2. Функционирование цитохрома р450
Известно, что молекулярный кислород в триплетном состоянии инертен и не способен взаимодействовать с органическими соединениями. Чтобы сделать кислород реакционно-способным, необходимо его превратить в синглетный, используя ферментные системы его восстановления. К числу таковых и принадлежит моноксигеназная сисгема, содержащая цитохром Р450. Связывание в активном центре цитохрома Р450 липофильного вещества RH и молекулы кислорода повышает окислительную активность фермента. Один атом кислорода принимает 2 е и переходит в форму О2-. Донором электронов служит NADPH, который окисляется NADPH-цитохром- Р450 редуктазой. О2- взаимодействует с протонами: О2- + 2Н+ → Н2О, и образуется вода. Второй атом молекулы кислорода включается в субстрат RH, образуя гидроксильную группу вещества R-OH.
Транспорт электронов при монооксигеназном окислении с участием Р-450. Связывание (1) в активном центре цитохрома Р450 вещества RH активирует восстановление железа в системе - присоединяется первый электрон (2). Изменение валентности железа увеличивает сродство комплекса P450-Fe2+·RH к молекуле кислорода (3). Появление в центре связывания цитохрома Р450 молекулы О2 ускоряет присоединение второго электрона и образование комплекса P450-Fe2+O2--RH (4). На следующем этапе (5) Fe2+ окисляется, второй электрон присоединяется к молекуле кислорода P450-Fe3+O22-. Восстановленный атом кислорода (О2-) связывает 2 протона, и образуется 1 молекула воды. Второй атом кислорода идёт на построение ОН-группы (6). Модифицированное вещество R-OH отделяется от фермента (7).
Суммарное уравнение реакции гидроксилирования вещества RH ферментами микросомального окисления:
RH + О2 + NADPH + Н+ → ROH + Н2О + NADP+ .
Субстратами Р-450 могут быть многие гидрофобные вещества как экзогенного (лекарственные препараты, ксенобиотики), так и эндогенного (стероиды, жирные кислоты и др.) происхождения.
Таким образом, в результате первой фазы обезвреживания с участием цитохрома Р-450 происходит модификация веществ с образованием функциональных групп, повышающих растворимость гидрофобного соединения. В результате модификации возможна потеря молекулой её биологической активности или даже формирование более активного соединения, чем вещество, из которого оно образовалось.
3. Свойства системы микросомального окисления
Важнейшие свойства ферментов микросомального окисления: широкая субстратная специфичность, которая позволяет обезвреживать самые разнообразные по строению вещества, и регуляция активности по механизму индукции. К настоящему времени описано около 150 генов цитохрома Р-450, кодирующих различные изоформы фермента. Каждая из изоформ Р-450 имеет много субстратов. Этими субстратами могут быть как эндогенные липофильные вещества, модификация которых входит в путь нормального метаболизма этих соединений, так и гидрофобные ксенобиотики, в том числе лекарства. Определённые изоформы цитохрома Р-450 участвуют в метаболизме низкомолекулярных соединений, таких как этанол и ацетон.
Регуляция активности микросомальной системы осуществляется на уровне транскрипции или посттранскрипционных изменений. Индукция синтеза позволяет увеличить количество ферментов в ответ на поступление или образование в организме веществ, выведение которых невозможно без участия системы микросомального окисления.
Основные ферменты и метаболиты, участвующие в конъюгации
Глутатионтрансфераза Глутатион (GSH) Глутатион (GSH)
УДФ-глюкуронилтрансфераза Глюкуронат УДФ-глюкуронат
Сульфотрансфераза Сульфат ФАФС Ацетилтрансфераза Ацетат Ацетил КоА
Метилтрансфераза Метил SAM
ФАФС − 3'-фосфоаденозин-5'-фосфосульфат
SAM − S-аденозилметионин