Лабораторна робота: Кількісне визначення вмісту пігментів пластид в асиміляційному апараті деревних порід. Опрацювання даних на пк.

Матеріали та обладнання: листя різних деревних рослин, фарфорові ступки, кварцевий пісок, вуглекислий кальцій, 80% ацетон, скляний фільтр, вакуумний насос, спектрофотометр, колби Бунзена, торсійні ваги, ножниці, лійки, колбочки на 25 мл.

Вступ

Хлорофіли і каротиноїди є найважливішими компонентами фотосинтетичного апарату листків. Їх вміст обумовлюється як генетичними особливостями рослин, так і впливом екологічних факторів. Вони часто використовуються як фізіологічний показник для характеристики онтогенетичних, вікових і генетичних особливостей рослин. Кількість пігментів дуже чутливо реагує на зміну умов освітлення, мінерального живлення температурного і водного режиму рослин. Тому при фізіологічних дослідженнях часто виникає необхідність прослідкувати за динамікою біосинтезу хлорофілів і каротиноїдів в рослин.

1.Мета роботи

1. Ознайомитись із спектрофотометричним методом кількісного визначення вмісту хлорофілів "а" і "b" і каротиноїдів.

2. Дослідити особливості нагромадження пігментів у різних деревних рослин.

2. Методика досліджень

2.1.Одержання ацетонової витяжки.

Листя деревних рослин дрібно нарізаємо і зважуємо на торсійній вазі 70 мг. Поміщаємо в фарфорові ступки і розтираємо, попередньо добавивши на кінчику скальпеля невелику кількість кварцевого піску і вуглекислого кальцію. Рослинний матеріал під час розтирання необхідно змочувати 80% ацетоном. Розтирання продовжуємо до появи однорідної маси. Після цього до фарфорової ступки наливаємо 5-10 мл 80% ацетону і обережно без втрат виливаємо в стакан скляного фільтра. Втрата хоч одної краплі призводить до неточності. Відтягуємо суміш за допомогою вакуумного насоса. Фарфорову ступку промиваємо декілька разів невеликими (до 5 мл) порціями ацетону. Фільтрат виливаємо у 25 мл колбочку. Вміст колбочки доводимо розчинником до мітки.

2.2.Визначення оптичної густини пігментів на спектрофотометрі.

Наливаємо в першу кювету до 2/3 об’єму розчинник, а в інші три дослідні ацетонові витяжки пігментів. Встановлюємо всі кювети в кюветоутримувач і закриваємо кришку. Вибираємо довжину хвилі і встановлюємо прилад на "0" при пропусканні світлового потоку через контрольну кювету (розчинник 80% ацетон). Потім підставляємо кювети з дослідними розчинами і визначаємо їх оптичну густину. Оптичну густину розчинів визначаємо при довжині хвиль: 440,5 нм (для каротиноїдів); 649 нм (для хлорофілу "b") і 665 нм (для хлорофілу "а").

2.3.Обробка даних.

Концентрація пігментів визначається за формулами:

С_a = 11,630D₆₆₅ – 2,390D₆₄₉

C_b = 20,110D₆₄₉ – 5,110D₆₆₅

C_k = 4,695D_440.5 – 0,270C_a+b

Вміст пігментів (мг/г сирої маси) визначається за формулою:

V = (V×C)/(P×1000)

де: V – об’єм витяжки, 25 мл;

P – наважка листків, 70 мг.

3. Результати досліджень і їх аналіз

Результати досліджень представляємо в таблиці 3.1.

Таблиця 3.1. Вміст пігментів в фотосинтетичному апараті деревних рослин

По-рода	На-важка, мг	По-втор-ність	Оптична густина			Вміст пігментів				Відношення пігментів
			D440.5	D649	D665	хл. a	хл. b	a + b	карот.	a/b	(a+b)/ка-ротин.
		1
		2
		3
Сер.
		1
		2
		3
Сер.

Аналізуємо отримані результати. Робимо висновки про нагромадження пігментів різними деревними породами.

5. Висновки