Тема 2. Патофизиология клетки

ЦЕЛИ ЗАНЯТИЯ:

1. Изучение изменения сорбционных свойств цитоплазмы клеток при повреждении.

2. Изучение антиоксидантной защитной системы клеток.

ОСНАЩЕНИЕ ЗАНЯТИЯ:

АППАРАТЫ и ИНСТРУМЕНТЫ: микроскоп с увеличением х20 и х40, ножницы изогнутые, ножницы глазные, пинцет, игла препаровальная, шприц, камера Горяева, покровные стекла, штатив с 4-мя мерными пробирками, шелковая нить.

ЖИВОТНЫЕ и БИОМАТЕРИАЛЫ: лягушки, кровь лягушки в 4% растворе цитрата натрия, кровь мыши – 1% гемолизат.

РЕАКТИВЫ: физиологический раствор (0,87 % раствор NaCl); раствор HCl – 0,1%раствор HCl – 0,1 %; раствор нейтрального красного – 0,1 %; раствор перекиси водорода – 0,1 %; раствор молибдата аммония – 4 %; раствор азида натрия - 10 мМ.

Суспензия крови лягушки в 4% цитрате Суспензия крови лягушки в 4% цитрате

П

Рактическая работа № 1.

«ИЗМЕНЕНИЕ ПРОНИЦАЕМОСТИ ПЛАЗМАТИЧЕСКОЙ МЕМБРАНЫ И СОРБЦИОННЫХ СВОЙСТВ КОЛЛОИДОВ ЦИТОПЛАЗМЫ ПРИ ПОВРЕЖДЕНИИ КЛЕТОК»

Цель работы: Показать нарушение сорбционных свойств коллоидов цитоплазмы клеток при их повреждении как общераспространенного теста на некроз клеток.

Проведение работы: К 1 мл физиологического раствора добавить:

0,1 мл взвеси эритроцитов лягушки (ядросодержащие клетки),

0,1 мл раствора НСl,

0,1 мл 0,1% раствора нейтрального красного.

Под микроскопом в камере Горяева просмотреть клетки и вычислить процент окрашенных клеток.

Добавить еще дважды по 1 капле раствора HCl и повторить микроскопирование и подсчет прокрашенных клеток.

Заключение: Сделать заключение об изменении проницаемости плазматической мембраны клеток и сорбционных свойств цитоплазмы при химической альтерации клеток.

Практическая работа № 2.

«ПОДАВЛЕНИЕ АЗИДОМ НАТРИЯ АНТИОКСИДАНТНОЙ ЗАЩИТЫ ЭРИТРОЦИТОВ»

«РЕГИСТРАЦИЯ КАТАЛАЗНОЙ АКТИВНОСТИ ЭРИТРОЦИТОВ и ЭФФЕКТ NaN₃»

Цель работы: Показать на примере фермента каталазы наличие в эритроцитах антиоксидантной защитной ферментной системы.

Проведение работы: В 3 пробирки добавить:

1-я: 1 мл физ. раствора (контроль реактивов) + 1 мл 0,1% Н₂О₂

2-я: 1 мл физ. раствора + 0,1 мл суспензии крови + 1 мл 0,1% Н₂О₂

3-я: 1 мл физ. раствора + 0,1 мл суспензии крови + 1 мл 0,1% Н₂О₂

+ 1 мл 10 мМ NaN₃

Через 10 мин добавить во все пробирки по 1 мл 4 % молибдата аммония для детекции перекиси в пробах.

ОТМЕТИТЬ: желтую окраску, свидетельствующую о наличии перекиси, в 1-й и 3-й пробирках и отсутствие окраски во 2-й пробирке.

Заключение: сделать заключение о наличии каталазной активности в эритроцитах и ее возможности ее подавления азидом натрия.

Тема 3. Патологическая физиология периферического кровообращения и микроциркуляции

ЦЕЛИ ЗАНЯТИЯ:

1. Изучение характера нарушения кровообращения в органах и тканях при увеличении притока крови по артериям (артериальная гиперемия), при затруднении оттока крови по венам (венозная гиперемия), при ограничении притока крови по артериям (ишемия), при тромбообразовании и эмболии.

2. Изучение патологии периферического кровообращения как одного из звеньев патологических процессов и заболеваний.

ОСНАЩЕНИЕ ЗАНЯТИЯ:

АППАРАТЫ и ИНСТРУМЕНТЫ: микроскоп с увеличением х20 и х40, ножницы глазные, пинцет, игла, препаровальная, шприц, камера Горяева, покровные стекла, шелковая нить, препаровальные дощечки с отверстиями для языка, лапки и брыжейки лягушки.

ЖИВОТНЫЕ: лягушки.

РЕАКТИВЫ: скипидар.

Практическая работа № 1.

