Электронная микроскопия позволяет выявить вирионы с типичной для вирусов натуральной оспы размерами и строением.
При экспресс-диагностике в РПГА используется иммуноглобулиновый эритроцитарный диагностикум для определения антигенов вирусов натуральной оспы. РПГА проводится с материалом, взятым из элементов сыпи на 7-20 день. Наряду с РПГА используется также ИФА.
Вирусологический метод. Для выделения вирусов натуральной оспы используют куриные эмбрионы; первичные, полуперевиваемые и перевиваемые культуры клеток человека. Наиболее чувствительными к вирусам натуральной оспы являются 11-14-дневные куриные эмбрионы, заражение которых проводят на хорион-аллантоисную оболочку. Индикацию вирусов осуществляют по образованию оспенных бляшек, наличию очагов гиперплазии, дегенерации клеток, а также в реакции гемадсорбции. Идентификацию вирусов проводят в РТГА, РН, РСК.
Серологический метод. Исследуемым материалом является сыворотка крови, в которой с помощью диагностикума пытаются обнаружить антитела к антигенам вирусов натуральной оспы. Применяются РТГА, РСК, РН в куриных эмбрионах и культуре клеток.
Лечение. Этиотропным химиопрепаратом является метисазон (марборан). Используется также противооспенный овечий или человеческий иммуноглобулин. При вторичных бактериальных осложнениях показаны антибиотики, местно используются антисептики.
Профилактика. Массовое применение живой аттенуированной вакцины привело к ликвидации натуральной оспы во всем мире. Последний случай этой болезни был зарегистрирован в 1977 г. В 1980 г. ВОЗ объявила о полной ликвидации натуральной оспы, а в 1982 г. была отменена вакцинация. Вирус натуральной оспы сохраняется в 2 лабораториях (Атланта, США; Новосибирск, Россия). После полного изучения генома вируса натуральной оспы планировалось его полное уничтожение до 2000 г., но этого сделано не было. В мае 1999 г. 191 страна - член ООН проголосовала за отсрочку уничтожения вируса до 2002 г. Предполагается, что вирусы натуральной оспы могут сохраняться в природе до настоящего времени в мумифицированных телах, погибших от натуральной оспы, и в телах, похороненных в условиях вечной мерзлоты.
Вирус коровьей оспы
Особенности вируса. Вирион имеет типичную для ортопоксвирусов морфологию, и при электронной микроскопии неотличим от вакцинного штамма. Размеры вириона 300*200*200 нм. Суперкапсид имеет шипы. Вирионы, лишенные суперкапсида, также инфекционны. Геном вируса коровьей оспы является самым большим среди ортопоксвирусов - 220*103 пар нуклеотидов, очень стабилен, мутации крайне редки. В геноме закодировано до 200 белков, в том числе гемагглютинин и тимидинкиназа. Репликация и морфогенез вириона происходят в цитоплазме. Выход из клетки осуществляется 2 путями: 1) лизисом, если вирионы без суперкапсида; 2) диффузией из комплекса Гольджи к наружным клеточным мембранам, если вирионы имеют суперкапсид.
Резистентность. Вирус выживает в сухом материале при комнатной температуре в течение нескольких месяцев. Выдерживает замораживание до -70оС. Инактивируется при 65˚С, гипохлоридами, фенолами, детергентами и менее эффективно спиртами.
Культивирование. Хорошо размножается на хорион-аллантоисной оболочке куриного эмбриона с развитием геморрагических поражений, но, в отличие от вируса осповакцины, не растет в кожных фолликулах взрослых цыплят и репродуцируется в клетках фолликулов яичников хомяка. Культивируется в клеточных культурах тканей человека, мышей, кроликов, кошек и крупного рогатого скота, а также в организме хомяков, мышей и других лабораторных животных. Предельная температура размножения – 40˚С.
Эпидемиология. Ареал распространения вируса коровьей оспы - Европа и прилегающие участки Азии. Коровья оспа у людей, крупного рогатого скота и домашних кошек встречается преимущественно поздним летом и осенью. В настоящее время коровья оспа у крупного рогатого скота крайне редка. Возможными резервуарами вируса коровьей оспы являются земляные белки, лесные мыши, мыши-полевки, крысы. Индигенные (indigenous - врождённые) случайные хозяева – кошки, человек, собаки, коровы. Неиндигенные случайные хозяева – кошачьи (лев, пума, пантера), слон, жираф, носорог. Экспериментальное заражение коровьей оспой возможно у морских свинок, кроликов, мышей.
Источник инфекции – крупный рогатый скот, кошки (50 % случаев в Великобритании). Механизм передачи вирусов человеку – перкутанный. Заражение происходит обычно при дойке больных животных.
