4. Столбняк

Острое заболевание человека и животных из группы раневых анаэробных инфекций, вызываемое Clostridium tetani. Возбудитель имеет вид прямой палоч­ки размерами 0,5-1x4-10 мкм, в цитоплаз­ме содержит включения, перитрих, капсулу не образует. Споры круглые, больше диаметра вегетативной клетки, расположены терминаль­но. Хемоорганотроф, строгий анаэроб, растет на сахарных и кровяных средах, специальных средах для анаэробов при 37°С, рН 7-7,9, дает сплошной нежный налет или отростчатые колонии, на кровяном агаре - с зоной гемолиза. В глубине плотных сред формиру­ет хлопьевидные колонии, в столбике жела­тины — древовидное разжижение, на среде Кита-Тароцци - легкое помутнение. Уг­леводы не ферментирует, не образует индола, восстанавливает нитраты, молоко свертывает медленно. Продуцирует сильный экзотоксин, состоящий из фракций тетаноспазмина, на­рушающего передачу нервного импульса в спинном и головном мозге и вызывающего судороги мышц, и тетанолизина, обусловли­вающего гемолиз. Возбудитель С. имеет ви-доспецифические О-Аг и экзотоксин и типос-пецифические Н-Аг (по этому Аг выделяют около 10 сероваров). Споры высокоустойчи­вы к физ. и хим. факторам, способны многие годы выживать в почве и пыли. Заболевание протекает тяжело и дает высокую летальность. Несмотря на характерную клин, картину, в ряде случаев возникает необходимость микробиологического подтверждения диагноза. Для этого ис­пользуют выделение к-ры из содержимого ран по такой же схеме, как при анаэробной ране­вой газовой инфекций. Решающий метод диагностики — выявление токсина в крови, тканевой или культуральной жидкости в РН на мышах. Для этого 2 мышам в/м в верхнюю треть бедра вводят исследуемый материал в дозе 0,5 мл (контроль) и 2 мышам таким же способом по 0,5 мл смеси материала с 200 АЕ столбняч­ной антитоксической сыворотки, предварительно инкубированной в течение 40 мин при ком­натной температуре. Если в материале при­сутствует токсин, контрольные мыши погиба­ют при явлениях восходящего столбняка, опытные выживают. Для профилактики столбняка вводят столбнячный анатоксин и противостолбняч­ную сыворотку.

5. Ботулизм

Тяжелое токсинемическое за­болевание человека из группы энтеральных клостридиозов. Возникает в результате при­ема пищи, содержащей экзотоксин Clostridium (см. Клостридии) botulinum. Иногда б-нь развивается вследствие инфицирования ран этим микробом. Возбудитель имеет пал очко-видную форму размерами 0,6—1x3 — 9 мкм, подвижен (перитрих), капсулу не образует, грам+ (в старых к-рах грамвариабелен), хе-моорганотроф, строгий анаэроб. Эндоспора овальной формы, расположена субтерминаль­но, превышает диаметр бактерии-спорангия, на основании чего ее внешний вид сравнивают с теннисной ракеткой. Споры высоко резистен-тны к нагреванию, выдерживают температуру 100°С в течение 3-5 час, а также к кислой среде, высоким концентрациям солей. Вегета­тивные формы растут на специальных жид­ких и плотных средах в условиях глубокого анаэробиоза (3-10 мм рт. ст.) при 25-35°С, образуя равномерное помутнение на жидких средах и окруженные зоной гемолиза непра­вильной формы колонии на кровяном агаре. В высоком столбике сахарного агара коло­нии имеют вид пушинок или зерен чечевицы. Активно ферментируют белки (желатину, свер­нутый яичный белок, кусочки мяса) и углево­ды (глюкозу, левулезу, фруктозу, мальтозу, декстрин, адонит и др.). Возбудитель обитает в кишечнике животных, включая человека, в почве, воде. Может размножаться в органи­ческих субстратах внешней среды, особенно в пищевых продуктах, где в анаэробных усло­виях и при 22-25°С продуцирует экзотоксины 7 сероваров: А, В, С_Ь2, D, E, F, G. Токсин обладает чрезвычайно высокой ядовитостью для человека, устойчивостью к нагреванию (10-15 мин при 100°С), кислой реакции, пи­щеварительным ферментам, хорошо всасыва­ется через кишечную стенку в лимфу и кровь в неизмененной или активированной (тип Е) форме и обусловливает длительную токсинемию. Токсин связывается нервными клетка­ми и блокирует передачу импульсов через нервно-мышечные синапсы. Клиника в на­чальной стадии, до необратимой фиксации токсина, полиморфна. Специфические призна­ки обусловлены расстройством деятельности нервных ядер продолговатого мозга. Сероте­рапия более эффективна в ранние сроки бо­лезни и при использовании сыворотки против того типа, который вызвал отравление. В связи с этим, а также с возможным атипичным течением возникает необходимость лабораторного под­тверждения диагноза.

