти та білки
- •ХIд роботи
- •Заняття 2 Тема: Властивості білків
- •ХIд роботи
- •Хід роботи
- •Заняття 4 Тема: Властивості вуглеводів
- •Заняття 5 Тема: властивості лІпІдІв
- •Хід роботи
- •Заняття 6 Тема: властивості нуклеопротеЇдІв
- •Хід роботи
- •Заняття 7 Тема: загальні властивості ферментів
- •Хід роботи
- •Заняття 8 Тема: Якісні реакції на водорозчинні і жиророзчинні вітаміни
- •Хід роботи
- •ВодоРозчинні вітаміни
- •ЖироРозчинні вітаміни
- •Заняття 10 Тема: Визначення молочної кислоти у біологічному матеріалі
- •Хід роботи
- •У пробірки відміряють послідовно, відповідно таблиці, біологічну рідину і робочі розчини. Для зменшення похибки аналізу рекомендується притримуватися обговореного порядку змішання розчинів.
- •Заняття 12 Тема: Визначення концентрації загального холестерину у біологічних рідинах (за методом Ілька)
- •Хід роботи
- •Хід роботи:
- •Питання до іспиту з біохімії
- •Рекомендована література Основна:
- •Додаткова:
Забороняється з метою уникнення травм, опіків, нещасних випадків:
Працювати на несправному устаткуванні.
Лишати працюючі прилади без догляду.
Берегти і готувати їжу в лабораторіях, пити з хімічного посуду.
Відмірювати концентровані кислоти і луги, втягуючи їх ротом у піпетку.
Зберігати летючі й легкозаймисті речовини поблизу джерел тепла, відкритого вогню, працюючих приладів.
Ставити в термостат легкозаймисті речовини.
Торкатися голими руками до погано ізольованих проводів і недостатньо заземленого устаткування, що може бути під напругою.
Щоб запобігти отруєнню, необхідно знати токсичні властивості речовин, із якими працюєте, і уникати вдихання парів, а також потрапляння отруйних речовин на шкіру й одяг.
Перша домедична допомога
Відключити електричний струм, що діє на постраждалого; загасити спиртовий пальник; якщо зайнявся одяг, то необхідно накрити ділянку, що горить, підручним предметом (рушник, халат, піджак) або постраждалий має лягти на підлогу і перекочуватися, намагаючись загасити вогонь. Після цього постраждалому надати медичну допомогу.
2. При відсутності після електротравми у постраждалого пульсу і дихання, терміново здійснюють штучне дихання з рота в рот і закритий масаж серця (на одне вдмухування 4-5 натиснень на нижню третину грудини; ритм − одне натиснення на секунду).
3. Перев'язувальні матеріали (вата, бинти, серветки), необхідні розчини і медикаменти знаходяться в аптечці, встановленій у лабораторії.
4. При термічних опіках зробити примочки розчином калій перманганату або етилового спирту і змазати маззю від опіків.
5. При опіках кислотою старанно промити обпалене місце спочатку проточною водою, а потім обробити розчином гідрокарбонату натрію.
6. При опіках їдкими лугами промити обпалене місце водою, а потім обробити розведеною оцтовою кислотою.
7. Якщо кислоти або луги потраплять у очі, слід миттєво їх промити дистильованою водою, а потім обробити 1%-им розчином натрій гідрокарбонату у випадку потрапляння кислоти або 1%-им розчином борної кислоти при потраплянні лугу, після чого знову старанно промити дистильованою водою.
8. При порізах склом видалити скалки з рани, змазати йодною настойкою і, якщо потрібно, накласти пов'язку.
9. При отруєнні парами отрути, постраждалого винести на свіже повітря, дати 30 крапель нікетаміду (кордиаміну)*, міцний чай або каву.
Примітка. * Кордіамін (Cordiaminum) (Нікетамід) − 25%-ий розчин диетиламіду нікотинової кислоти − стимулятор центральної нервової системи. Показання до застосування: дихальна недостатність, непритомність.
Заняття 1 Тема: Якісні (кольорові) реакції на амінокислоти та білки
Мета заняття: ознайомитися з якісними (кольоровими) реакціями на амінокислоти й білки.
ХIд роботи
Практичне значення роботи: якісні (кольорові) реакції широко використовуються для встановлення білкової природи речовини, вивчення амінокислотного складу різноманітних природних білків і пептидів, для ідентифікації індивідуальних амінокислот. Більшість із них чутливі й високоспецифічні, що дозволяє відкривати незначні кількості білків, тієї або іншої амінокислоти в гідролізатах білків, у біорідинах і тканинах організму, в лікарських засобах.
