5. Дифференциальное окрашивание

Сплошная или равномерная окраска. Применяется для определения количесвта хромосом, выявления геномных мутаций.

В настоящее время идентификация хромосом исп. Парижская номенклатура, т.е. диффер.окрашивание.

G-окрашивание. Характер исчерченности специфичен для каждой пары хромосом. Темные полосы (G-полосы,бенды) образуются в местах локации интерстициального гетерохроматина. Такие участки практически не содержат повторов ДНК. В прометафазе, когда хромосомы находятся на ранней стадии конденсации можно насчитать до 2000 полос, во вторых случаях – 400-800 полос. Этот способ окрашивания позволяет идентифицировать хромосомы, выявлять делеции, инверсии, инсерции, транслокации, ломкие места и др.

R-окрашивание. Позволяет получить поперечную исчерченность хромосом,обратную таковой при G-окраш, т.е.темным G-полосам соответсвуют светлые R-полосы, и наоборот. Подготовка препаратов сложнее,чем при G. Eсли проводят окрашивание с РН ниже 7(около 5),87грС,20-60мин и с удлиненнием экспозиции,окрасятся только теломерные районы в коротких и длинных плечах(Т-метод).,краситель Гимза.

Q-окрашивание. Получают,используя флюорохромы, которые возбуждаются сине-фиолетовым цветом и имитируют красное,желтое и оранжевое свечение. Из красителей обычно используют акрихин, но более качетсвенные препараты при акрихин-ипритом. Сильно флуоресцирующие участки хромосом соответствуют темным G-дискам, отличие в том,что вторичные перетяжки хромосом 1 и 16 окрашиваются только по G-методу, а интенсивность окрашивания сегментов хромосом 3,4,13,14,15,21,22 и У слабее при использовании Q-метода.

С-окрашивание. На С-окрашенных препаратах идентификация хромосом возможна как и на рутинно-окрашенных, т.е. определение групповой пренадлежности и индивидуальная идентификация для хромосом 1,2,3,9,16,У. Выявляет структурный гетерохроматин во всех хромосомах позволяет лучше,чем другие методы оценивать хромосомный полиморфизм, а также используется для уточнения характера хромосомных перестроек, особенно в перицентрических инверсиях.

6. Кариотип, Аутосомы и половые хромосомы. Морфология хромосом человека, строение хромосом.

Кариоти́п — совокупность признаков (число, размеры, форма и т. д.) полного набора хромосом, присущая клеткам данного биологического вида (видовой кариотип), данного организма (индивидуальный кариотип) или линии (клона) клеток.

Аутосомами у живых организмов с хромосомным определением пола называют парные хромосомы, одинаковые у мужских и женских организмов. Аутосомы обозначают порядковыми номерами. Так, у человека в диплоидном наборе имеется 46 хромосом, из них — 44 аутосомы (22 пары, обозначаемые номерами с 1-го по 22-й) и одна пара половых хромосом (XX у женщин и XY у мужчин).

Половые хромосомы, или гоносомы — хромосомы, набор которых отличает мужские и женские особи у животных и растений с хромосомным определением пола.

По традиции половые хромосомы в отличие от аутосом, обозначаемых порядковыми номерами, обозначаются буквами X, Y, Z или W.

Каждая хромосома состоит из двух сестринских хроматид. Хроматид состоит из 2 половинок – полухроматид или хромонем. Хромонемы содержат уплотненные участки – хромомеры. На стадии метафазы сестринские хроматиды соединены в районе первичной перетяжки, называемой центромерой. Центромера отвечает за расхождение сестринских хроматид в дочерние клетки при делении. На центромере происходит сборка кинетохора. Центромера делит хромосомы на две части, называемые плечами. У большинства видов короткое плечо хромосомы обозначается буквой p, длинное плечо — буквой q.

В зависимости от расположения центромеры различают три типа строения хромосом:

-акроцентрические хромосомы, у которых центромера находится практически на конце, и второе плечо настолько мало, что его может быть не видно на цитологических препаратах;

-субметацентрические хромосомы с плечами неравной длины;

-метацентрические хромосомы, у которых центромера расположена посередине или почти посередине.