Лейкоциты

 

Лейкоциты, или белые кровяные тельца, представляют собой образования различной формы и величины. По строению лейкоциты делят на две большие группы: зернистые, или гранулоциты, и незернистые, или агранулоциты. К гранулоцитам относятся нейтрофилы, эозинофилы и базофилы, к агранулоцитам — лимфоциты и моноциты. Свое наименование клетки зернистого ряда получили от способности окрашиваться красками: эозинофилы воспринимают кислую краску (эозин), базофилы — щелочную (гематоксилин), а нейтрофилы — и ту, и другую.

 

В норме количество лейкоцитов у взрослых людей колеблется от 4,5 до 8,5 тыс. в 1 мм3, или 4,5—8,5*109/л.

 

Увеличение числа лейкоцитов носит название лейкоцитоза, уменьшение — лейкопении. Лейкоцитозы могут быть физиологические и патологические, тогда как лейкопении встречаются только при патологии.

Выполняют макрофагальную функцию и защитную

Лейкоцитарная формула

1. Гранулоциты

   А.Нейтрофилы 47-72%  (сегментоядерные(45-65%), палочкоядерные(1-4%), юные(0-1%))

   Б.Эозинофилы(1-5%)

   В. Базофилы(0-1%)

1. Агранулоциты(без зернистости)

         А.Лимфоциты(20-40%)

         Б. Моноциты(3-11%)

Тема2

 Гемостаз – ряд последовательных реакций, которые прекращают, либо уменьшают кроветечение

К этим реакциям относится –

1. Сдавление и сужение поврежденных сосудов

2. Формирование пластиночного тромба

3. Свертывание крови, образование кровяного сгустка.

4. Ретракция тромба и его лизис(растворение)

Сужение сосудов вызывает – серотонин, адреналин, фибринопептид В, тромбоксан А2. Первая реакция – сдавление и сужения – происходит за счет сокращения мышечных элементов, за счет выделения химических веществ. Эндотелиальные клетки(в капилярах) склеиваются и закрывают просвет. В более крупных клетках с гладкомышечными элементами происходит деполяризация. Сами ткани могут реагировать и сдавливать сосуд. Область в районе глаз имеет очень слабые элементы. Очень хорошо сдавливаются сосуду во время родов. . Образование пластиночного тромба(связан с функцией тромбоцитов) Тромбоциты представляют безъядерные элементы, имеют форму плоскую. Диаметр – 2-4 мкм, толщин – 0,6-1,2 мкм, объем 6-9фемтол. Количество 150-400*10 в 9 л. Образуются из мегакариоцитов путем отшнуровывания. Продолжительность жизни – 8-10 дней. Электронная микроскопия тромбоцитов позволила установить, что эти клетки имеют непростое строение, несмотря на их малый размер. Снаружи тромбоцит покрыт тромботической мембраной с гликопротеинами. Гликопротеины образую рецепторы, способные взаимодействовать друг с другом. Мембрана тромбоцитов имеет впячивание, которые увеличивают площадь. В этих мембранах – канальци для выделения веществ изнутри. Фосфомембраны очень важны. Пластиночный фактор из фосфолипидов мембраны. Под мембраной имеются плотные трубочки – остатки саркоплазматического ретикула с кальцием. Под мембраной также имеются микротрубочки и нити актина , миозина, которые поддерживают форму тромбоцитов. Внутри тромбоцитов имеются митохондрии и плотные темные гранулы и альфа гранулы – светлые.  В тромбоцитах отличают 2 типа гранул, содержащие тельца.

В плотных – АДФ, серотони, ионы кальция

Светлые(альфа) – фибриноген, фактор Виллебранда, плазменный фактор 5, антигепариновый фактор, пластинчатый фактор, бета-тромбоглобулин, тромбоспондин и пластинчатый фактор роста.

Пластинки также имеют лизосомы и гранулы с гликогеном.

