Реакции торможения миграции лимфоцитов.

Материалы и реактивы

1. Гепаринизированная исследуемая кровь.

2. Конканавалин А.

3. Изотонический раствор хлорида натрия.

4. Воск или пластилин.

5. Капилляры из набора для определения С-реактивного белка.

6. Центрифужные пробирки.

7. Микроскоп с окуляр-микрометром.

Описание метода

Перед работой необходимо подготовить капилляры. С этой целью отбирают капилляры с одинаковым внутренним диаметром. На капилляры наносят метку на расстоянии 1/3 длины от любого края.

На два часовых стекла или в две лунки планшета для иммунологических исследований наливают по 0.2 мл исследуемой крови. В первую порцию вносят 0.05 мл раствора Кон А в концентрации 10 мкг/мл (препарат растворяют в стерильном изотоническом растворе хлорида натрия. Полученными смесями заполняют капилляры на 2 /3 длины (до метки). На каждую пробу берут не менее 6 капилляров (3 опытных и 3 контрольных). Заполненные капилляры запаивают воском или пластилином и помещают в маркированные центрифужные пробирки (контрольные и опытные капилляры помещают в разные пробирки). Капилляры в пробирке необходимо зафиксировать комочком ваты или пластилином в строго вертикальном положении. После этого капилляры центрифугируют в течение 5 мин при 800 об/мин, а затем помещают в термостат в вертикальном положении и инкубируют при температуре 37°С в течение 24 часов.

Профессиональные аг-представляющие кл.

Дендритные клетки — специализированные антиген-презентирующие клетки, у которых есть длинные отростки, называемые дендритами, которые помогают поглощать микробы и другие патогены. Дендритные клетки находятся в тканях, которые контактируют с окружающей средой, в основном в коже, внутренней оболочке носа, лёгких, желудка и кишечника. После активации, они созревают и мигрируют в лимфатические ткани, где взаимодействуют с Т- и B-лимфоцитами для возникновения и организации приобретённого иммунного ответа. Зрелые дендритные клетки активируют Т-хелперы и Т-киллеры. Активированные Т-хелперы взаимодействуют с макрофагами и B-лимфоцитами чтобы активировать их, в свою очередь. Кроме того, дендритные клетки способны влиять на возникновение того или иного типа иммунного ответа; когда они перемещаются в лимфатические зоны, они способны активировать находящиеся там Т-лимфоциты, которые затем дифференцируют в Т-киллеры и Т-хелперы.

Клетки Лангерганса — подтип дендритных клеток, содержащийся в эпителиальных тканях и названный в честь Пауля Лангерганса, открывшего их в 1868 году.

Сущность процессинга и презентации антигена(рис)

А. Процессинг начинается с поглощения антигена антигенпрезентирующей клеткой.

Б. Затем происходит частичная деградация антигена с вычленением эпитопов.

В. После этого в цитоплазме АПК каждый вычлененный эпитоп соединяется с молекулой МНС и образуется «процессированный антиген» – так называется комплекс [эпитоп + МНС].

Профессиональные фагоцитирующие клетки.

Этот вид фагоцитов не имеет гранул, но содержит много лизосом. Макрофаги находятся по всему телу почти во всех тканях и органах (например, клетки микроглии в головном мозге и альвеолярные макрофаги в лёгких). Расположение макрофага можно определить по его размеру и внешнему виду. Макрофаги вызывают воспаление путём образования интерлейкина 1, интерлейкина 6 и фактора некроза опухоли. Макрофаги обычно находятся только в тканях и редко попадают в кровоток. Продолжительность жизни тканевых макрофагов, по разным оценкам, от 4 до 5 дней.

Макрофаги могут быть активированы для выполнения функций, которые покоящийся моноцит не может. Т-хелперы подгруппа лимфоцитов, отвечающих за активацию макрофагов. Они активируют макрофаги, посылая сигнал в виде интерферона гамма и экспрессируя белок CD154. Другие сигналы поступают от бактерий в виде фактора некроза опухоли альфа и липополисахаридов. Т-хелперы способны привлекать другие фагоциты в зону инфекции несколькими путями. Они выделяют цитокины, которые действуют на костный мозг, стимулируя образование моноцитов и нейтрофилов и они выделяют некоторые цитокины, которые отвечают за миграцию моноцитов и нейтрофилов в кровеносное русло. Т-хелперы появляются при дифференцировке CD4+ Т лимфоцитов, когда они реагируют на действие антигена в периферических лимфатических тканях. Активированные макрофаги играют важную роль в разрушении опухолей путём образования фактора некроза опухоли альфа, гамма-интерферона, оксида азота, реактивных форм кислорода, катионных белков и гидролитических ферментов.

Система комплемента.(рис)

Комплемент — система белков, включающая около 20 взаимодействующих компонентов: С1 (комплекс из трех белков), С2, СЗ, …, С9, фактор В, фактор D и ряд регуляторных белков. Все эти компоненты — растворимые белки с мол. массой от 24 000 до 400 000, циркулирующие в крови и тканевой жидкости. Белки комплемента синтезируются в основном в печени и составляют приблизительно 5 % от всей глобулиновой фракции плазмы крови.

Ф: Опсонизирующая функция.

Солюбилизация (т.е. растворение) иммунных комплексов (молекулой C3b).

Участие в воспалительных реакциях.

Цитотоксическая, или литическая функция.

Классический и альтернативный пути активации.(рис)