2. Материалы и методы исследований

Работа выполнена на кафедре ветеринарного акушерства и гинекологии имени профессора Бочарова И.А. ФГБОУ ВПО «Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины», хозяйстве Ленинградской области Тосненского района (ЗАО «Любань»), в соответствии с государственной темой научно-исследовательских работ ФГБОУ ВПО "Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины" госрегистрации №01860125239, кафедре биохимии животных ФГБОУ ВПО «Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины» в периоды с 2008 по 2011 год.

Научно-производственный опыт проведен в соответствии с установленными требованиями к эксперименту, постановке контроля, соблюдению одинаковых условий кормления и содержания животных в период проведения работы и учета результатов. При постановке опыта были использованы общеклинические, биохимические, гинекологические и другие методы исследования.

Подбор животных проводился по принципу условных аналогов с учетом физиологического состояния, возраста, продуктивности, данных клинического обследования, анамнеза заболеваемости акушерской патологии. Всего обследовано 69 голов черно-пестрой породы, у которых предшествующие роды и послеродовый период сопровождались патологией. Возраст животных в среднем составлял 4-5 лет с продуктивностью 6,7 тыс. кг молока за лактацию.

Условия содержания и кормления рассчитываются по нормам ВИЖ, утвержденным для племенных хозяйств. Рационы кормления составлялись по группам, в зависимости от суточного удоя и периода репродуктивного цикла. Основу рациона составляет заготовленное хозяйством сено, силос, удовлетворительного качества, сенаж, концентрированные корма, поваренная соль и витаминизированные добавки.

Все исследования проводились в конце стойлового периода (конец марта, апрель, начало мая месяцы). Животные содержались в типовых помещениях. Коров запускали в среднем за 60 дней до отела и изменяли рацион питания, исключая сочные корма. Отел проходил в родильных отделениях. Техники-осеменаторы имеют опыт работы более пяти лет и проводят искусственное осеменение коров цервикальным методом с ректальной фиксацией шейки матки. Осеменение проводят при выраженных признаках течки и охоты с учетом завершения инволюции половых органов, при расходе одной спермадозы на одно животное.

Клинические наблюдения за животными проводили в цехе отела, раздоя и осеменения. В послеродовый период проводилось еженедельно гинекологическое обследование поголовья. Фиксировался характер течения послеродового периода, время проявления первой охоты, дата осеменения и его результативность. Диагностика эндометрита осуществлялась клиническими методами с учетом температурной реакции, наличия и характера выделений, данных гинекологического обследования.

Фиксировались общие показатели воспроизводства – сервис-период, продолжительность сухостойного периода, количество коров, выбракованных по бесплодию. Диагностика мастита осуществлялась на основе данных анамнеза и клинического исследования, постановка пробы отстаивания молока. При диагностике субклинического мастита предпочтение отдавали пробам (тестам), с помощью которых выявляли изменения химического состава молока, его физические и биологические свойства (Калифорнийский мастит-тест для быстрой диагностики субклинической формы мастита, компания ДеЛаваль).

В соответствии с поставленными задачами, для изучения биологического состояния организма высокоудойных коров в сухостойного периода в конце стойлового периода, проводили отбор проб крови крупного рогатого скота черно-пестрой породы. Всего обследован материал от 69 голов, у которых предшествующие роды и послеродовый период сопровождались патологией.

Для выявления изменений биохимических и общеклинических показателей крови, производился отбор материала пятикратно в течение сухостойного периода. Взятие крови проводили из подхвостовой вены в вакуумные пробирки. Основные лабораторные исследования проводили в лаборатории ФГБОУ ВПО "Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины" и в Ленинградской межобластной ветеринарной лаборатории.

Для общего клинического анализа отбор материала проводился при переводе коров в цех сухостойных коров (до опыта), затем каждые 10 дней и итоговый забор материала проводился за 10-14 дней до предполагаемых родов. При морфологических исследованиях определяли количество форменных элементов крови (эритроцитов, лейкоцитов), подсчитывали скорость оседания эритроцитов (СОЭ), выводили лейкограмму.

Скорость оседания эритроцитов (СОЭ) определяли по методу Т.Г.Панченкова. Определение количества форменных элементов крови (эритроцитов и лейкоцитов) проводили в счетной камере Горяева с использованием для разведения пробирочный метод по Н.М.Николаеву. Лейкограмму (метод дифференциального подсчета лейкоцитов) выводили по окрашенным мазкам методом Романовского-Гимзы в иммерсионной системе путем дифференциального подсчета 100 лейкоцитов трехпольным методом по Филипченко.

Для биохимического анализа отбор материала проводился двухкратно: при переводе коров в цех сухостойных коров (до опыта) и за 10-14 дней до предполагаемых родов (после опыта). Анализ материала проводили на определение содержания кальция, фосфора, общего белка, каротина, витаминаА в сыворотке крови и резервную щелочность крови.

Концентрацию кальция в сыворотке крови определяли колориметрическим методом с арсеназо-III промышленным набором фирмы «Эко-сервис» (Меньшиков В.В.,1999). Концентрацию неорганического фосфора в сыворотке крови определяли колориметрическим методом промышленным наборам НПФ «Абрис+» (Н.У. Тица,1997). Активность щелочной фосфатазы в сыворотке крови определяли колориметрическим методом с АМП-буфером промышленным набором фирмы «Эко-сервис» (Меньшиков В.В.,1999). Концентрацию общего белка в сыворотке крови определяли биуретовым методом (Холод В.М., Ермолаев Г.Ф, 1988). Концентрацию каротина и витамина А в сыворотке крови определяли методом Бессея в модификации А.А. Анисовой (Холод В.М., Ермолаев Г.Ф, 1988).

Подопытные животные были распределены на 3 группы: первая и вторая опытная и контрольная группы в количестве 23 головы в каждой.

Первой опытной группе животных парентерально вводили препарат «Карофертин» в дозе 25 мл на голову, четырехкратно с интервалом в 10 дней в течение сухостойного периода. Первая инъекция препарата проводилась на 11 день сухостойного периода, а последняя инъекция - за 10-14 дней до предполагаемых родов.

Второй опытной группе животных парентерально вводили масленый раствор витамина А (100 000 МЕ в 1мл) в дозе 5 мл на голову, трехкратно с интервалом 5 дней с 30 по 40 день сухостойного периода.

В контрольной группе животных профилактических мероприятий не проводилось.

Оценка состояния животных в ходе эксперимента проводилась комплексными клиническими методами обследования включающими: данные анамнеза, гинекологическое обследование, наблюдение за течением родового и послеродового периодов, отмечали сроки появления признаков субинволюции матки и эндометрита, продолжительность лечения, сервис-период, оплодотворяемость. Комплексные исследования животных проводили с учетом условий их кормления, содержания и эксплуатации.

При клинической оценке послеродовых осложнений у коров определяли продолжительность родов, время отделение последа и характер выделения лохий, наличие задержание последа, наличие патологических выделений из влагалища, ригидность и консистенцию матки, топографию яичников и матки, которые устанавливали при ректальном исследовании. В течение послеродового периода проводили обследование молочной железы у подопытных коров, на наличие различных форм мастита.

Для статистической обработки данных с целью решения поставленных задач использовался компьютерный математический пакет SPSS 17: анализ первичной статистики (Descriptive statistics); непараметрический критерий Манна-Уитни для независимых выборок; непараметрический критерий Фридмана для зависимых выборок. Критерий достоверности определяли по таблице Стьюдента.

Схема экспериментальных исследований

Профилактика акушерской патологии у высокопродуктивных коров в сухостойный период синтетическим β-каротином

контрольная группа n=23