1. Краткосрочное хранение спермы при плюсовых температурах

Среды – молочно-желточные смеси и синтетические среды.

ГЦЖ – глюкозо-цитарные желточные – не более 3-х суток хранение для быков, не более 1 сут для баранов.

ЛХЦЖ – лактозо-хелато-цитарная желточная среда – не более 2 суток

Разбавляют небольшими порциями, сперму быка разбавляют в 2-6 раз, хряка – до 10 раз, жеребца – 4-5, барана 2-4 раза. Затем расфасовывают в полиэтиленовые ампулы, пробирки, флаконы. Обертывают ватой или синтепоном, помещают в термос или холодильник. Сейчас такое хранение применяют редко.

Для хранения семени хряков применяют среды с хелатоном: ГХУЖ – глюкозо-хелато-цитратно-желточная или ГХУС – сульфатная. Хранят не более 3 суток, +2-5 ºС. Не должно быть колебаний температуры. Семя хряка разливают в узкогорлые стеклянные колбы на 2/3 объема, закрывают бумагой и ватно-марлевой пробкой, хранят в холодильнике, 2 раза в сутки встряхивают. Транспортировка – сперма расфасовывается в емкости, входящие в состав осеменяющего инструмента.

*Хелатон – кислота этилен-диамин-тетрауксусная

2. Длительное хранение спермы.

В жидком азоте -196 ºС. В гранулах (облицованных, необлицованных, или в соломинках – пайетах).

1). Криоконсервирование спермы быков.

а). в виде необлицованных гранул

Свежеполученную сперму (эякулят) постепенно разбавляют (2-5 мин) лактозо-глицерин-желточной средой или глюкозо-глицерин-желточной средой, соотношение 1:2 или 1:6.

Через 30 минут разбавляют основной средой (семя:среда 1 к 19 или 1:49). После 2-го разбавления помещают в холодильник +4-5 ºС на 3-4 часа, где происходит эквилибрация – глицерин проникает внутрь спермиев. Колбу оборачивают теплоизоляционным материалом. После эквилибрации проверяют активность спермиев – д.б. не менее 8 баллов.

После этого замораживают на фторпластовой пластине, не допуская нагревания. Активных сперматозоидов в дозе для замораживания д.б. не менее 37,5 млн. Обычно закладывают с концентрацией 50 млн. с активностью 8 баллов.

Замораживают сперму на пластине с лунками 0,5 cм и объемом 0,1-0,2 мл. Пластину опускают в сосуд с бурным кипением жидкого азота, затем поднимают к краю сосуда и вытирают с нее испарения стерильными салфетками. С помощью прибора или полиэтиленовых капельниц-шприцов сперму закапывают в лунки (0,15-0,2 мл). Пластину выдерживают в парах азота 1-2 мин. На расстоянии 5-10 см от поверхности жидкого азота. Сперма твердеет, затем пластину помещают в жидкий азот для лучшего отделения гранул.

Гранулы ссыпают в пенал или марлевый мешочек или стакан и помещают в сосуд Дьюара на хранение.

Повторное размораживание и замораживание не допускается, т.к. это ведет к снижению качества.

Контроль на выживаемость. Перед закладкой на хранение по 2 дозы из каждого эякулята размораживают. Оценивают активность (не ниже 4 баллов), количество патологических спермиев, концентрацию, выживаемость, помещают в термостат (38-40 ºС), периодически наблюдая активность не менее 5 часов. Все спермии должны сохранять прямолинейное поступательное движение в течение этого времени. По выживаемости судят об оплодотворяющей способности спермы.

После заморозки сперма проходит карантин не менее 20 дней, не отправляется в хозяйства.

Недостаток метода – высока доля ручного труда. Гранулы не имеют маркировки, м.б. затруднена идентификация спермы, т.к. нет покрытия гранул, происходит контакт с хладоагентом (азотом). На поверхности гранул могут адсорбироваться микроорганизмы.

Маркировка. На упаковочное единице (мешочек, стакан, пенал) обязательно указывают вид продукции, № и серия, кличка и № производителя, количество доз семени, дата заморозки, предприятие-изготовитель и его товарный знак, штамп, подпись контролера.

б). в виде облицованных гранул

Разбавленную сперму расфасовывают в полимерные трубки диаметром 3,8-4 мм. С помощью автомата ПРЖ (сварочное устройство) трубку разделяют на порции по 0,25-0,33 мм до 1 мл в каждой дозе. Проводится маркировка. Дозы помещают в тубы, пеналы, где происходит эквилибрация (4-6 часов). Затем помещают в жидкий азот. Недостаток метода – при введении спермы или разрыве гранул спермии травмируются, снижается активность.

б). в пайетах – соломинах

Разбавленную сперму под вакуумом расфасовывают в полипропиленовые трубочки, объемом 0,25 мл. Один конец запаивают, другой конец закрывают пробкой из поливинилового спирта. Маркируют, проводят эквилибрацию и замораживают – до 750 спермодоз на медном щите 5 минут. Хранят в стаканах в сосудах Дьюара.