При повреждении сосудов пластинки принимают участие в поцессах агрегации и образовании пластиночного тромба. Эта реакция обусловленная рядом свойств, присущим пластинке -  При повреждении сосудов обнажаются субэндотелиальные белки – адгезия(способность прилипать к эти белкам за счет рецепторов на пластинке. Адгезии способствует также фактор Виллебранка). Кроме свойства адгезии тромбоциты обладают способностью изменять свою форму и  - выделять активные вещества(Тромбоксан А2, серотонин, АДФ,фосфолипиды мембраны –пластинчатый фактор 3, выделяется тромбин – свертывание - тромбин), характерна также агрегация(склеивание друг с другом). Эти процессы приводят к образованию пластиночного тромба, который способен вызвать остановку кровотечение. Важную роль в этих реакциях играет образование простогландинов. Из фосфолипилов мембран  - образуется арахидоновая кислота(под действием фосфолипазы А2), - Простогландины 1 и 2(под действием циклооксигеназы). Впервые образованы в предстательной железе у мужчин. – Превращаются в тромбоксан А2, который подавляет аденилатциклазу и увеличивает содержание ионов кальция – происходит агрегация(склеивание пластинки). В эндотелии сосудов образуется простоциклин – он активирует аденилатциклазу, снижает кальций, это тормозит агрегацию. Применение аспирина – уменьшает образование тромбоксана А2, не затрагивая простациклин.

Сосудисто-тромбоцитарный гемостаз сводится к образованию тромбоцитарной пробки, или тромбоцитарного тромба. Условно его разделяют на три стадии: 1) временный (первичный) спазм сосудов; 2) образование тромбоцитарной пробки за счет адгезии (прикреп­ления к поврежденной поверхности) и агрегации (склеивания между собой) тромбоцитов; 3) ретракция (сокращение и уплотнение) тром­боцитарной пробки.

 

Сразу после травмы наблюдается первичный спазм кровеносных сосудов, благодаря чему кровотечение в первые секунды может не возникнуть или носит ограниченный характер. Первичный спазм сосудов обусловлен выбросом в кровь в ответ на болевое раздражение адреналина и норадреналина и длится не более 10—15 с. В даль­нейшем наступает вторичный спазм, обусловленный активацией тромбоцитов и отдачей в кровь сосудосуживающих агентов — серотонина, ТхА2, адреналина и др.

 

Повреждение сосудов сопровождается немедленной активацией тромбоцитов, что обусловлено появлением высоких концентраций АДФ (из разрушающихся эритроцитов и травмированных сосудов), а также с обнажением субэндотелия, коллагеновых и фибриллярных структур. В результате «раскрываются» вторичные рецепторы и создаются оптимальные условия для адгезии, агрегации и образо­вания тромбоцитарной пробки.

 

Адгезия обусловлена наличием в плазме и тромбоцитах особого белка — фактора Виллебранда (FW), имеющего три активных цен­тра, два из которых связываются с экспрессированными рецепторами тромбоцитов, а один — с рецепторами субэндотелия и коллагеновых волокон. Таким образом, тромбоцит с помощью FW оказывается «подвешенным» к травмированной поверхности сосуда.

 

Одновременно с адгезией наступает агрегация тромбоцитов, осу­ществляемая с помощью фибриногена — белка, содержащегося в плазме и тромбоцитах и образующего между ними связующие мо­стики, что и приводит к появлению тромбоцитарной пробки.

 

Важную роль в адгезии и агрегации играет комплекс белков и полипептидов, получивших наименование «интегрины». Последние служат связующими агентами между отдельными тромбоцитами (при склеивании друг с другом) и структурами поврежденного сосуда. Агрегация тромбоцитов может носить обратимый характер (вслед за агрегацией наступает дезагрегация, т. е. распад агрегатов), что зависит от недостаточной дозы агрегирующего (активирующего) агента.

 

Из тромбоцитов, подвергшихся адгезии и агрегации, усиленно секретируются гранулы и содержащиеся в них биологически актив­ные соединения — АДФ, адреналин, норадреналин, фактор Р4, ТхА2 и др. (этот процесс получил название реакции высвобождения), что приводит к вторичной, необратимой агрегации. Одновременно с высвобождением тромбоцитарных факторов происходит образовани­ем тромбина, резко усиливающего агрегацию и приводящего к по­явлению сети фибрина, в которой застревают отдельные эритроциты и лейкоциты.

 

Благодаря контрактильному белку тромбостенину тромбоциты подтягиваются друг к другу, тромбоцитарная пробка сокращается и уплотняется, т. е. наступает ее ретракция.

Сущность и значение свертывания крови.

