3.4 Лабораторная работа № 4 выделение биомассы методом центрифугирования

Цель работы: определить зависимость эффективности центрифугирования от частоты оборотов и продолжительности для дрожжей и молочнокислых бактерий.

Содержание работы: путём микроскопирования установить чистоту культуры, общее количество дрожжей, количество почкующихся, мёртвых и упитанных клеток. Методом предельных разведений провести контроль производственной культуры молочнокислых бактерий. Варьируя режимы центрифугирования, подобрать оптимальные.

Материальное обеспечение: термостат, холодильник, автоклав, сушильный шкаф, рН-метр, камера Горяева;, микроскоп, бинокулярная лупа, спиртовка, пипетки, пробирки, предметные стёкла, бактериологические петли, вата, марля; 0,5 %-ный раствор йода; метиленовый синий 1:5000, чашки Петри, пробирки с физиологическим раствором, колбы с агаризованной питательной средой, баня водяная.

3.4.1 Контроль производственной культуры

Контроль производственной культуры дрожжей проводят согласно п. 3.2.1, производственной культуры молочнокислых бактерий – согласно п. 3.2.3.

3.4.2 Центрифугирование биомассы

В данной серии экспериментов буде определятьс сырая биомасса, поэтому методика включает два этапа: отделение клеток микроорганизмов от культуральной жидкости о определение их массы. Предварительно взвешивают пустые центрифужные пробирки и подбирают пару из двух наиболее близких по массе центрифужных пробирок. Запрещается центрифугировать нечётное число пробирок. Пробирки устанавливают в центрифуге строго напротив друг друга.

В 2 центрифужные пробирки наливают точно измеренный объём тщательно перемешанной жидкой культуры, который в зависимости от её плотности колеблется от 5 до 20 мл. Продолжительность центрифугирования и число оборотов зависят от размеров клеток. Чем они меньше, тем больше требуется оборотов и тем продолжительнее должно быть время ценрифугирования. Серии опытов по определению параметров центрифугирования проводят отдельно для дрожжей и для молочнокислых бактерий. Параметры приведены в таблице 4.

Таблица 4– Параметры центрифугирования

число оборотов/мин; продолжительность ценрифугирования, мин	1000	2000	3000	4000	5000
2
5
10
15
20

После центрифугирования надосадочную жидкость осторожно сливают, осадок промывают подкисленной дистиллированной водой (1 мл концентрированной соляной кислоты на 1 л воды) и снова центрифугируют при таких же параметрах. Супернатант сливают тотчас после остановки центрифуги, в противном случае часть осадка может быть потеряна.

Строят графики зависимости эффективности центрифугирования от числа оборотов и продолжительности.