6. Рецепты питательных сред

6.1. Изотонический раствор - 0,85% раствор хлористого натрия.

Для приготовления изотонического раствора с pH 6,9 - 7,0 используют дистиллированную воду,

pH которой проверяют индикатором бромтимолблау, при его добавлении цвет воды должен быть

бутылочно-зеленым. В иных случаях воду не используют. Изотонический раствор разливают в

пробирки или флаконы в необходимых количествах, стерилизуют при 1 атм. 20 мин.

6.2. 0,1-процентный водный раствор пептона (пептонная вода).

К 1 л дистиллированной воды добавляют 1 г пептона. После размешивания среду кипятят,

Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.

фильтруют и разливают по пробиркам и флаконам в необходимых количествах, стерилизуют при 1

атм. 30 мин.

6.3. Среда для определения общего количества мезофильных аэробных и факультативно

анаэробных микроорганизмов.

    Сухой питательный агар (ДагНИИПС)    - 35,0 г

    Сухой экстракт кормовых дрожжей      - 2,5 г

    Глюкоза                              - 1,0 г

    Вода дистиллированная                - 1000 мл

Довести pH до 7,0, разлить в пробирки по 15 мл, стерилизовать в течение 20 мин. при 121 град.

C (1,1 атм.).

6.4. Среда Кесслер с лактозой.

К 1 л водопроводной воды прибавляют 10 г пептона и 50 мл желчи крупного рогатого скота,

кипятят смесь при помешивании 20 - 30 мин в водяной бане и фильтруют через вату. В полученном

фильтрате растворяют 2,5 г лактозы и доводят объем до 1 л, устанавливают реакцию среды (pH 7,4 -

7,6), после чего добавляют 2 мл 1% водного раствора кристаллического фиолетового, разливают в

пробирки по 5,0 мл, 10,0 мл и во флаконы по 50 мл. Готовая среда должна иметь темно-фиолетовый

цвет. Среду стерилизуют при 1 атм. 10 мин., предварительно опустив в пробирки поплавки.

6.5. Среда КОДА.

Среду готовят по прописи на этикетке. Разливают по 5 и 10 мл в пробирки без поплавков.

6.6. Бульон с лактозой, бычьей желчью и бриллиантовым зеленым - ЖЛБ.

    Пептон                               - 10 г

    Лактоза                              - 10 г

    Сухая бычья желчь                    - 20 г (или 200 мл

                                           свежей фильтрованной

                                           желчи кр. рог. скота)

    Бриллиантовый зеленый                - 0,0133 г

    Дистиллированная вода                - 1000 мл

Растворяют пептон и лактозу в 500 мл дистиллированной воды, добавляют бычью желчь,

растворенную в 200 мл воды, смешивают, доводят объем до 950 мл, pH до 7,4. Добавляют 13,3 мл

0,1% водного раствора бриллиантового зеленого, доводят общий объем водой до 1 л. Разливают в

пробирки с поплавками по 10 мл. Стерилизуют 15 мин. при 121 град. C.

Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.

6.7. ЕС-бульон (для подтверждающего посева на E. coli по методу НВЧ) <*>.

--------------------------------

<*> Пропись ФАО/ВОЗ в модификации Института питания АМН СССР.

    Сухой панкреатический гидролизат     - 20 г (или десятикратное

    казеина                                количество жидкого ПГК

                                           с содержанием ок. 500

                                           мг% аминного азота)

    Желчь крупного рогатого скота        - 15 - 16 мл

    жидкая

    Лактоза                              - 5 г

    K2HPO4                               - 4 г

    KH2PO4                               - 1,5 г

    NaCl                                 - 5 г

    Дистиллированная вода                - 1000 мл

Растворяют ингредиенты, доводят pH до 6,9, разливают по 15 мл в пробирки с поплавками,

стерилизуют в течение 15 мин. при 121 град. C.

6.8. Среда Гисса с глюкозой.

На 1 л дистиллированной воды берется 10 г пептона, 5 г хлористого натрия, 2,5 г глюкозы. В

дистиллированную воду в начале добавляют пептон, хлористый натрий и кипятят до растворения

ингредиентов, затем добавляют 10 мл реактива Андреде. Устанавливают pH 7,2 - 7,4, добавляют

углевод и фильтруют. Среду разливают в стерильные пробирки с поплавками по 2 - 3 мл.

Стерилизуют при 0,5 атм. 20 мин.

Приготовление индикатора Андреде.

Фуксин кислый в количестве 1 г растворяют в 200 мл дистиллированной воды, добавляют 32

мл нормального раствора едкого натра. Полученную смесь настаивают в течение 3-х суток при

комнатной температуре или в течение суток при 37 град. C, после чего фильтруют. Реактив хранят во

флаконе с притертой пробкой.