      Если выпущенную из кровеносного сосуда кровь оставить на некоторое время, то из жидкости она вначале превращается в желе, а затем в крови организуется более или менее плотный сгусток, который, сокращаясь, выжимает из себя жидкость, называемую кровяной сывороткой. Это - плазма, лишенная фибрина. Описанный процесс называется свертыванием крови(гемокоагуляцией). Его сущность заключается в том, что растворенный в плазме белок фибриноген в определенных условиях переходит в нерастворимое состояние и выпадает в осадок в виде длинных нитей фибрина. В ячейках этих нитей, как в сетке, застревают клетки и коллоидное состояние крови в целом меняется. Значение этого процесса заключается в том, что свернувшаяся кровь не вытекает из раненного сосуда, предотвращая смерть организма от кровопотери.

Фибринолитическая система Эта система разрушает фибрин. Основным компонентом ее является плазмин (фибринолизин), который образуется из плазминогена под действием тканевого активатора плазминогена (ТАЛ). Плазмин расщепляет фибрин на отдельные фрагменты — продукты деградации фибрина (ПДФ). В дальнейшем тромб, остановивший кровотечение, подвергается ретракции (сжатию) и лизису (растворению). Патологическое тромбообразование в сосудах мозга, коронарных артериях нередко приводит к инсульту, инфаркту миокарда. Тромбоз вен нижних конечностей может осложниться отрывом тромба и занесением его током крови в сосудистую систему легких — тромбоэмболией легочной артерии (ТЭЛА). Для распознавания нарушений в системе свертывания крови существуют различные лабораторные методы исследования.    Свертывающая система крови. Ферментативная теория свертывания.

    Первая теория, объясняющая процесс свертывания крови работой специальных ферментов, была разработана в 1902 г. русским ученым Шмидтом. Он считал, что свертывание протекает в две фазы. В первую один из белков плазмы протромбин под влиянием освобождающихся из разрушенных при травме клеток крови, особенно тромбоцитов, ферментов (тромбокиназы) иионов Са переходит в фермент тромбин. На второй стадии под влиянием фермента тромбина растворенный в крови фибриноген превращается в нерастворимый фибрин, который и заставляет кровь свертываться. В последние годы жизни Шмидт стал выделять в процессе гемокоагуляции уже 3 фазы: 1- образование тромбокиназы, 2- образование тромбина. 3- образование фибрина.

      Дальнейшее изучение механизмов свертывания показало, что это представление весьма схематично и не полностью отражает весь процесс. Основное заключается в том, что в организме отсутствует активная тромбокиназа, т.е. фермент, способный превратить протромбин в тромбин (по новой номенклатуре ферментов этот следует называть протромбиназой). Оказалось, что процесс образования протромбиназы очень сложен, в нем участвует целый ряд т.н. тромбогенных белков-ферментов, или тромбогенных факторов, которые, взаимодействуя в каскадном процессе, все необходимы для того, чтобы свертывание крови осуществилось нормально. Кроме того, было обнаружено, что процесс свертывания не кончается образованием фибрина, ибо одновременно начинается его разрушение. Таким образом, современная схема свертывания крови значительно сложнее Шмидтовой.

  1 фаза свертывания. В ходе первой фазы свертывания, фазе образования протромбиназы, различают два процесса, которые протекают с разной скоростью и имеют различное значение. Это - процесс образования кровяной протромбиназы, и процесс образования тканевой протромбиназы. Длительность 1 фазы составляет 3-4 минуты. однако, на образование тканевой протромбиназы тратится всего 3-6 секунд. Количество образующейся тканевой протромбиназы очень мало, ее недостаточно для перевода протромбина в тромбин, однако тканевая протромбиназа выполняет роль активатора целого ряда факторов, необходимых для быстрого образования кровяной протромбиназы. В частности, тканевая протромбиназа приводит к образованию малого количества тромбина, который переводит в активное состояние V и VIII факторы внутреннего звена коагуляции. Каскад реакций, заканчивающихся образованием тканевой протромбиназы (внешний механизм гемокоагуляции), выглядит следующим образом:

     1. Контакт разрушенных тканей с кровью и активация III фактора - тромбопластина.

