1. Входной тест

2. Практические работы:

Работа 1. Определение групп крови системы АВ0.

Группы крови определяют по свойствам эритроцитов. Для определения групп крови можно использовать стандартные изогемагглютинирующие сыворотки четырёх групп или синтетические цоликлоны. Цоликлоны – это растворы, содержащие аналоги агглютининов α и β. Метод синтетических цоликлонов более простой и надежный. Он позволяет с помощью двух эритротестов анти-А и анти-В провести реакции агглютинации между агглютиногенами А и В эритроцитов и одноименными агглютининами цоликлонов и определить группы крови.

Стандартные сыворотки содержат известные агглютинины. Для определения групповой принадлежности крови по системе АВ0 пользуются стандартными сыворотками 4-х групп 2-х серий. Группы крови необходимо определять в хорошо освещенном помещении при температуре от +15 до +25. Кровь для исследования берут, как правило, из пальца (допускается из мочки уха или же с помощью шприца из вены). Объем исследуемой крови (эритроцитов) должен быть приблизительно в 10 раз меньше объема сыворотки, с которым ее смешивают.

Для работы необходимы: стандартные сыворотки 4-х групп крови 2-х серий, маркированные тарелки, предметные стекла, спирт, вата, скарификаторы.

Методика выполнения работы: На маркированную тарелку наносят в соответствующие сектора по 1-2 капли стандартной гемагглютинирующей сыворотки I, II, III, IY групп. Сыворотки из каждого флакона следуют брать отдельной пипеткой.

Обрабатывают палец спиртом, прокалывают скарификатором. Первую каплю снимают ватным тампоном, а затем уголком предметного стекла берут немного крови и вносят её в каплю сыворотки I группы и хорошо перемешивают. Другим уголком стекла вносят кровь в каплю сыворотки II группы и т.д.

Слегка покачивая тарелку, следят за агглютинацией эритроцитов. Через 3 минуты после появления агглютинации в каждую сыворотку добавляют по одной капле 0,9 % раствора хлорида натрия для исключения неспецифической агглютинации. Окончательный результат читают через 5 минут.

Рекомендации к оформлению протокола: В тетради для протоколов нарисуйте капли сывороток и содержащиеся в них агглютинины. Укажите наличие или отсутствие агглютинации в каплях. Проведите анализ реакций в каждой сыворотке (обсудите причины наличия агглютинации или её отсутствия). На основе анализа сделайте вывод: имеются ли в исследуемой крови агглютиногены А и В. Изобразив исследуемые эритроциты в каждой сыворотке, покажите схематично, с какими агглютининами сывороток связались агглютиногены эритроцитов. Сделайте вывод о группе крови. Сформулируйте основной принцип определения групп крови.

Работа 2. Определение резус-фактора экспресс-методом в пробирках без подогрева.

Для работы необходимы: специально приготовления универсальный реагент - антирезус, пипетки Пастера, пробирки объемом не менее 10 мл, 0,9 % раствор хлорида натрия, скарификаторы, ватные тампоны, спирт. Кровь для исследования берут в количестве 1-2 мл в сухую пробирку без стабилизатора. На пробирке подписывают фамилию и инициалы лица, у которого взята кровь. Обычно после свертывания крови на дне пробирки остается небольшое количество свободных эритроцитов, которые следует употреблять для исследования. Если этих эритроцитов недостаточно, следует встряхнуть сгусток для отделения большего количества эритроцитов. Для исследования можно также использовать свежую кровь, взятую из пальца непосредственно перед исследованием.

Методика выполнения работы: На дно пробирки внести 1 каплю антирезусной сыворотки и 1 каплю исследуемой крови. Пробирку встряхнуть и несколько раз перевернуть так, чтобы содержимое ее растеклось по стенкам. Это значительно ускоряет агглютинацию и делает ее крупно-лепестковой. Агглютинация на стенках пробирки наступает, как правило, в течение первой минуты. Но для образования устойчивого комплекса «антиген-антитело» и четко выраженной агглютинации (а также ввиду возможности замедленной реакции при слабо выраженном резус-антигене) наблюдение следует проводить не менее 3 мин. Для исключения неспецифической агглютинации эритроцитов в пробирку добавить 2-3 мл 0,9 % раствора хлорида натрия и перемешать путем 1-2 кратного перевертывания пробирки. Не взбалтывать.

Оценку результатов проводить визуально. Результат читать по наличию или отсутствию агглютинации эритроцитов. При положительном результате агглютинаты легко различимы в виде красных зерен или хлопьев на прозрачном, почти бесцветном фоне жидкости. При отрицательном результате в пробирке видна равномерно окрашенная в розовый цвет слегка опалесцирующая жидкость.

Рекомендации к оформлению работы: Объясните причины появления или отсутствия агглютинации. Нарисуйте схематично результаты анализа для резус-отрицательной и резус-положительной крови. Сделайте вывод о резус принадлежности крови.

Работа 3. Определение времени свёртывания цельной крови.

Оснащение работы: хирургические перчатки, секундомер или часы с секундной стрелкой, 4 предметных стекла, 6 % раствор цитрата натрия, стеклянные палочки, ватные шарики.

Методика работы: на предметное стекло нанести каплю крови. Пронаблю­дать через сколько времени кровь свернется и произойдет образование сгу­стка. Свертывание крови считается законченным, если капля не растекает­ся по стеклу при покачивании и сдвигается стеклянной палочкой. Аналогично наблюдают за каплей, нанесен­ной на предметное стекло, предварительно согретое и охлажденное. Про­наблюдать за состоянием крови, смешанной с раствором цитрата натрия в течение 15 минут. В выводах дать оценку времени свертывания крови и отметить влияние температуры и цитрата натрия на скорость свертывания.