Возбудители бруцеллеза

Печеночно-глюкозно-глицериновый бульон. В мясопептонный печеночный бульон добавляют 1 % глюкозы и 2-3% химически чистого глицерина; устанав­ливают рН 6,8-7,0 разливают в колбы и пробирки и стерилизуют текучим па­ром 3 дня по 30 мин или однократно при 0,5 ати 25 мин.

Печеночно-глюкозно-глицериновый агар. К печеночно-глюкозно-глицериново­му бульону добавляют 2% промытого и измельченного агар-агара, расплавляют в кипящей водяной бане, охлаждают до 50⁰С; устанавливают рН 6,8-7,0, разливают в колбы и пробирки и стерилизуют, как указано в предыдущей про­писи.

Печеночный агар Хеддлсона. Вначале готовят печеночный настой: к 500 г фарша из свежей бычьей печени добавляют 500 мл дистиллированной воды, ки­пятят 1 ч при частом помешивании, доливая воду до прежнего объема; затем стерилизуют при 1 ати 30 мин, процеживают через ватно-марлевый фильтр, раз­ливают в колбы и стерилизуют при том же режиме.

Для приготовления среды смешивают 20 г промытого агар-агара, 10 г пеп­тона, 5 г хлорида натрия и 500 мл дистиллированной воды; смесь подогревают при частом помешивании до расплавления агара и стерилизуют при 1 ати 30 мин; до­бавляют 500 мл печеночного настоя, охлаждают до 60⁰С и устанавливают рН 7,0. Для просветления на 1 л среды добавляют один яичный белок, переме­шивают и стерилизуют при 1 ати 30 мин. Горячую среду пропускают через ват­но-марлевый фильтр, охлаждают до 60⁰С, устанавливают рН 7,0 разливают и вновь стерилизуют при 1 ати 30 мин.

Сывороточно-глюкозный агар. К 835 мл дистиллированной воды добавляют 15 г промытого агар-агара, 10 г пептона, 5 г хлорида натрия и 165 мл мясной воды. Подогревают до растворения компонентов стерилизуют текучим паром в течение 1 ч. Устанавливают рН 7,8 и автоклавируют путем поднятия давле­ния до 2 ати (для выпадения фосфатов), после чего автоклав выключают и медленно спускают пар. Среду пропускают через бумажный фильтр, устанав­ливают рН 7,4, разливают и стерилизуют при 0,7 ати 15 мин.

Перед употреблением агар расплавляют, охлаждают до 50⁰С и асептически добавляют 5% стерильной инактивированной лошадиной или бычьей сыворот­ки и 1 % стерильной глюкозы (можно пользоваться 20%-ной медицинской глю­козой, фасованной в ампулах); перемешивают и разливают в чашки или про­бирки.

Картофельный агар. Крупный отборный картофель моют и очищают, затем отвешивают 1 кг, добавляют равное по весу количество дистиллированной воды и варят до готовности. Отвар сливают, доводят до 1 л дистиллированной водой и процеживают через 2 слоя марли. Прибавляют пептона 10 г, хлорида натрия х. ч. 5 г, глицерина 30 мл и промытого агар-агара 30 г. Смесь варят в кастрю­ле при помешивании до полного расплавления агара, устанавливают рН 7,2 10%-ным раствором едкого натра. Среду стерилизуют в автоклаве при 0,7 ати 30 мин, пропускают через ватно-марлевый фильтр, добавляют 10 г глюкозы и после ее растворения разливают в колбы нужного объема. Стерилизуют текучим паром трижды по 30 мин или однократно при 0,5 ати 30 мин.

Перед употреблением среду расплавляют и после охлаждения до 50⁰С к ней прибавляют 10% нормальной лошадиной или бычьей сыворотки. Ее предвари­тельно прогревают при 56⁰С в течение 30 мин, фильтруют через пластинку «СФ» в приборе Зейтца и выдерживают при 37⁰С одни сутки (проверка на сте­рильность). После перемешивания готовую среду разливают в чашки и про­бирки.

Элективная среда с генцианвиолетом и малахитовой зеленью.

Приготовление растворов красок. 0,1 т каждого красителя растирают от­дельно в ступке, прибавляя постепенно 20 мл этилового спирта. После полного растворения к краске добавляют 80 мл дистиллированной воды. Полученные 0,1%-ные растворы хранят в плотно закупоренных флаконах в темном месте. Срок хранения 3 месяца.

Прuготовленuе среды. На 100 мл расплавленного и охлажденного до 50⁰С МППА (или МПА) с глюкозой и глицеринам, рН 6,8-7,0, асептически добавляют по 0,5 мл растворов красок, перемешивают и разливают в чашки. Конечная концентрация красителей 1 : 200 000.

Элективная среда Кроля. На каждые 100 мл расплавленного и охлажденно­го до 50⁰С печеночного агара Хеддлсона добавляют 0,5 мл 0,1%-ного раствора генцианвиолета (см. предыдущую пропись), перемешивают и разливают в чашки.

Плотные среды с фуксином и тиомином. 0,1%-ные растворы основного фук­сина и тионина готовят так же, как и раствор генцианвиолета (см. выше).

Среды с фуксином. Расплавляют в двух колбах по 100 мл МППА (или МПА) с глицерином и глюкозой, рН 6,8-7,0 охлаждают до 50⁰С и добавляют в одну колбу 2 мл 0,1%-ного раствора основного фуксина, а в другую - 1 мл. Содержимое колб перемешивают и разливают в маркированные чашки. Конеч­ная концентрация фуксина будет соответственно 1 : 50 000 и 1: 100 000.

Среды с тионином. Расплавляют в трех колбах по 100 мл МППА ( или МПА) с глицерином и глюкозой, рН 6,8-7,0. В охлажденной до 50⁰С агар вливают в первую колбу 4 мл 0,1%-ного раствора тионина, во вторую 2 и в третью 1 мл. Разлив выполняют, как указано выше. Концентрация красителя будет соответственно 1 : 25000, 1 : 50000 и 1 : 100000.

Среда заменитель агара Альбими. Сначала готовят дрожжевую воду: 1 кг пекарских дрожжей заливают 1 л дистиллированной воды, кипятят на медлен­ном огне при помешивании до растворения дрожжей и фильтруют через полотно. Фильтрат в замеренном объеме вливают в колбу, добавляют по объему 1% хлороформа, перемешивают, плотно закрывают резиновой пробкой, обвязывают сверху бумагой и хранят в темном прохладном месте. Срок хранения не более двух недель.

Приготовление среды. На 1 л дистиллированной воды берут 20 г сухого пептона, 20 мл дрожжевой воды, 5 г хлорида натрия х. ч. и 20 г агар-агара. Подогревают в кипящей водяной бане до полного растворения компонентов, ох­лаждают до 60 ос и устанавливают рН среды 7,2-7,3 10%-ным раствором ед­кого натра. Затем, среду прогревают текучим паром в течение 30 мин фильтруют через ватно-марлевый фильтр, предварительно смоченный теплой водой и хорошо отжатый. К фильтрату добавляют 1 г глюкозы и 0,2 г бисульфита натрия (NаНSОз) и вновь устанавливают рН 7,2-7,3. Среду разливают в посуду и стерилизуют текучим паром 40 мин, а потом дополнительно при 0,4 ати (110⁰С) в течении 20 мин.