     2. III фактор переводит VII в VIIa (проконвертин в конвертин).

     3.Образуется комплекс (Ca++ + III + VIIIa)

     4. Этот комплекс активирует небольшое количество Х фактора - Х переходит в Ха.

     5. (Хa + III + Va + Ca) образуют комплекс, который и обладает всеми свойствами тканевой протромбиназы. Наличие Va (VI) связано с тем, что в крови всегда есть следы тромбина, который активирует V фактор.

     6. Образовавшееся небольшое количество тканевой протромбиназы переводит небольшое количество протромбина в тромбин.

    7. Тромбин активирует достаточное количество V и VIII факторов, необходимых для образования кровяной протромбиназы.

    В случае выключения этого каскада (например, если со всею предосторожностью с использованием парафинированных игл, взять кровь из вены, предотвратив ее контакт с тканями и с шероховатой поверхностью, и поместить ее в парафинированную пробирку),  кровь свертывается очень медленно, в течение 20-25 минут и дольше.

     Ну, а в норме одновременно с уже описанным процессом запускается и другой каскад реакций, связанных с действием плазменных факторов, и заканчивающийся образованием кровяной протромбиназы в количестве, достаточном для перевода большого количества протромбина с тромбин. Реакции эти следующие ( внутренний механизм гемокоагуляции):

     1. Контакт с шероховатой или чужеродной поверхностью приводит к активации XII фактора : XII -- XIIa. Одновременно начинает образовываться гемостатический гвоздь Гайема (сосудисто-тромбоцитарный гемостаз).

     2.Активный ХII фактор превращает XI в активное состояние и образуется новый комплекс  XIIa  +Ca++ +XIa + III(ф3)

     3. Под влиянием указанного комплекса IX фактор активизируется и образуется комплекс IXa + Va + Cа++ +III(ф3).

     4. Под влиянием этого комплекса происходит активация значительного количества Х фактора, после чего в большом количестве образуется последний комплекс факторов: Xa + Va + Ca++ + III(ф3), который и носит название кровяная протромбиназа.

      На весь этот процесс затрачивается в норме около 4-5 минут, после чего свертывание переходит в следующую фазу.

       2 фаза свертывания - фаза образования тромбина заключается в том, что под влиянием фермента протромбиназы II фактор (протромбин) переходит в активное состояние (IIa). Это протеолитический процесс, молекула протромбина расщепляется на две половинки. Образовавшийся тромбин идет на реализацию следующей фазы, а также используется в крови для активации все большего количества акцелерина (V и VI факторов). Это пример системы с положительной обратной связью. Фаза образования тромбина продолжается несколько секунд.

       3 фаза свертывания - фаза образования фибрина - тоже ферментативный процесс, в результате которого от фибриногена благодаря воздействию протеолитического фермента тромбина отщепляется кусок в несколько аминокислот, а остаток носит название  фибрин-мономер, который по своим свойствам резко отличается от фибриногена. В частности, он способен к полимеризации. Это соединение обозначается как Im.

       4 фаза свертывания - полимеризация фибрина и организация сгустка. Она тоже имеет несколько стадий. Вначале за несколько секунд под влиянием рН крови, температуры, ионного состава плазмы происходит образование длинных нитей фибрин-полимера Is который, однако, еще не очень стабилен, так как способен растворяться в растворах мочевины. Поэтому на следующей стадии под действием фибрин-стабилизатора Лаки-Лоранда (XIII фактора) происходит окончательная стабилизация фибрина и превращение его в фибрин Ij. Он выпадает из раствора в виде длинных нитей, которые образуют сетку в крови, в ячейках которой застревают клетки. Кровь из жидкого состояния переходит в желеобразное (свертывается). Следующей стадией этой фазы является длящаяся достаточно долго (несколько минут) ретракия (уплотнение) сгустка, которая происходит за счет сокращения нитей фибрина под действием ретрактозима (тромбостенина). В результате сгусток становится плотным, из него выжимается сыворотка, а сам сгусток превращается в плотную пробку, перекрывающую сосуд - тромб.

