2. Влияние pH среды на активность ферментов

Исследуемый материал: слюна, разведенная в 100 раз.

Реактивы: буферные растворы, 0,5 %-й раствор крахмала, 0,3 %-й раствор йода в 3 %-м растворе KI.

Х о д р а б о т ы. Cлюну разводят в 100 раз. В 3 пробирки наливают по 2 мл буферных растворов с pH = 1,68; 6,8; 9,86. В каждую пробирку приливают по 1 мл разведенной слюны и 1 мл 0,5 %-го раствора крахмала. Содержимое пробирок тщательно перемешивают и помещают в термостат при 38 С на 10 мин. По истечении указанного времени пробирки вынимают и в каждую добавляют по 1 капле 0,3 %-го раствора йода в 3 %-м растворе KI. По окраске (какой?) находят оптимум pH для амилазы слюны.

3. Дейстие активаторов и ингибиторов на активность амилазы слюны

Исследуемый материал: слюна, разведенная в 40 раз.

Реактивы: 1 %-й раствор NaCl, 1 %-й раствор CuSO₄, 1 %-й раствор крахмала, раствор йода в 3 %-м растворе KI.

Х о д р а б о т ы. B 3 пробирки наливают по 1 мл слюны, разведенной в 40 раз. В первую пробирку добавляют 2 капли дистиллированной воды, во вторую – 2 капли 1 %-го раствора NaCl, в третью – 2 капли 1 %-го раствора CuSO₄. Содержимое пробирок перемешивают. Затем в каждую добавляют по 5 капель 1 %-го раствора крахмала, а спустя 2 мин – по 1 капле раствора I₂ в KI. По окраске (какой?) определяют активатор и ингибитор амилазы слюны.

4. Количественное определение амилазы слюны и мочи по методу Вольгемута

Метод основан на выявлении предельного разбавления раствора амилазы, при котором в стандартных условиях еще происходит расщепление определенного количества крахмала до декстрина.

Амилазное число – количество мл 1 %-го раствора крахмала, расщепляющегося под действием 1 мл неразбавленной слюны (или мочи).

Реактивы: крахмал 1 %-й раствор, йод 1 %-й раствор.

Х о д р а б о т ы. Готовят ряд пронумерованных пробирок в количестве 6 штук. В каждую пробирку приливают из бюретки по 1 мл дистиллированной воды. В первую пробирку добавляют 1 мл слюны, разбавленной в 10 раз, или 1 мл неразведенной мочи (по указанию преподавателя). Содержимое первой пробирки перемешивают путем троекратного втягивания и выпускания жидкости из пипетки, после чего 1 мл смеси переносят во вторую пробирку. Ее содержимое перемешивают тем же способом и 1 мл смеси переносят в третью пробирку и т. д. Из шестой пробирки 1 мл смеси выбрасывают. Таким образом получают серию разведений. Во все пробирки добавляют по 2 мл раствора крахмала (начиная с шестой). Содержимое перемешивают, пробирки помещают в водяную баню при температуре 38 С на 30 мин. Охлаждают в токе холодной воды и закапывают в каждую по 1 капле йода. Содержимое перемешивают. Жидкость окрашивается в желтый, красный, синий цвет.

Расчет амилазного числа (АЧ) производят по формуле:

АЧ = V_крахм· а

где а – степень разведения слюны (или мочи) в последней из пробирок, окрашенных в желтый цвет, V_крахм = 2 мл.

Напишите уравнение ферментативного гидролиза крахмала.

Нормальные значения для амилазных чисел: слюны – 160–320, мочи – 16–64.

Лабораторная работа № 8 «биологическое окисление»

В результате окисления некоторых веществ в организме человека образуется вредная для него перекись водорода, для разложения которой используется фермент каталаза. Этот фермент относят к классу оксидоредуктаз. Его можно обнаружить почти во всех тканях и жидкостях организма.

В результате разложения перекиси водорода под действием каталазы образуется молекулярный кислород и вода:

2Н₂О₂ = 2H₂O + O₂

В медицине определение активности каталазы крови имеет очень большое значение для диагностики рака, туберкулеза, анемии. При этих заболеваниях содержание каталазы в крови снижается.