Матеріали і реактиви: штатив для пробірок, пробірки, пробіркотримач, скляні палички, піпетки, сухе пальне, сірники; дистильована вода, 1%-ий розчин яєчного білка, 10%-ий розчин натрій гідроксиду, 1%-ий розчину купрум сульфату, розчин нінгідрину, нітратна кислота, волосся або шматочок нігтя, розчин ацетат плюмбуму, розчин натрій нітриту, концентрована оцтова кислота.
Нерозведений яєчний білок, розчин сульфату амонію, хлоридна кислота; 1%-ий розчин желатину; 0,1 М і 1 М розчини оцтової кислоти, 0,1 М розчин натрій ацетату, 96%-ий етиловий спирт (або 95%-ий ацетон).
Дослід 1. Біуретова реакція (Піотровського) відкриває пептидний зв'язок (-СО-NH-) у білках.
Принцип методу. У лужному середовищі розчин білка при взаємодії з іонами міді набуває синьо-фіолетового кольору, а продукти його неповного гідролізу − пептони − дають рожеве забарвлення. Біуретову реакцію дають речовини, що містять не менше двох пептидних зв'язків
Хід роботи. До 5 крапель 1%-ного розчину яєчного білка додають 5 крапель 10%-ного розчину гідроксиду натрію, 2 краплі 1%-ного розчину сульфату купруму й усе перемішують. Вміст пробірки набуває фіолетового кольору.
Примітка. Не можна додавати надлишок сульфату купруму, тому що синій осадок гідрату окису купруму маскує характерне фіолетове забарвлення біуретового комплексу білка.
Дослід 2. Нінгідринова реакція характерна для аміногруп, що знаходяться в α-положенні і входять до складу білків, поліпептидів і вільних амінокислот.
Принцип методу. α-амінокислоти при нагріванні з нінгідрином окислюються на альдегіди, оксид вуглецю (IV) і аміак. Амоніак реагує з нінгідрином з утворенням комплексу, що має фіолетово-синій колір.
Хід роботи. До 3-4 крапель 1%-ного розчину яєчного білка додають 1-2 краплі розчину нінгідрину і нагрівають. У пробірці з'являється рожево-фіолетове забарвлення, що із часом синішає.
Дослід 3. Ксантопротеїнова реакція (Мульдера) доводить присутність у білках ароматичних амінокислот: триптофану, фенілаланіну, тирозину.
Принцип методу. В ароматичних амінокислотах, які містять бензольні кільця (тирозин, триптофан, фенілаланін), під дією концентрованої нітратної кислоти відбувається реакція нітрування бензольного кільця з утворенням забарвленої в жовтий колір нітросполуки.
Хід роботи. У пробірку до 3-4 крапель розчину білка додають 1-2 краплі нітратної кислоти. Пробірку обережно нагрівають і стежать за зміною забарвлення. Утворюється нітросполука жовтого кольору.
Дослід 4. Реакція Фоля на амінокислоти, що містять сульфур.
Принцип методу. При нагріванні цистеїну і цистіну в лужному середовищі від них легко відщеплюється сульфур у виді гідроген сульфуру, який в лужному середовищі утворює сульфід натрію.
Утворення сульфіду натрію, можна визначити за допомогою іонів важких металів, наприклад, іонів плюмбуму, які утворюють з іонами сульфуру нерозчинний плюмбум сульфід чорного кольору.
Хід роботи. В одну пробірку поміщають трохи волосся або шматочок нігтя, а в іншу − 5 крапель 1%-ного розчину яєчного білка. У кожну з пробірок додають по 1 краплі розчину плюмбум ацетату, і 1 краплю розчину натрій гідроксиду і нагрівають до кипіння. Утворюється нерозчинний плюмбум сульфід чорного кольору.
Дослід 5. Визначення аміногрупи − NН2 в амінокислотах і білках (реакція Ван-Слайка).
Принцип методу. В результаті взаємодії амінокислоти з нітритом натрію і оцтовою кислотою відбувається утворення газоподібного азоту.
Хід роботи. У пробірку наливають 3-5 мл 1%-ого розчину яєчного білка або амінокислоти, додають рівний об’єм розчину натрій нітриту і декілька крапель концентрованої оцтової кислоти. При цьому утворюється нітритна кислота, що вступає в реакцію з аміногрупою. Виділяються бульбашки газу – азоту.
Результати дослідів заносять у таблицю:
№ з/п |
Назва досліду |
Реактиви, які застосовують |
Що спостерігається |
Висновок |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
|
|
|
|
|
В кінці лабораторної роботи зробити загальний висновок.