6.9. Среды Эндо, Левина.

Среды Эндо, Левина (эозинметиленовоголубой агар) выпускаются в сухом виде Дагестанским

НИИ питательных сред, их следует готовить согласно прописям на этикетках банок. Изготовленные и

разлитые в стерильные чашки Петри среды можно хранить при температуре 4 град. C +/- 1 град. C до

Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.

10 суток.

6.10. Среда для определения индолообразования.

    Сухой панкреатический гидролизат казеина - 10 г

    NaCl                                     - 5 г

    Д каппа-трипрофан                        - 1 г

    Дистиллированная вода                    - 1000 мл

Довести pH до 7,0, разлить в пробирки по 5 мл, стерилизовать 15 мин. при 121 град. C.

Реактив на индол:

    Пара-диметиламинобензальдегид            - 5 г

    Соляная кислота конц.                    - 25 мл

    Изоамиловый спирт                        - 75 мл

6.11. Бульон на переваре Хоттингера для определения индолообразования.

В случае отсутствия среды 6.10 используется для теста на индол.

Для приготовления бульона основной перевар Хоттингера разводят дистиллированной водой

(или водопроводной) до содержания аминного азота 120 - 130 мг%, добавляют хлористый натрий в

концентрации 0,5%, K2HPO4 - 0,1%. Устанавливают pH 7,4 - 7,6 и кипятят 15 - 20 мин.

Приготовленный бульон фильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают в пробирки по 5 - 8

мл. Стерилизуют при 1 атм. 20 мин.

Индикаторная бумажка на индол:

    Спирт этиловый 96 град.              - 50 мл

    Парадиметиламинобензальдегид         - 2,5 - 3,0 г

    Фосфорная кислота (конц.)            - 10 мл

Добавленные в спирт ингредиенты смешать до полного растворения. Полученной желтоватой

жидкостью смочить край, приблизительно на 1/3, полоски фильтровальной бумаги. Цвет смоченного

конца полоски бумаги должен быть желтым. При образовании индола изучаемой культурой цвет

бумажки меняется от сиренево-розового до интенсивно-малинового.

6.12. Среда Кларка.

    Пептон                               - 5 - 7 г

    Глюкоза                              - 5 г

    K2HPO4                               - 5 г

    Дистиллированная вода                - 1000 мл

Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.

Растворить ингредиенты, довести pH до 6,9 и профильтровать. Стерилизовать 20 мин. при 115

град. C.

6.13. Раствор метилового красного для теста с метил-рот.

Растворить 0,1 г метилового красного в 300 мл 90% этилового спирта. Развести до 500 мл

стерильной водой, хранить при Т +4 град. C.

6.14. Реактивы для реакции Фогеса-Проскауэра.

5% альфа-нафтол: растворить 5 г альфа-нафтола в 100 мл абсолютного этилового спирта.

Хранить при Т +4 град. C.

40% КОН: растворить 40,0 г КОН (гранулы) приблизительно в 60 мл дистиллированной воды.

Разбавить до 100 мл дистиллированной водой. Хранить при Т +4 град. C.

6.15. Цитратная среда Козера.

    Na(NH4)HPO4                          - 1,5 г

    K2HPO4                               - 1 г

    MgSO4                                - 0,2 г

    Натрия цитрат трехзамещенный         - 3 г

    Дистиллированная вода                - 1000 мл

Растворить ингредиенты в 950 мл дистиллированной воды, добавить 10 мл 0,5% спиртового

раствора бромтимолового синего. Установить pH 6,8, проверяя значение pH на потенциометре.

Довести объем дистиллированной водой до 1 л. Разлить в пробирки по 10 мл, стерилизовать в

течение 15 мин. при 121 град. C.

6.16. Среда Симмонса.

Среда готовится аналогично среде Козера (6.15), но после измерения pH в нее добавляют 20 г

+/- 0,1 г агар-агара на 1 л. Прогревают на водяной бане до растапливания агара, стерилизуют в

течение 15 мин. при 121 град. C. Разливают в стерильные чашки Петри или пробирки.

6.17. Среда Ресселя с мочевиной из сухих питательных сред.

К 100 мл горячей стерильной дистиллированной воды добавляют 4 г сухого препарата с

индикатором BP и лактозой, 0,1 г глюкозы и 1 г мочевины. Полученную среду разливают в

стерильные пробирки по 5 - 6 мл и стерилизуют при 0,5 атм. 20 мин. или текучим паром 2 дня

подряд по 15 - 20 мин.

Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.

6.18. Трехсахарный агар с мочевиной по Олькеницкому.

