- •Правила взятия крови для клинико-биохимических исследований.
- •Лабораторная работа №1 «Обнаружение моно, ди и полисахаридов».
- •Реакция №1. «Проба Биаля (обнаружение пентоз)»
- •Реакция №2. «Проба Велька (обнаружение лактозы и мальтозы)»
- •Реакция №3. «Проба Селиванова (обнаружение фруктозы)»
- •Реакция №4. «Обнаружение крахмала»
- •Лабораторная работа №2 «Реакции на выявление свойств углеводов».
- •Реакция №1. «Реакция Троммера»
- •Реакция №2. «Реакция Ниландера»
- •Практические занятия по теме: «Химия липидов» Дата_________________
- •Определение концентрации общих липидов в сыворотки крови.
- •Клинико-диагностическое значение определения общих липидов:
- •Лабораторная работа №5 «Обнаружение липидов»
- •Реакция №1 « Акролеиновая проба (обнаружение глицеринсодержащих липидов)»
- •1. Реакция Сальковского.
- •2. Реакция Либермана-Бурхардта.
- •Лабораторная работа №6 «Определение β-липопротеинов сыворотки крови турбидиметрическим методом»
- •Протокол лабораторной работы №4 «Определение общих липидов»
- •Протокол лабораторной работы №6 «Определение β-липопротеинов сыворотки крови турбидиметрическим методом»
- •Практические занятия по теме: «Химия белков» Лабораторная работа №7 «Цветные реакции на белки и аминокислоты»
- •Реакция №1 «Биуретовая реакция на пептидную связь»
- •Реакция №2 «Нингидриновая реакция»
- •Реакция №3 «Ксантопротеиновая реакция»
- •Реакция №4 «Реакция Адамкевича»
- •Реакция №5 «Реакция Фоля»
- •Протокол лабораторной работы №7 «Цветные реакции на белки и аминокислоты».
- •Современные методы анализа аминокислотного состава белков и пептидов.
- •Лабораторная работа №8 «Реакции осаждения и денатурации белков»
- •Необратимое осаждение
- •Реакция №3 «Осаждение концентрированными минеральными кислотами»
- •Протокол лабораторной работы №8 «Реакции осаждения и денатурации белков».
- •Протокол лабораторной работы №9 «Разделение альбуминов и глобулинов яичного белка методом высаливания».
- •Лабораторная работа №10 «Обессоливание растворов белков».
- •Протокол лабораторной работы №10 «Обессоливание растворов белков»
- •Метод распределительной хроматографии.
- •Метод распределительной хроматографии на бумаге.
- •Лабораторная работа №11 «Разделение смеси аминокислот методом радиальной хроматографии на бумаге».
- •Клинико-диагностическое значение определения аминокислот в сыворотке крови и моче
- •Протокол лабораторной работы №11 «Разделение смеси аминокислот методом радиальной хроматографии на бумаге».
- •Тема: «нуклеиновые кислоты»
- •Лабораторная работа №12 «Реакции на составные компоненты нуклеопротеинов»
- •Протокол лабораторной работы №12 «Реакции на составные компоненты нуклеопротеинов».
- •Лабораторная работа №13: «Обнаружение действия ферментов»
- •Лабораторная работа №14: «Изучение свойств ферментов»
- •Опыт 1 «Определение специфичности амилазы».
- •Опыт 2 «Определение специфичности сахаразы».
- •Лабораторная работа №15: «Регуляция активности ферментов»
- •Протокол лабораторной работы №13 «Обнаружение действия ферментов».
- •Протокол лабораторной работы №14 «Изучение свойств ферментов».
- •Протокол лабораторной работы №15 «Регуляция активности ферментов».
Лабораторная работа №1 «Обнаружение моно, ди и полисахаридов».
Качественные реакции на углеводы позволяют определить их присутствие в различных биологических жидкостях и провести дифференциацию моно-, ди- и полисахаридов. В клинической лабораторной практике этими реакциями пользуются для обнаружения в моче лактозы, мальтозы и пентоз, что имеет диагностическое значение.
Реакция №1. «Проба Биаля (обнаружение пентоз)»
Принцип: пентозы с орцином и треххлористым железом в кислой среде образуют при нагревании соединение желто-зеленого цвета.
Реактивы: 1) орцин (5-метилорцин); 2) концентрированная хлористоводородная кислота; 3) треххлористое железо FeCI3 x 6H2O, 10% раствор; 4) реактив Биаля (1 г орцина растворяют в 500 мл хлористоводородной кислоты и добавляют 1 мл 10% раствора треххлористого железа); 5) моча; 6) ксилоза, 1% раствор.
Ход определения: в две пробирки наливают по 5 мл реактива Биаля и смешивают в одной пробирке с 1 мл мочи (1-я пробирка), а в другой с раствором ксилозы (2-я пробирка) и нагревают до кипения. При положительной реакции появляется желто-зеленое окрашивание. В моче здорового человека пентозы не обнаруживаются.
Реакция №2. «Проба Велька (обнаружение лактозы и мальтозы)»
Принцип: лактоза и мальтоза с аммиаком в щелочной среде образуют при нагревании окрашенные соединения.
Реактивы: 1) аммиак водный, концентрированный; 2) гидроокись калия, 20% раствор; 3) 1% раствор лактозы; 4) 1% раствор мальтозы; 5) моча.
Ход определения: берут 3 пробирки (в первую добавляют 5 мл мочи, во вторую 5 мл лактозы, а в третью – 5 мл мальтозы) и прибавляют 2,5 мл раствора аммиака, 0,2 мл гидроокиси калия и нагревают на водяной бане 30 мин при 600С. При наличии лактозы появляется коричневая окраска, при наличии мальтозы – красное окрашивание. В моче здорового человека мальтоза и лактоза не обнаруживаются.
Реакция №3. «Проба Селиванова (обнаружение фруктозы)»
Принцип: при нагревании фруктозы с резорцином в кислой среде образуются соединения, окрашенные в красный цвет.
Реактивы: 1) HCl, 1 моль/л; 2) резорцин (5 г в 1 моль/л раствора HCl); 3) моча; 4) 1% раствор фруктозы.
Ход определения: берут 2 пробирки: в первую вносят 2мл мочи, во вторую 2 мл раствора фруктозы, и в каждую пробирку приливают по 1 мл раствора резорцина. Пробы нагревают до закипания. При положительной пробе развивается интенсивное красное окрашивание. В норме окраска не появляется.
Примечание: Оценку пробы проводят в момент закипания, так как при длительном кипячении окраска может появиться при наличии глюкозы (при небольшой концентрации глюкозы образуется красно-бурый осадок). Пищевая нагрузка медом и фруктами может дать положительную пробу.
Реакция №4. «Обнаружение крахмала»
Принцип: крахмал с йодом образует окрашенное соединение синего цвета.
Реактивы:1) 1% раствор крахмала; 2) йод, 1% раствор в 2% растворе йодида калия.
Ход определения: к 10 каплям крахмала добавляют 1-2 капли йода. При положительной реакции на йод появляется ярко-синее окрашивание. Реакцией пользуются для выявления активности ферментов, гидролизующих крахмал.