Клиника. У коров поражается вымя. У человека образуются единичные узелки на руках или лице («узелки доильщиц»), возможны лихорадка, тошнота, лимфоаденопатия (особенно у детей). Исключительно редко наблюдается генерализованная форма болезни. Смертность незначительная.
Лабораторная диагностика. Основной метод диагностики – серологический с использованием РТГА, РН, ИФА, РСК (мало информативна). Применяется иммунофлюоресцентная микроскопия и реакция генных ДНК-зондов.
Профилактика неспецифическая. Вакцина не разработана.
Вирус коровьей оспы является вакцинным штаммом для профилактики натуральной оспы, а в современных условиях – одним из векторов в генной инженерии.
Лечение. Показаны метисазон и интерфероны.
Вирус обезьяньей оспы
История открытия. Оспоподобные заболевания среди обезьян впервые были описаны в XVIII в. Возбудитель оспы обезьян открыт Магнусом в 1958 г. Возможность заболевания людей оспой обезьян доказана в 1970 г.
Особенности вируса. Вирион имеет размеры 150*200*30 нм. Морфология типична для ортопоксвирусов. Имеет перекрестно реагирующие антигены с другими ортопоксвирусами; содержит несколько видоспецифических антигенов, в том числе Мо-антиген. Гемагглютинин отсутствует. Геном представлен ДНК длиной 190*103 пар нуклеотидов, кодирующей 30 структурных белков, очень стабилен, его центральная часть не отличается от геномов других ортопоксвирусов. Предполагается, что геном вируса оспы обезьян явился прототипом геном вируса натуральной оспы. Репликация аналогична таковой для поксвирусов.
Культивирование. При культивировании на хорион-аллантоисных оболочках куриных эмбрионов образуются мелкие белые оспины с геморрагиями в центре. Вирус не размножается на культуре клеток СПЭВ, не оказывает цитопатогенного действия и не вызывает гемадсорбции. При внутрикожном введении кроликам и мышам развивается геморрагический некротический процесс, сходный с процессом, вызываемым вирусом коровьей оспы.
Эпидемиология. Источник инфекции – обезьяны. Механизм передачи – аэрогенный, реализуемый воздушно-капельным и воздушно-пылевым путями. Возможна передача болезни от человека к человеку.
В Конго случаи оспы обезьян у человека имеют место и в настоящее время. Большинство заболеваний отмечается в деревнях экваториального пояса. К первичному инфицированию от животных наиболее чувствительны дети 1-8 лет (пик заболеваемости – 3-4 года).
Патогенез. Вирусы проникают в организм через слизистую оболочку носоглотки и верхних дыхательных путей, попадают в регионарные лимфатические узлы, где происходит их размножение. Вирусемия наступает через 1-2 дня, в результате чего поражаются клетки ретикулоэндотелиальной системы. В них происходит дальнейшее размножение вирусов с развитием в дальнейшем повторной вирусемии. Следствием последней являются высыпания на коже и слизистых оболочках, интоксикация. Заболевание сопровождается образованием вируснейтрализующих антител.
Клиника. Инкубационный период – 12 дней. Симптомы сходны с симптомами натуральной оспы. Заболевание начинается с озноба и лихорадки. Через 1-3 дня появляется сыпь на коже и слизистых оболочках полости рта. В отличие от натуральной оспы, развивается генерализованная лимфоаденопатия. При поражении роговицы глаз возможна потеря зрения. Смертность среди невакцинированных – 11 %; погибают дети в возрасте до 9 лет.
Лабораторная диагностика. Материалом для исследования могут служить соскоб папул, содержимое везикул и пустул, корки, смывы из ротоглотки и кровь. Используется электронная микроскопия, вирусологический и серологический методы. Электронная микроскопия позволяет дифференцировать вирус оспы обезьян от других поксвирусов и герпесвирусов в течение 2 ч. Выделение и идентификация вирусов при вирусологическом методе проводится с использованием куриных эмбрионов и серологических реакций (РН, РСК). При серологическом методе диагностики используются ИФА, РИА.
Лечение. Показаны метисазон, интерфероны; при вторичных бактериальных осложнениях – антибиотики, антисептики.
Профилактика. Для профилактики оспы обезьян у людей используется вакцина против натуральной оспы. В случае завоза инфекции на территорию страны проводятся такие же противоэпидемические мероприятия, как и при натуральной оспе: больной подвергается немедленной изоляции до выздоровления, а лица, контактировавшие с ним, вакцинируются и изолируются на 14 дней с момента разобщения с больным.
§ 3. Род Parаpoxvirus.
Включает 6 видов, из которых патогенными для человека являются 3: вирус Орф, вирус бычьего папулезного стоматита и вирус контагиозной эктимы. Вирионы парапоксвирусов имеют овоидную форму, белковая нить капсида имеет шарообразные утолщения.
Вирус Орф
Исторические сведения. Устаревшие названия вируса Орф: 1) вирус контагиозного пустулезного дерматита и 2) вирус контагиозной эктимы.
Особенности вируса. Вирион овоидной формы, имеет липидный двухслойный суперкапсид, размеры – 220-300*147-170 нм. Капсид спирального типа симметрии с поверхностными трубчатыми структурами, образующими правильную спираль. Капсид двояковогнут, связан с 2 латеральными телами. Некоторые вирионы имеют дополнительную внешнюю мембраноподобную структуру клеточного происхождения. Геном включает более 60 генов, в том числе кодирующих ДНК-полимеразу, РНК-полимеразные субъединицы, поли-А-полимеразные субъединицы, топоизомеразу, РНК-геликазу и структурные белки. Концы генома перекрещены. Пассажи в культурах клеток вызывают изменения в геноме. Вирус Орф имеет перекрестно реагирующие антигены с другими поксвирусами, за исключением ортопокс- и каприпоксвирусов.
Резистентность. Вирусы Орф устойчивы к высушиванию, эфиру, хлороформу и глицерину, в сухом виде и при 4˚С сохраняются месяцами. Чувствительны к ультрафиолетовым лучам, γ-излучению. При 56˚С инактивируются в течение 1 ч.
Культивирование. Размножается в культурах клеток бычьих семенников и кожи, эмбриональных гепатоцитах, клетках легких и мышц. Репродукция вируса происходит в цитоплазме. В эксперименте к вирусу Орф чувствительны обезьяны, мыши, собаки, кошки; резистентны цыплята.
Эпидемиология. Источник инфекции – овцы, козы, люди. Механизм передачи – перкутанный, реализуемый контактно-бытовым путем. Передача вирусов от человека к человеку редка.
Клиника. Вирусы Орф поражают кожу человека вокруг рта и ноздрей, поэтому заболевание нередко называют «чешуйчатый рот» или «воспаленный рот». Поражаться могут и другие части тела – кожа рук, слизистая влагалища. После внедрения вирусов кожная сыпь проходит стадии эритемы, папулы, везикулы, пустулы, чешуйки.
Лабораторная диагностика включает электронную микроскопию, вирусологический и серологический метод (РН, моноклональные антитела). При болезни Орф антитела не всегда обнаруживаются в вирусологически подтвержденных случаях.
Лечение. Показаны метисазон и интерфероны.
Профилактика. Неспецифическая профилактика предусматривает термическую и химическую дезинфекцию доильного оборудования, шерсти и пр., специфическая профилактика – вакцинацию животных. Вакцина для профилактики болезни Орф среди людей не разработана.
Вирусы бычьего папулезного стоматита и псевдокоровьей оспы
Распространены повсеместно. Морфологически и физиологически сходны с вирусом Орф, но имеют видоспецифические антигены. Источником инфекции является крупный рогатый скот. Механизм передачи вирусов от больного животного к человеку – перкутанный, реализуется контактно-бытовым путем. Вирусы вызывают локальные папулезные поражения кожи и слизистой оболочки рта. Заболевание не сопровождается лихорадкой, проходит через 3-9 недель без образования рубцов на месте кожных поражений. Лабораторная диагностика и неспецифическая профилактика аналогичны таковым при болезни Орф.
§ 4. Род Molluscipoxvirus.
Единственный представитель рода – вирус контагиозного моллюска.
Вирус контагиозного моллюска
История открытия. Заболевание «контагиозный моллюск» (contagious - инфекционный) впервые описано в 1814 г. Бэйтманом. В 1841 г. Хендерсон и Петерсон отметили характерные внутрицитоплазматические включения. Вирусная этиология болезни установлена в 1905 г. Джулиусбергом при заражении фильтратом пораженной ткани добровольцев.
Особенности вируса. Размер вириона 100*200*300 нм. Морфология типична для поксвирусов. Двойной суперкапсид прилежит к капсиду с 2 латеральными телами. Капсид кубовидной формы. Внутри капсида находится ДНК, связанная с ферментами, необходимыми для определения вирусов в цитоплазме и репликации. Геном имеет концевые повторы, кодирует 40 полипептидов (белковых ферментов), концы ДНК ковалентно связаны. Различают 3 генотипа вируса контагиозного моллюска – I, II, III.
Резистентность. Инактивируется в течение 1 ч при 56˚С; разрушается трипсином, устойчив к эфиру и хлороформу.
Культивирование. Не культивируется на первичных и с трудом - на перевиваемых клеточных культурах. Культивируется в кератиноцитах человека, находящихся на определенной стадии развития.
Эпидемиология. Вирус распространен повсеместно. Первый и второй подтип встречаются 1:1 в США, 2:1 – в Австралии, 50:1 – в Шотландии; вирус третьего подтипа вызывает 1 % всех случаев заболевания. Вирус контагиозного моллюска специфичен только для человека. Источник инфекции – больной человек. Механизм передачи – перкутанный, реализующийся половым и контактно-бытовым путями. Заражению способствуют повреждения кожи. Инфекционность низкая. В Европе пик заболеваемости приходится на 10-12 лет, в странах Океании – на 2-3 года.
Патогенез. Вирусы механически попадают на кожу и через ее повреждения проникают в кератиноциты, где и реплицируются. Клетки базальной мембраны кожи не поражаются. Заболеванию способствует Т-клеточный иммунодефицит.
Вирус контагиозного моллюска опухолероден. Он имеет протеин МС159, сходный с тем, который есть у Gammagerpesvirinae (ген Е8). МС159 взаимодействует с FADD через DED.
Клиника. Инкубационный период – от 7 дней до нескольких месяцев. Заболевание самоограничивающееся. Большинство единичных поражений рассасывается спонтанно через несколько месяцев без лечения. Однако болезнь может персистировать из-за аутоинфицирования. Многочисленные поражения характерны для людей с атопическим дерматитом. Поражение при контагиозном моллюске проявляется красными узелками размером 2-4 мм с втянутым центром. Узелки прогрессируют в жемчужно-розовые капсулы, часто нагнаивающиеся. Узелки при контагиозном моллюске могут быть единичными и множественными, встречаются на всем теле, кроме ладоней и подошв, чаще в области гениталий.
Лабораторная диагностика. При световой микроскопии в клетках пораженных тканей обнаруживаются овоидные моллюсковые тельца. Вирусологическая и серологическая диагностика не разработаны в связи с трудностью культивирования вирусов контагиозного моллюска. Используется реакция генных ДНК-зондов.
Лечение. Хирургическое удаление пораженных участков кожи с использованием жидкого азота, последующая обработка растворами йода или кантаридина.
Профилактика. Вакцина не разработана. Неспецифическая профилактика заключается в соблюдении правил личной гигиены.
§ 5. Род Yatapoxvirus.
Род составляют 3 вида вирусов: 1) вирус опухолей обезьян Яба (для человека не патогенен); 2) вирус оспы Тана и 3) вирус Яба-подобной болезни обезьян. Геномы вируса оспы Тана и вируса Яба-подобной болезни обезьян исключительно сходны между собой и сильно отличаются от генома вируса опухолей обезьян Яба; однако все 3 вируса имеют общие антигены.
Вирус оспы Тана
История открытия. Вирусы впервые были изолированы из биоптатов кожи, людей, заболевших оспой Тана в 1957 г. в Кении (долина реки Тана).
Особенности вирусов. Размер вириона по длинной оси – 250-280 нм. Морфология типична для всех поксвирусов. Геном вируса представлен ДНК длиной 145*103 пар нуклеотидов и кодирует 55 белков. Вирус имеет как видоспецифические, так и перекрестно реагирующие с другими поксвирусами антигены.
Резистентность. В течение нескольких месяцев вирус сохраняет жизнеспособность при -20˚С. На холоде резистентен к 40 % глицерину.
Культивирование. Вирус размножается в культурах клеток амниона человека, почек обезьян, Vero, Нер-2.
Эпидемиология. Источник инфекции – обезьяны. Механизм передачи от животных к человеку – перкутанный, реализуется при тесном контакте. Предполагается передача вирусов комарами. Болезнь Тана встречается в Африке (Кения, долина реки и озеро Тана). Заболевание преимущественно возникает при разливе рек. Вспышка болезни Тана имела место в США (штаты Калифорния, Орегон, Техас).
Патогенез. Вирус оспы Тана повреждает исключительно эпидермис, в результате чего развивается гипертрофия и утолщение эпителиальных слоев с клеточной инфильтрацией в подлежащих тканях; нередко элементы сыпи некротизируются.
Клиника. Заболевание характеризуется непродолжительной (3-4 дня) лихорадкой, иногда болями в спине, головной болью и прострацией. В лихорадочном периоде на коже появляются 1-2 оспоподобных элемента, обычно на руках, лице, шее и верхней части туловища. Поражение сходно с таковым при вакцинировании против натуральной оспы, но при этом не наблюдается образования пустул. Заболевание кратковременное, не смертельное.
Лабораторная диагностика. Используется электронная, люминесцентная микроскопия и серологический метод (ИФА).
Лечение. Показаны метисазон и интерфероны.
Профилактика. Контроль над популяцией комаров, избежание контакта с обезьянами.
Вирус Яба-подобной болезни обезьян
Геном кодирует 44 белка, в том числе 2 ДНКазы, РНКазу и фосфогидролазу. Вызывает заболевания у владельцев обезьян. Клиника идентична таковой при оспе Тана. Последние 20 лет сообщения о заболевании людей и обезьян отсутствуют.