К 100 мл стерильного питательного агара добавляют 1 г лактозы, 0,02 г соли Мора, 0,3 г

гипосульфита, 1 г сахарозы, 0,1 г глюкозы, 1 г мочевины, 0,4% раствора фенолового красного 0,4 мл.

Предварительно растворяют соль Мора с гипосульфитом в одной пробирке с небольшим количеством

воды, а в другой - мочевину с углеводами. После растворения все смешивают с агаром и фильтруют

через стерильную марлю. Стерилизуют текучим паром 3 дня подряд по 20 мин. Горячую среду

скашивают в пробирках. Незасеянная среда имеет бледно-розовый цвет.

6.19. Солевой бульон.

К 100 мл МПБ с pH 7,0 добавляют 6,5 г хлористого натрия. Разливают в пробирки по 5 мл и

стерилизуют при 1 атм. 20 мин.

6.20. Сахарный бульон.

К 100 мл стерильного бульона Хоттингера с pH 7,2 - 7,4 и содержанием 130 - 150 мг% аминного

азота добавляют глюкозу в количестве 1,0 г. После растворения среду разливают в пробирки по 5 мл

и стерилизуют при 0,5 атм. в течение 20 мин.

6.21. Стерильное молоко.

Стерильное молоко готовят из обезжиренного молока (кислотность 16 - 18 град. Т), которое

разливают в пробирки по 10 мл. Стерилизуют при 0,75 атм. 15 мин. Обезжиренное молоко получают

путем центрифугирования или кипячения с последующим отстаиванием в цилиндре в холодильнике

в течение 2-х дней.

6.22. Молочно-солевой агар.

К 100 мл расплавленного и остуженного до 45 град. C 2% питательного агара с концентрацией

6,5% хлористого натрия добавляют в количестве 10 мл стерильное обезжиренное молоко. Среду

тщательно перемешивают и разливают по чашкам.

6.23. Желточно-солевой агар.

Желточно-солевой агар может быть приготовлен на основе сухого питательного агара, мясо-

пептонного бульона или бульона Хоттингера.

При использовании МПБ к последнему добавляют 2% агар-агара и 6,5% хлористого натрия. При

использовании бульона Хоттингера содержание аминного азота в нем должно составлять 150 мг%,

для получения солевого агара добавляют 2% агар-агара и 6,5% хлористого натрия.

В случае использования сухого питательного агара к последнему добавляют 6,5% хлористого

натрия.

Солевой агар разливают во флаконы по 200 мл и стерилизуют при 1 атм. 30 мин.

Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.

Приготовление рабочего раствора желтка.

На дно стерильной чашки помещают яйцо, которое тщательно протирают ватой, смоченной

спиртом. Пинцетом пробивают с двух противоположных сторон яйца 2 отверстия. Через одно из

этих отверстий из яйца полностью удаляют белок, а затем, несколько увеличив отверстие, выливают

желток в стерильную банку с 5 - 6 бусинами. К желтку постепенно добавляют частями по 20 - 30 мл

180 - 200 мл стерильного изотонического раствора NaCl. Затем содержимое тщательно встряхивают.

Приготовление чашек.

На 100 мл расплавленного и остуженного до 45 град. C солевого агара добавляют 20 мл

рабочего раствора желтка. После полного размешивания агар в условиях бокса разливают в чашки по

15 - 17 мл. Чашки можно хранить в холодильнике до 1,5 - 2 недель.

6.24. Молочный агар.

К 100 мл 2-процентного расплавленного и остуженного до 45 град. C питательного агара

добавляют 10 мл стерильного снятого молока. После тщательного перемешивания агар выливают в

чашки по 12 - 15 мл.

6.25. Цитратная плазма кролика.

Цитратная плазма кролика для реакции плазмокоагуляции выпускается в сухом виде. Готовят

непосредственно перед употреблением согласно прописи, прилагаемой в наставлении.

6.26. Среда для определения реакции окисления маннита в анаэробных условиях.

Среду готовят из сухого препарата с индикатором BP и маннитом по прописи на этикетке.

Среду разливают в пробирки по 12 - 15 мл.

6.27. Среда Плоскирева из сухих питательных сред.

Среду готовят по прописи на этикетке.

6.28. Висмут-сульфит агар (среда Вильсон-Блера).

Среду готовят по прописи на этикетке. Изготовленную и разлитую в стерильные чашки Петри

среду можно хранить в холодильнике при +4 град. C до 10 суток.

6.29. Среда для определения ферментации мальтозы.

Среду готовят из сухого препарата с индикатором BP и мальтозой по прописи на этикетке.

Среду разливают в пробирки по 2 - 3 мл.

Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.