Фракционирование и очистка белков
Выделение белков из тканей включает несколько этапов.
1. Гомогенизация (измельчение) ткани для разрушения клеточных и внутриклеточных мембран, препятствующих выделению белков. В процессе гомогенизации нередко добавляются детергенты.
2. Экстрагирование (растворение) белков проводят чаще всего слабыми солевыми растворами.
3. Отделение низкомолекулярных веществ (солей) методом диализа с использованием полупроницаемых мембран, методом гель - фильтрации.
4. Очистка белка от сопутствующих белков (фракционирование), основанная на различных физико-химических свойствах белков.
а) ультрацентрифугирование – разделение белков по молекулярной массе
б) электрофорез – разделение белков по заряду молекулы и молекулярной массе
в) фракционное высаливание – подбор концентрации соли для осаждения различных белков
г) хроматографические методы разделения:
распределительная хроматография – по различной растворимости белков
гель-фильтрация – по различной молекулярной массе белков
ионообменная хроматография – по разнице зарядов белковых молекул
аффинная хроматография – по химическим свойствам различных белков
5. Выделение белка в кристаллическом состоянии проводится путём лиофилизации при низкой температуре.
5. Тесты
1. К колориметрическим методам относятся:
Азотометрический. Спектрофотометрический. Сорбция красителей. Метод Лоури. Биуретовый метод. Рефрактометрический.
2. На способности белков приобретать заряд основаны приёмы их анализа:
Рентгеноструктурный анализ. Электрофорез. Ионообменная хроматография. Потенциометрическое титрование. Рефрактометрия. Ультрацентрифугирование. Колоночная гель-фильтрация.
3. Эффект высаливания белков из растворов связан:
С нарушением вторичной и третичной структур. С разрывом пептидных связей. С потерей белками заряда. С дегидратацией их молекул. С формированием четвертичной структуры.
4. Для наиболее полной экстракции белков из тканей животного происхождения можно использовать жидкости:
Спиртоводную смесь. Ацетон. 10% раствор сульфата аммония. Дистиллированную воду. 10% раствор NaCl. 10% раствор KCl.
5. Освободиться от сопутствующих низкомолекулярных веществ, присутствующих при экстрагировании белков, без потери белками нативных свойств можно методами:
Электрофорезом. Диализом. Колоночной гель - фильтрацией. Осаждением белков трихлоруксусной кислотой.
6. Белки с различной молекулярной массой можно разделить приёмами физико-химического анализа:
Диализом. Электрофорезом. Высаливанием. Потенциометрическим титрованием. Колоночной гель - фильтрацией.
7. При физиологических значениях рН среды может приобретать или утрачивать свой заряд аминокислота:
Цистеин. Аргинин. Тирозин. Серин. Гистидин. Треонин.
8. Присутствие глобулинов в растворе можно доказать:
Электрофорезом. Колоночной гель - фильтрацией. Высаливанием при 50% насыщении сульфатом аммония. Высаливанием при 100% насыщении сульфатом аммония. Денатурацией мочевиной.
9. Для эффекта денатурации характерны признаки:
Быстрое образование осадка. Утрата биологической активности. Сохранение биологических свойств. Нарушение первичной структуры белка. Медленное образование осадка. Нарушение вторичной и третичной структуры (конформации). Сохранение конформации.
10. Для эффекта высаливания характерны признаки:
Обратимость эффекта. Утрата биологических свойств. Сохранение биологических свойств. Нарушение конформации белка. Сохранение конформации белка. Быстрое образование осадка.
11. Денатурацию белков вызывают:
Хлорид натрия. Серная кислота. Уксуснокислый свинец. Сернокислый аммоний. Азотнокислое серебро. Сульфосалициловая кислота. Мочевина. Глюкоза.
12. Направление движения белков в постоянном электрическом поле зависит:
От градиента потенциала. От молекулярной массы белков. От рН среды. От формы белковых молекул. От особенностей аминокислотного состава белков. От наличия в составе белков простетических групп.
13. С помощью высаливания из смеси белков можно выделить:
Оваальбумин. Гамма-глобулин. Сывороточный альбумин.
14. Растворимость белков в воде придают функциональные группы полипептидных цепей:
Карбоксильные. Метильные. Фенольные. Аминные. Карбонильные. Индольные. Гидроксильные. Тиоловые. Иминные.
15. Наиболее объективные данные о молекулярной массе белков дают физико-химические методы:
Криоскопия. Эбулиоскопия. Рентгеноструктурный анализ. Ультрацентрифугирование. Электронная микроскопия.
16. Для точного определения содержания белка в растворе можно применить оптический эффект:
Преломление лучей света. Эффект светорассеивания. Оптическая активность. Поглощение лучей в УФ части спектра.
17. При проведении гель - фильтрации белков используются:
Различия в величине заряда. Различия в молекулярной массе. Различия в оптических свойствах
18. При электрофорезе белков используются:
Различия по величине заряда. Различия по молекулярной массе. Различия оптических свойств
19. Смесь белков церулоплазмина (мол. масса 151 000, изоэлектрическая точка 4,4) и γ - глобулина ( мол. масса 150 000, изоэлектрическая точка 6,3) можно разделить методами:
Электрофореза. Гель - фильтрации. Ионообменной хроматографии
20. Рефрактометрические методы количественного определения белков основаны на эффекте:
Светорассеивания. Светопоглощения. Светопреломления. Вращения плоскости поляризованного света
21. Спектрофотометрические методы количественного определения белков основаны на эффекте:
Светорассеивания. Светопоглощения при определённой длине волны. Светопреломления. Вращения плоскости поляризованного света
22. В изоэлектрической точке молекула белка:
Не диссоциируют. Электронейтральны. Движутся к аноду. Распадаются на полипептиды
23. Белки способны образовывать устойчивые водные раствор благодаря наличию:
Броуновского движения Наличию гидрофобных радикалов. Наличию заряда и гидратной оболочки у молекул белка. Всех перечисленных факторов