3. Постановка задачи

Из приведенных в обзоре литературы данных следует, что связывание плюроника с раковыми клетками приводит к повышению их чувствительности к действию различных лекарств. При этом на модельных системах показано, что встраивание плюроников в липидные мембраны увеличивает их проницаемость по отношению к противоопухолевому антибиотику доксорубицину. Была исследована зависимость этого эффекта от структуры полимера и состава мембраны. В то же время ничего не известно, зависит ли этот эффект от структуры самого переносимого вещества. Показано лишь, что, помимо доксорубицина, плюроник ускоряет транспорт некоторых слабых кислот, тетрафенилбора, 14- метилглюкозамина. Однако все эти данные получены в разных условиях и различными методами, поэтому вопрос о взаимосвязи между структурой переносимого через мембрану соединения и степенью ускорения его транспорта в присутствии плюроника к настоящему времени остается неисследованным. Между тем, ответ на этот вопрос важен для понимания механизмов взаимодействия полимеров с биологическими мембранами и представляет большой практический интерес для разработки новых лекарственных форм на основе плюроников.

Цель настоящей работы состояла в установлении природы сил, определяющих эффект плюроника на транспорт соединений через липидные мембраны. Для этого решались две задачи. Во-первых, исследовали взаимодействие плюроников с низкомолекулярными соединениями в водной среде и получили количественные корреляции между структурными параметрами веществ и их способностью взаимодействовать с мицеллами плюроника в водном окружении. Решение данной задачи позволило выявить природу сил, существенных для взаимодействия плюроников с растворенными в воде соединениями. Во-вторых, изучили количественные корреляции между структурой низкомолекулярных соединений и степенью воздействия плюроника на скорость их транспорта через модельные липидные мембраны.

4. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ 4.1. МАТЕРИАЛЫ В работе были использованы следующие коммерческие реактивы:

1. Плюроник Р85 - фирма BASF, Согласно данным производителя, сополимер ИМееТ СИММетрИЧНОе ТрехблОЧНОе Строение: ЭОгбПОадЭОгб.

2. Плюроник L61 - фирма BASF, индекс полидисперсности, определенный с помощью ГПХ, M_w/M_n=1.14, состав был определен с помощью ИК- спектроскопии и оказался равным 10% ЭО и 90 % ПО. Согласно данным производителя, сополимер имеет симметричное трехблочное строение типа АБА, поэтому, полученные хроматографические и спектральные данные отвечают следующей структуре: ЭО2ПО30ЭО2.

3. Полиэтиленоксидмонолауриловый эфир (Brij 35), НБД-С1 (4-Хлор-7- нитробензо-2-окса-1,3-диазол),"Serva" (Германия).

4. Фосфатидилхолин (раствор в этаноле, 10 мг/мл)-препарат фирмы "Biolik" (Украина) и фирмы "Sigma" (США).

5. 1,4-Нафтохинон, глицин, L-фенилаланин, "Merck" (Германия).

6. HEPES (Ы-2-гидроксиэтилпиперазин-Ы'-2-этансульфоновая кислота), "Calbiochem" (США).

7. Рибофлавин, "ICN" (США).

8. DOX, Институт Антибиотиков (Россия).

9. Lineo, "Верафарм" (Россия).

10. 1,6-Дифенилгексатриен-1,3,5, БОК-L-Trp, КБЗ-L-Trp, ДНФ-L-Ala, ДНФ-L-Leu, ДНФ-DL-Met, ДНФ-L-Phe, ДНФ-D-Trp, ДНФ-L-Trp, ДНФ-DL-Tyr, N-бензоил- L-Ala, N-6eH30HJi-L-His, М-бензоил-Ь-Ьеи, "Reanal" (Венгрия).

11. Нафталин, антрацен, бенз[а]антрацен, пирен, перилен, фенол, 1-нафтол, 2- нафтол, 1,3-дигидроксинафталин, 2,3-дигидроксинафталин, 1,5- дигидроксинафталин, 2,7-дигидроксинафталин, 4-хлор-1-нафтол, флуоресцеин, 4',5'-дийодфлуоресцеин, 5(6)-карбоксифлуоресцеин, эозин изотиоцианат, родамин В изотиоцианат, DNM, акридин, L-тирозин, этиловый эфир N-ацетил- L-тирозина, гидроксид тетраметиламмония, пиранин, холевая кислота, о- гидроксигиппуровая кислота, "Sigma-Aldrich" (США).

12. Tris (Трис (2-амино-2-(гидроксиметил)-1,3-пропандиол)) , 1,4-гидрохинон,

хлорид натрия NaCl, хлорид кальция СаС1₂, дигидрофосфат натрия Na2HP0₄

62

2Н₂0, борная кислота Н₃В0₃, гидроксид натрия ИаОН, гидроксид калия КОН, соляная кислота НС1, этанол С2Н5ОН, триэтиламин ОН^Ы, лимонная кислота СбН₈07 Н₂0, сахароза С12Н22О11, "Реахим" (Россия). 13. Диоксан - препарат "Реахим", очищался от пероксидов выдерживанием над щелочью с последующей перегонкой. Для абсолютирования диоксан кипятили ¹ над металлическим натрием в течение 8 часов и перегоняли над натрием. Все порфирины, использованные в данной работе, были любезно предоставлены проф. Соловьевой А.Б. (Институт Химической Физики, РАН, Москва).

Алкил-производные тиоуредилэозина были синтезированы Козловым М.Ю. (Лаборатория полимеры для медицины и биотехнологии, кафедра ВМС, Химический факультет, Московский Государственный Университет, Москва). Все коммерческие реактивы использовались без дополнительной очистки.