Главный метод диагностики ботулизма — установление нали­чия и типа токсина в пищевых продуктах (или сырье, из которого они изготовлены), с которыми связывают заболевание, в сыворотке и плазме крови, в рвотных массах, промывных водах желудка, испражнениях, моче. Продукты (20-30 г) растирают в ступке с 20-30 мл физ.раствора или желатино-фосфатного буфера. Суспензию продуктов, так же как и испражнения, рвот­ные массы и др. иссл. материалы центрифу­гируют, надосадочную жидкость отсасывают. Наличие токсина в таком материале и с-ке и его тип устанавливают в РН на белых мы­шах. Техника биопробы состоит в том, что каждый из типов иссл. материала (1,4 мл) смешивают с 0,6 мл поливалентной (А, В, Е) диагностической (не лечебной!) антитоксичес­кой сыворотки, инкубируют при комнатной темпера­туре 5 мин, после чего смесь в объеме 0,7—1 мл вводят в/б или в/в двум белым мышам. Двум контрольным мышам делают инъекции с такой же дозой материала, смешанного с 0,6 мл физ.раствора. Для контаминированных микро­бами проб необходим еще один контроль — прогретый при 80-90°С в течение 20 мин ма­териал, который в прежнем объеме и прежним способом вводят двум мышам. Каждый мате­риал вводят отдельным шприцем. В случае содержания в нем токсина контрольные жи­вотные погибают, как правило, через 6 —24 ч (наблюдение ведется до 4 сут.) при явлениях паралича мышц, западения мышц брюшной стенки («осиная талия»), дыхательной недо­статочности. Мыши, получившие смесь мате­риала с сывороткой, выживают. Аналогичным спо­собом устанавливают тип токсина. При нали­чии типовых антитоксических эритроцитарных диагностикумов серотип токсина лучше определять в РПГА.

Культуру возбудителя выделяют из исследуемого мате­риалов путем их посева в 4 флакона с 75-150 мл регенерированной жидкой питатель­ной среды (бульон Хоттингера, казеиново-грибной, пепсин-пептон). Два флакона прогрева­ют при 80°С 20 мин, остальные два не прогре­вают. Флаконы инкубируют в анаэростате или под слоем вазелинового масла толщиной 0,5 мл при 28° и 35°С. На 2, 4, 6 и 10-е сутки дела­ют мазки с окраской по Граму, отбирают по 10-15 мл культуральной жидкости и ставят РН с поливалентной и типовыми антитокси­ческими сыворотками, определяют биохимические свойства культуры.

Иллюстративный материал

Рис.1 Опистотонус

Рис.2 Мазок из чистой культуры C.tetani. окраска по Граму

Рис.3 Превотеллы

Рис.4 Фузобактерии

Рис.5. Бактероиды

• Литература

1. Коротяев А.И. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология : учебник для мед. вузов / А. И. Коротяев, С. А. Бабичев. - 5-е изд.,испр.и доп. - СПб. : СпецЛит, 2012. - 760 с. : ил.

2. Поздеев O.K. Медицинская микробиология /Гл.ред В.И. Покровский, O.K. Поздеев. - М.: ГЭОТАР МЕДИЦИНА, 2006, 2007, 2010 — 766 с.

3. Азизов И.С. Основы клинической микробиологии. – Караганда: Б-н, 2006 – 280 с.

4. Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии : атлас / ред.: А. С. Быков, А. А. Воробьев, В. В. Зверев. - 2-е изд., доп. - М. : Мед. информ. агентство, 2008. - 272 с. : ил.

5. Борисов Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология: учебник. – М.: Мед. информ. агентство, 2005 – 736 с.: ил.

6. Воробьев А.А. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: Уч-к для ст-в мед.вузов/ред.Воробьев А.А. – М.: МИА, 2008, 2012 – 704 с.

7. Гиллеспи Стефен Х. Наглядные инфекционные болезни и микробиология: учеб.пособие: пер. с англ. Бамфорл. – М.: ГОЭТАР – Медиа, 2009 – 136 с.: ил.

8. Зверев В.В., Бойченко М. Н. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: в 2 т.: учебник. - М: ГЭОТАР-Медиа 2010, 2011. - 480 с., т.2

9. Красноженов Е.П. Микробиологическая диагностика инфекционных заболеваний : Учеб. пос. для ФПК / Красноженов Е.П. ; ред. Бочкарева О.П. - Ростов н/Д:Томск : Феникс:СГМУ, 2006. - 298 с.

10. Марри, П.Р. Клиническая микробиология : Краткое руководство. Пер.с англ. / Марри, П.Р., Шей И.Р. - М. : Мир, 2006. - 424 с. : ил.

11. Микробиология : учебник / ред.: В. В. Зверев, М. Н. Бойченко. - М. : ГЭОТАР-Медиа, 2012. - 608 с. : ил.

12. Нетрусов А.И., Егоров М.А. Практикум по микробиологии: учеб. пособие для студентов вузов. – М.: Академия, 2005. – 608 с.: ил.

13. Подколзина В.А. Медицинская микробиология: Конспект лекций. – М.: Приориздат, 2005. – 222 с.

14. Руководство по медицинской микробиологии : учеб. пособие / ред.: А. С. Лабинская, Н. Н. Костюкова, С. М. Иванова. - М.: БИНОМ Кн.2: Частная медицинская микробиология и этиологическая диагностика инфекций. - 2012. - 1152 с. : ил.

15. Царев В. Н. Микробиология, вирусология и иммунология: Учебник / ред. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010. - 581 с. ил.

16. Компьютерная программа "Диаморф" - "Медицинская микробиология" - атлас-руководство по бактериологии микологии, протозоологии и вирусоло­гии под редакцией акад. проф. Воробьева А.А.

• Контрольные вопросы (обратная связь)

1. Что такое анаэробы?

2. Что является естественной средой обитания облигатных анаэробов?

3. Основные группы строгих анаэробов?

4. Возбудители газовой гангрены рода Clostridium/

5. Из каких двух фракций состоит столбнячный экзотоксин?

6. Какова устойчивость спор C.tetani?

7. Сколько типов токсинов образует C.botulinum?