       5 фаза свертывания - фибринолиз. Хотя она фактически не связана с образованием тромба, ее считают последней фазой гемокоагуляции, так как в ходе этой фазы происходит ограничение тромба только той зоной, где он действительно необходим. Если тромб полностью закрыл просвет сосуда, то в ходе этой фазы этот просвет восстанавливается (происходит реканализация тромба). Практически фибринолиз всегда идет параллельно с образованием фибрина, предотвращая генерализацию свертывания и ограничивая процесс. Растворение фибрина обеспечивается протеолитическим ферментом плазмином (фибринолизином) который содержится в плазме в неактивном состоянии в виде плазминогена (профибринолизина). Переход плазминогена в активное состояние осуществляется специальным активатором, который в свою очередь образуется из неактивных предшественников (проактиваторов), высвобождающихся из тканей, стенок сосудов, клеток крови, особенно тромбоцитов. В процессах перевода проактиваторов и активаторов плазминогена в активное состояние большую роль играют кислые и щелочные фосфатазы крови, трипсин клеток, тканевые лизокиназы, кинины, реакция среды, XII фактор. Плазмин расщепляет фибрин на отдельные полипептиды, которые затем утилизируются организмом.

     В норме кровь человека начинает свертываться уже через 3-4 минуты после вытекания из организма. Через 5-6 минут она полностью превращается в желеобразный сгусток. Способы определения времени кровотечения, скорости свертывания крови и протромбинового времени вы узнаете на практических занятиях. Все они имеют важное клиническое значение.

 Ингибиторы свертывания (антикоагулянты). Постоянство крови как жидкой среды в физиологических условиях поддерживается совокупностью ингибиторов, или физиологических антикоагулянтов, блокирующих или нейтрализующих действие коагулянтов (факторов свертывания). Антикоагулянты являются нормальными компонентами системы функциональной системы гемокоагуляции.

      В настоящее время доказано, что существует ряд ингибиторов по отношению к каждому фактору свертывания крови, и, однако, наиболее изученным и имеющим практическое значение является гепарин. Гепарин - это мощный тормоз превращения протромбина в тромбин. Кроме того, он влияет на образование тромбопластина и фибрина.

     Гепарина много в печени, мышцах и легких, чем и объясняется не свертываемость крови в малом круге кровотечения и связанная с этим опасность легочных кровотечений. Кроме гепарина обнаружено еще несколько естественных  антикоагулянтов с антитромбиновым действием, их принято обозначать порядковыми римскими цифрами:

     I. Фибрин (поскольку он в процессе свертывания поглощает тромбин).

II.  Гепарин.

III. Естественные антитромбины (фосфолипопротеиды).

IV.  Антипротромбин (препятствующий превращению протромбина в тромбин).

V. Антитромбин крови больных ревматизмом.

VI. Антитромбин, возникающий при фибринолизе.

Кроме этих физиологических антикоагулянтов многие химические вещества различного происхождения обладают антикоагулянтной активностью - дикумарин, гирудин (из слюны пиявок) и др. Эти препараты применятся в клинике при лечении тромбозов.

     Препятствует свертыванию крови и фибринолитическая система крови. По современным представлениям она состоит изпрофибринолизина (плазминогена), проактиватора и  системы плазменных и тканевых активаторов плазминогена. Под влиянием активаторов плазминоген переходит в плазмин, который растворяет сгусток фибрина.

     В естественных условиях фибринолитическая активность крови находится в зависимости от депо плазминогена, плазменного активатора, от условий, обеспечивающих процессы активации, и от поступления этих веществ в кровь. Спонтанная активность плазминогена в здоровом организме наблюдается при состоянии возбуждения, после инъекции адреналина, при физических напряжениях и при состояниях, связанных с шоком. Среди искусственных блокаторов фибринолитической активности крови особое место занимает гамма аминокапроновая кислота (ГАМК). В норме в плазме содержится количество ингибиторов плазмина, превышающее в 10 раз уровень запасов плазминогена в крови.

      Состояние процессов гемокоагуляции и относительное постоянство или динамическое равновесие факторов свертывания и антисвертывания связано с функциональным состоянием органов системы гемокоагуляции (костного мозга, печени, селезенки, легких, сосудистой стенки). Деятельность последних, а следовательно, и состояние процесса гемокоагуляции, регулируется нервно-гуморальными механизмами. В кровеносных сосудах имеются специальные рецепторы, воспринимающих концентрацию тромбина и плазмина. Эти два вещества и программируют деятельность указанных систем.

