2. Особенности абсорбционной спектроскопии для биологических макромолекул.

1. Параметры, измеряемые в абсорбционной спектроскопии.

На рис. 4 показаны спектры, снятые в видимой и УФ-областях для двух биологических молекул [4]. Обычно определяются величины D или . Длина волны, соответствующая максимуму поглощения, называется _макс, и именно при этой длине волны обычно определяют . Некоторые полосы поглощения состоят из многочисленных пиков, и часто регистрируют длины волн, соответствующие пикам, имеющим меньшие молярные коэффициенты погашения. Эти длины волн иногда также называют _макс или указывают, что вещество имеет максимумы поглощения при ₁, ₂,… _n . Иногда измеряют ширину полосы.

В табл. 2 приведен список величин _макс и  хромофоров, часто встречающихся в биологических объектах [4]

Электронные переходы полипептидных и полинуклеотидных цепей и, тем самым, белков и нуклеиновых кислот расположены в УФ-области спектра. Полосы поглощения пептидной связи — СО — NН — лежат в области 185 - 240 нм, здесь же и в более коротковолновой области расположены полосы поглощения алифатических боковых цепей аминокислотных остатков. Ароматические остатки Трп, Фен, Тир имеют полосы поглощения в обл. 280 нм. Азотистые основания в нуклеиновых кислотах поглощают свет в области 260 нм. Таким образом, белки и нуклеиновые кислоты бесцветны, они не поглощают видимый свет.

Таблица 2. Максимумы поглощения и молярные коэффициенты погашения  различных веществ при нейтральных значениях рН, используемых для биологических исследований.

Соединение	макс, нм	 при макс (х10-3)
Триптофан*	280	5,6
	219	47,0
Тирозин*	274	1,4
	222	8,0
	193	48,0
Фенилаланин*	257	0,2
	206	9,3
	188	60
Гистидин*	211	5,9
Цистеин*	250	0,3
Аденин	260,5	13,4
Аденозин	259,5	14,9
Гуанин	246	10,7
Гуанозин	252,5	13,6
Цитозин	267	6,1
Цитидин	271	9,1
Урацил	259,5	8,2
Уридин	261,1	10,1
Тимин	264,5	7,9
Тимидин	267	9,7
ДНК	258	6,6
РНК	258	7,4
* Поглощение других аминокислот незначительно.

Рис 4. Сравнение спектров поглощения двух биологических молекул: флавинмононуклеотида (а) и фикоцианина (б). Спектры можно использовать для идентификации соединения.