«МЕХАНИЗМЫ ВОЗНИКНОВЕНИЯ И ХАРАКТЕР

НАРУШЕНИЙ ПРИ АРТЕРИАЛЬНОЙ ГИПЕРЕМИИ»

Цель работы: Изучить механизмы и характер нарушений периферического кровообращения при артериальной гиперемии.

Проведение работы: Обездвижить, с помощью разрушения зондом спинного мозга, лягушку, зафиксировать ее на препаровальной дощечке спинкой вверх.

Осторожно извлечь пинцетом язык (помнить, что у лягушки корень языка находится впереди и язык запрокинут назад) и расправить его над отверстием, зафиксировав язык булавками у края отверстия.

Ознакомиться с расположением язычных вен и артерий, изучить кровообращение (под малым увеличением микроскопа) языка: скорость тока крови, густоту сетки капиллярных сосудов, их просвет.

Получить артериальную гиперемию - поверхность языка смазать скипидаром или протереть сухой салфеткой, определить изменения кровообращения в тканях языка.

Заключение: Зарисовать и кратко описать картину, обратив внимание на феномен открытия новых капилляров.

Практическая работа № 2.

«ОСОБЕННОСТИ МЕСТНОГО КРОВООБРАЩЕНИЯ ПРИ

ВЕНОЗНОЙ ГИПЕРЕМИИ»

Цель работы: Изучение особенности местного кровообращения при венозной гиперемии.

Проведение работы: Опыт ставится на той же лягушке, предварительно смыв скипидар водой. С помощью пинцета оттянуть в сторону край языка у его корня. Провести лигатуру между расположенной снаружи веной и артерией, перевязать правую вену.

Под малым увеличением микроскопа наблюдать изменение скорости кровотока, увеличение просвета венозных сосудов.

Перевязать левую язычную вену и повторить наблюдение.

Заключение: Зарисовать и кратко описать наблюдаемые картины.

Практическая работа № 3.

«ОСОБЕННОСТИ МЕСТНОГО КРОВООБРАЩЕНИЯ ПРИ

ИШЕМИИ»

Цель работы: Изучение особенности местного кровообращения при ишемии.

Проведение работы: Опыт ставится на той же лягушке. Наложить лигатуру на обе артерии у корня языка лягушки. Наблюдать под микроскопом уменьшение просвета сосудов и скорости кровотока.

Заключение: Зарисовать и кратко описать наблюдаемую картину при ишемии, изменение количества видимых капилляров.

Практическая работа № 4.

«ОСОБЕННОСТИ МЕСТНОГО КРОВООБРАЩЕНИЯ

ПРИ ЭМБОЛИИ БРЫЖЕЙКИ»

Цель работы: Изучение особенности местного кровообращения при эмболии брыжейки.

Проведение работы: Использовать лягушку из предыдущего опыта. Лягушку прикрепить к дощечке брюшком к верху так, чтобы правая ее сторона касалась круглого отверстия дощечки.

Боковым разрезом справа вскрыть брюшную полость. Осторожно вытянуть пинцетом тонкую кишку и прикрепить кишку у краев отверстия так чтобы брыжейка оказалась слегка натянутой над ним.

Вскрыть грудную клетку лягушки, освободить сердце от перикарда.

В желудочек сердца ввести тонкой иглой 0,2 - 0,3 мл взвеси вазелинового (подсолнечного) масла.

Под малым увеличением микроскопа изучить сосуды брыжейки лягушки, движение капелек жира в них и нарушение кровотока, вызванное эмболией.

Заключение: Зарисовать и кратко описать картину эмболии.

Практическая работа № 5.

«ОСОБЕННОСТИ МЕСТНОГО КРОВООБРАЩЕНИЯ

ПРИ РАЗВИТИИ ФЕНОМЕНА СЛАДЖА»

Цель работы: Изучение особенности местного кровообращения при развитии сладжа.

Проведение работы: Лягушку обездвижить разрушением спинного мозга, зафиксировать на препаровальной дощечке спинкой вверх так, чтобы ротовое отверстие располагалось у нижнего края прямоугольного отверстия дощечки.

Пинцетом извлечь язык и зафиксировать его булавками по краям отверстия, не сильно растягивая.

Микроскопировать под малым увеличением состояние сосудистого русла. Определить тип кровеносных сосудов, величину просвета, скорость, структуру кровотока - наличие плазматического слоя вдоль стенок артерий, равномерное распределение эритроцитов в центре артерий и вен, непрерывный ток эритроцитов в микрососудах.

Лягушку приподнять за задние конечности, медленно ввести в полость желудочка сердца 0,25-0,3 мл. 5% раствора этилового спирта При малом увеличении в течение 20-30 мин наблюдать формирование эритроцитных агрегатов и нарушение вследствие этого кровотока в сосудах языка лягушки.

Заключение: Зарисовать и кратко описать картину типичные изменения кровотока при развитии феномена сладжа.