Группы крови являются имунногенетическими признаками крови, позволяющие определять людей в определенные группы по сходству их антигена. Принадлежность человека к той или иной группе является его индивидуальной особенностью, которая формируется в эмбриогенезе и остается постоянным признаком в течении всей жизни, т.е. подчиняясь законам Менделя мы получаем гены от наших родителей, которые определяют ашу принадлежность к определенным группам крови. Антигены содержатся на мембранах эритроцитов, они присутствуют на других клетках, могут содержаться в секретах – слюне, желудочном соке, кишечном соке. Группы крови имеются и у животных. Группы крови очень важны в клинике – переливание, в судебно медицинской практики – определение вопросов спорного отцовства. Эти данные также используют генетика и антропология. Учение о группах крови – основа иммунологии. Антигены, которые содержатся в эритроцитах – агглютиногены, а антитела содержатся в плазме и носят название агглютининов(могут быть те, которые получаем в ходе эмбрионального развития и приобретенными – естественные. Естественными агглютинины обладают только группы системы АВ0, остальные не обладают естественными агглютининами. При переливании возникает система антиген - антитело).

Ситсема ретус – Rh и другие системы антигенов MN, Pp, Келл-Челлано, Даффи, Льюис, Лютеран, Кид. Антитела образуются только в иммунных реакциях.

Система АВ0 имеет три разновидности агглютиногенов А, В и 0, которые содержатся в эритроцитах. Соответсвенно этим агглютиногенам в этой системе имеются агглютинины альфа(против антигена А) и бета(против антиген В), которые содержатся в плазме. Одновременно содержатся одноименные агглютиногены и агглютинины содержатся не могут иначе произойдет реакция антиген – антитело. Эритроциты начинают склеиваться друг с другом и их мембрана разрушается. Произойдет гемолиз эритроцитов.

 

	Группа крови	Агглютинины	США	РФ
1-0	0	Оба	45	34
2-А	А1, А2	Бета	41	37
3-В	В	Альфа	10	21
4-АВ	А1,В, А2В	0	4	8

Ландштейнер в 1901 году выделил 3 группы крови, Янский в 1903 добавил еще 1 группу крови.

В плазме -

1 группа не содержит агглютиногенов, но есть оба агглютинина

2 группа – агглютинин бета

3 группа – агглютини альфа

4 группа – нет агглютинина

Люди с 1ой группой крови чаще страдают от ишемической болезни и язвы желудка, со 2ой группой – опухолевые заболевания(рак желудка).

Реакция агглютинации – при встрече агглютиногена и агглютинина, при это м эритроциты слипаются и подвергаются разрушению. Реакция агглютинации может быть истинной(с последующим разрушением) и ложной, которая зависит от колебания температуры, pH, концентрации солей(т.е. внешних факторов), но не сопровождающихся гемолизом.

Изогемоаглютинация – при смешивании крови человека. Гетерогемоаглютинация – человека и животного.

Реакция аггютинации лежит в основе определения групп крови. Могут быть использованы стандартные сыворотки, полученные от людей 1ой,2ой,3ей групп крови. 4ую группу не берем,, т.к. там нет агглютинина. Сыворотка – плазма крови без фибриногена. Сыворотка должна обладать агглютинирующимими способностями при разведении 1 к 32, 1 к 34. Можно использовать стандартные эритроциты для определния групп крови. Тогда берутся 2,3,4 групп. Эти эритроциты добавляются в плазму исследуемой крови, но чаще и проще использовать с помощью стандарта. Определяют на белой форфоровой тарелке с использований сывороток 2ух серий.

На предметном стекле наносятся 3 капли сыворотки – 1,2,3 групп, затем кончиком второго предметного стекла вносится капля крови, вносим, размешиваем, а через 5 минут мы смотрим наличие или отсутствие агглютинации. Смотрим на агглютинины. С агглютининами будут взаимодействовать антигены

Эритроциты	0(1) Альфа, бетта	А(2) бетта	В(3) альфа	АВ(4) 0
0 – 1	-	-	-	-
А – 2	+	-	+	-
В – 3	+	+	-	-
АВ – 4	+	+	+	-

 

Может присутствовать антиген резус, который составляет определенную систему групп крови. В 1940 году К.Ландштейнер открывает вместе с А.Виннером антиген Резус.