1.2. Визначення кількості клітин|клітин| і біомаси нефелометричним| методом

В

Рис. 2 Спектрофотометр

основі методу лежить вимірювання|вимір| зменшення кількості світла при його проходженні через суспензію клітин|клітин|. У певних межах воно і пропорційно концентрації клітин|клітин| і обумовлено переважно розсіянням світла клітинами|клітинами|. Величина цього показника залежить від багатьох факторів (форми і розмірів клітин|клітин|, оптичних властивостей культурального середовища|середи|, довжини хвилі падаючого|падати| світла і т.д.). Тому нефелометричний| метод використовують лише для тих мікроорганізмів, ріст яких викликає|спричиняє| помутніння середовища|середи| і не супроводжується|супроводжується| помітною зміною форми і розмірів клітин|клітин|, утворенням міцелію, плівок або інших скупчень. Поживне середовище|середа|, в якому передбачається|припускається| визначати число клітин|клітин|, має бути оптично прозорим. Зміну інтенсивності світла при проходженні через суспензію клітин|клітин| вимірюють|виміряють| за допомогою фотоелектроколориметра| (ФЕК) або спектрофотометра (рис.2), вибираючи довжину хвилі (зазвичай|звично| в інтервалі 540 – 650 нм|), при якій поглинання світла даною суспензією клітин|клітин| є|з'являється| мінімальним.

1.3. Визначення концентрації клітин мікроорганізмів

Денситометр DEN–1 (рис.3) призначено для вимірювання мутності розчинів в границях діапазону 0,3–5,0 одиниць Мак–Фарланда (100·10⁶ – 150·10⁶ клітин/мл). Денситометр DEN–1 використовують для визначення концентрації клітин (бактеріальних, дріжджових) у процесі ферментації, при визначенні чутливості мікроорганізмів до антибіотиків, ідентифікації мікроорганізмів за допомогою різних тест систем, для вимірювання оптичної щільності при фіксованій довжині хвилі та кількісної оцінки концентрації розчиненої речовини. В основі принципу роботи приладу лежить вимірювання оптичної густини з наступним цифровим представленням результатів у вигляді одиниць Мак–Фарланда (таб. 1)

Таблиця 1

Інтерпретація результатів (у вигляді одиниць Мак–Фарланда) та відповідні числові значення концентрацій бактеріальних суспензій та їх оптичну густину при λ=550 нм.

Рис. 3 Денситометр DEN–1

Стандарти Мак–Фарланда Інтерпретація Концентрація бактерій * Теоретична оптична густина при λ=550 нм 0,5 150·106 клітин/мл 0,125 1 300·106 клітин/мл 0,25 2 600·106 клітин/мл 0,5 3 900·106 клітин/мл 0,75 4 1200·106 клітин/мл 1,00 5 1500·106 клітин/мл 1,25

• концентрація бактерій залежить від розмірів мікроорганізмів. Представлені числові значення є середніми величинами для бактерій. Для дріжджових клітин, розміри яких більше, ці значення повинні бути розділені на 30.

Порядок роботи з приладом:

1. Підключити блок живлення до мережі.

2. Включити прилад, встановивши мережений вимикач у положення ON.

3. На передній панелі приладу загоряється дисплей, показники якого значать наступне:

4. «00» – прилад відкалібрований та готовий до роботи;

5. «СС» – калібровка приладу відсутня, необхідно її виконати;

6. «ЕЕ» – сигнал про помилку оператора, необхідно вимкнути прилад. Потім включити його знову.

7. Починати роботу бажано приблизно через 15 хв. Після включення приладу.

8. Струшуванням пробірки добре перемішайте суспензію мікроорганізмів та вставте пробірку в гніздо денситометра. На дисплеї появиться значення Мак–Фарланда для даного розчину.

9. Після закінчення роботи вимкніть денситометр, встановивши вимикач у положення OFF. Відключіть блок живлення від мережі.