1.2.Постановка пробы на гидролиз

В коническую колбу наливаем испытуемую пробу, 10% соляной кислоты и дисстилированную воду. Далее проводим гидролиз в автоклаве в течении 30 мин. Охлажденную после гидролиза пробу нейтрализуем содой, добавляя ее небольшими порциями. Разводим дисстилированной водой в 2 раза.

1.3.Определение глюкозы в пробе

В пробирку налили 2мл пробы, добавили 1мл 0,3% раствора хлористого 2,3,5-трифенилтетразолия и 1мл 1н раствора едкого натрия. Затем нагревали смесь на водяной бане в течение 3 минут (появилось ярко вишневое окрашивание). Охлаждали пробу под холодной водой и добавляли 1мл 2,1н раствора CH₃COOH. Измерили оптическую плотность окрашенного раствора при длине волны 490нм.

Измерение:

А (оптическая плотность) = 0,76

Т=17,8%

По градуировочной кривой определяем содержание глюкозы в анализируемой пробе.

С=340 мкг

Расчет количества глюкозы в пробе:

, где

Х₁ – содержание глюкозы в 1мл исследуемой пробы

С - содержание глюкозы в анализируемом растворе, найденной по калибровочной кривой

Р₁ - разведение пробы при постановке ее на гидролиз

Р₂ – разведение пробы перед анализом

2 – количество исследуемого раствора, взятое для анализа, мл

1000 – перевод мкг в мг

2.Посев культуры – продуцента антибиотика с косяка в жидкую питательную среду в качалочную колбу

Протерли поверхность стола дезинфицирующим раствором, зажгли спиртовку. Пробирку с продуцентом антибиотика взяли в левую руку, чтобы была видна вся поверхность питательной среды с выросшей на ней культурой. В правую руку взяли бактериологическую лопатку и простерилизовали в пламени спиртовки. Не выпуская лопатку из рук, мизинцем и безымянным пальцем вынули ватную пробку из пробирки. Ввели бактериологическую лопатку в пробирку и захватили культуру микроорганизма вместе с агаризированной средой (1 см²). Закрыли пробкой пробирку и положили на стол. Точно также захватили пробку с качалочной колбы, открывая ее у пламени горелки. Опустили лопатку с культурой в жидкую питательную среду. Закрыли колбу. Обожгли лопатку в пламени горелки.

Качалочную колбы подписали и установили на качалку в термостатируемом помещении (26-28 ^̊С). Продолжительность ферментации - 5 суток.

3.Описание характера развития продуцента антибиотика в глубинной культуре.

Характер роста микроорганизмов в жидких питательных сре­дах отличается единообразием. Микроорганизмы при росте на жидких средах вызывают помутнение среды, образование пленок или осадка.

Описание глубинной культуры актиномицета провели по следующей схеме:

— название продуцента;

— состав жидкой питательной среды;

— температура и продолжительность культивирования;

— описание осадка (его количество (скудный, обильный и т. д.) и консистенцию (плотный, рыхлый, слизистый и т. д.));

—степень помутнения среды (слабая, умеренная или густая);

—цвет среды (по шкале Бондарцева А. С.).

Результаты выполнения работы

Продуцент – Streptomyces levoris t=26-28 ^̊ C 7 суток

Соевая мука

Кукурузная мука

Глюкоза

NaCl

CaCO3

Среда

Культуральная жидкость – М6 бледно-красновато бурый, сиена жженый

Осадок – есть пристенное кольцо и хлопьевидный осадок