3. Список посуды и оборудования:

Наименование	Объем	Количество
Мерная колба	100 мл 25мл	1 2
Пробирка		3
Пипетка - с отбитым носиком	2 мл 1 мл 2 мл	1 4 1
Песочные часы		1

4.Описание хода работы:

1) Постановка пробы на гидролиз

В коническую колбу на 100 мл налили 1 мл испытуемой пробы, 5 мл 10 % раствора соляной кислоты и 9 мл дистиллированной воды. Колбу закрыли бумажным колпачком, подписали и провели гидролиз в автоклаве при избыточном давлении 0,15 МПа в течении 30 минут.

Охлажденную после гидролиза пробу нейтрализовали содой (соду добавляли небольшими порциями до прекращения выделения пузырьков углекислого газа)

После гидролиза разводим пробу в пять раз (1 мл пробы и 4 мл воды).

Схематичное пояснение:

2) Определение глюкозы в пробе

В пробирку налили 2 мл пробы (разведенной в соответствии с заданием дистиллированной водой), добавили 1 мл 0,3 % раствора хлористого 2,3,5 — трифенилтетразолия и 1 мл 1 н раствора ед­кого натрия.

Смесь нагревали на кипящей водяной бане в течение 3 минут (точно по песочным часам), при этом появилось яркое вишневое окрашивание пробы за счет образования нерастворимого трифенилформазана (небольшие хлопьевидные частицы).

Пробу охладили под струей холодной воды и добавили 1 мл 2,1 н раствора уксусной кислоты.

Затем содержимое пробирки количественно перенесли в мерную колбу объемом 25 мл, постепенно смывая остатки раствора в пробирке изопропиловым спиртом. При этом видно как осадок трифенилформазана растворялся в органическом раство­рителе. Оптическую плотность окрашенных растворов измерили на фотоэлектроколориметре КФК-2 при длине волны 490 нм в кювете № 5.

Для получения раствора сравнения (контроль) вместо 2 мл пробы взяли 2 мл дистиллированной воды и проделать те же опе­рации.

По градуировочной кривой зависимости оптической плотно­сти раствора от количества глюкозы определили ее содержание (С) в анализируемой колбе.

Расчет количества глюкозы в пробе проводят по следующей формуле:

где Х₁— содержание глюкозы в 1 мл исследуемой пробы;

С — содержание глюкозы в анализируемом растворе, опреде­ленное по калибровочной кривой, мкг;

Р1 — разведение пробы при постановке ее на гидролиз;

P2 — разведение пробы перед анализом;

2 — количество исследуемого раствора, взятое для анализа,

мл;

1000 — перевод мкг в мг.

Схематичное пояснение:

3) Посев продуцента антибиотика с косяка в жидкую питательную среду (засевали 2 качалочные колбы на подгруппу)

а) Протерли поверхность стола дезинфицирующим раство­ром.

б) Зажгли спиртовку.

в) Пробирку с продуцентом антибиотика взяли в левую руку таким образом, чтобы хорошо была видна вся поверхность пита­тельной среды с выросшей на ней культурой. Пробирка должна находилась несколько наклон­но.

г) Взяли в правую руку бактериологический крючок и простерилизовали в пламени горелки.

д) Не выпуская из руки петли, мизинцем и безымянным паль­цем правой руки прижали ватную пробку к ладони, вынули ее из пробирки и держали ее так во время последующих манипуляций.

е) Ввели бактериологический крючок в пробирку и захва­тили культуру микроорганизма вместе с агаризованной средой (площадью 1 см ). Закрыли пробирку и положили ее на стол.

ж) Удерживая лопатку указательным и большим пальцами правой руки, захватили мизинцем и безымянным пальцем ватную пробку колбы, прижали ее к ладони и открыли колбу около пламени горелки. Опустили лопатку с культурой в жидкую питательную среду. Закрыли колбу.

з) Лопатку обожгли в пламени горелки.

Качалочную колбу установили на качалку (и = 200—220 мин"¹) в термостатируемом помещении (26—28 °С).

Продолжительность ферментации — 5 суток (120 часов).

Схематичное пояснение:

4)Подготовка агаризованной среды для посева на нее микроорганизма — продуцента антибиотика

Колбу со стерильной агаризованной средой поместили на во­дяную баню для расплавления агар-агара, при этом пе­риодически перемешивали содержимое колбы медленным враща­тельным движением.

В чашки Петри разлили агаризованную среду ох­лажденную до 70—80 °С. Для этого колбу с расплавленной сре­дой выдерживали на столе до постепенного ее остывания (-10 ми­нут) и затем разлили в стерильные чашки Петри.

Для этого колбу со средой взяли в правую руку, вынули из нее пробку, зажимая ее мизинцем и безымянным пальцем левой руки. Слегка обожгли горло колбы в пламени спиртовки. Затем приот­крыли крышку чашки Петри левой рукой и быстро налили в чаш­ку расплавленную среду в таком количестве, чтобы дно чашки было полностью покрыто. Вращательным движением повернули чашку на столе для того, чтобы среда равномерно распредели­лась по дну чашки, и оставили на столе до полного застывания агара.

Схематичное пояснение: