8. Типы вируса ящура и их диагностика.

Возбудитель: семейство Picornaviridae, род Aphtoviru, РНК содержащий, 32 капсомера, кубический тип симметрии.

Устойчивость: не чувствителен к эфиру. Дезинфицируется в 1%-ном растворе формальдегида.

Известно 7 серологических типов вирусов: А, О, С, SAT-1, SAT-2, SAT-3, Азия-1.

Дифференцируется: РНГА, РН, РСК.

Патогенез: Входными воротками для вируса служат – слизистые оболочки ротовой полости и дыхательных путей. В местах внедрения образуются первичные афты.

Клинические признаки: Инкубационный период 1-3 суток. Характерный признак – везикулярное поражение слизистых оболочек рта, кожи венчика и вымени. Вначале повышается саливация и температура. На 2-3 сутки появляются афты.

У молодняка протекает злокачественно, афт нет.

Диагноз ставится на основе: эпизоотологических, клинических, патологоанатомических данных.

Патологический материал: кровь, стенки и содержимое афт; На вирусоносительство – соскобы со слизистой оболочки глотки или пищевода.

Лабораторная диагностика: 1) эксперсс-методы: РИФ, РСК.

2) вирусологические исследования: а) выделение вируса на мышатах сосунках, морских свинках, крольчатах; культуре клеток; естественно- восприимчивых животных. б) идентификация вируса в РСК, РДП, РПГА, РН.

3) ретроспективная диагностика: РПСК, РДП, РИД,РНИФ, РН.

9. Классификация культур клеток и ее применение. Техника получения культур клеток.

Культура клеток – это биологическая живая система, живущая и размножающаяся вне организма. Получают из свежих органов и тканей от здоровых животных, преимущественно из эмбрионов.

Классификация:

1) первично трипсенизированная: получают из паренхиматозных органов эмбрионов здоровых животных, путем разрушения соединительно тканных мостиков между клетками, путем разрушения ферментами (трипсин). И последующим выращиванием (культивированием) в питательной среде. Срок жизни 1-1,5 месяца. Выдерживает 10-12 пассажей.

2) диплоидная культура клеток: получают из первой, в которой сохраняется диплоидный набор клеток. Срок 8-10 месяцев. Количество заражений 50.

3) перевиваемые: выдерживают многочисленные пассажи. Клетки характеризуются безудержным ростом и измененным метаболизмом, как правило получают из опухолевых тканей.

4) суспензионная культура клеток: выдерживает 10 пассажей. Срок 2 недели, клетки плавают во взвешенном состоянии в питательной среде.

5) органная культура: получают из свежих органов, путем измельчения кусочков (размер 1-4 мм), плавающие в питательной среде.

Цели использования:

1) для первичного выделения вируса из патологического материала

2) для поддержания вируса в лабораторных условиях

3) для накопления вирусной массы при производстве вакцин

4) для титрования вируса

5) как тест объект в реакции нейтрализации

Культуру клеток – готовят из любых органов и тканей, но чаще используют эмбрионы (возраст 10-15 суток).

У эмбриона удаляют голову, крылья, лапы, оставляем кожно-мускульный мешок. Отмываем от слизи и крови (солевым раствором). Измельчаем ножницами и помещаем в плоскодонную колбу. Добавляем теплый раствор трипсина, стерильный магнит и помещаем на магнитную мешалку на 20 минут. Трипсин сливаем, наливаем новую порцию и на мешалку. Повторяем в течении часа до полного истощения ткани.

Затем колбу в холодильник (20-30) минут. Потом фильтруют в центрифужную пробирку. Центрифугируют при 3000-4000 об/мин, 20 минут. Сливают трипсин и вносят в питательную среду. Разливают по пробиркам по 1,5 мм культуры и помещают в термостат под углом 5-7⁰ , Т=37⁰С на 3-5 дней. До образования хорошего монослоя.