Порядок выполнения работы:
1. Приготовьте препараты для микроскопического исследования.
А) Продезинфицируйте, спиртом и с помощью пламени спиртовки предметное стекло. Для микроскопирования микроскопических грибов кусочек грибницы перенисите в каплю воды, нанесенную на предметное стекло. Сверху накройте покровным стеклом. Избыток жидкости убирите кусочками фильтровальной бумаги.
Б) Продезинфицируйте, спиртом и с помощью пламени спиртовки предметное стекло. На предметное стекло нанесите каплю воды. Пользуясь препаровальной иглой, поместите маленький кусочек дрожжей и всё тщательно перемешайте. Накройте препарат покровным стеклом. Избыток жидкости убирают кусочками фильтровальной бумаги.
2. Изучите морфологию плесневых грибов и дрожжей.
Рассмотреть под микроскопом и зарисовать: форму и расположение клеток дрожжей, строение грибницы и органов размножения микроскопических грибов.
3.Сделайте вывод о проделанной работе.
Рис.2.
Формы дрожжевых клеток
а- овальная, яйцевидная; б – цилиндрическая; в – апикулятная, лимоновидная; г – стреловидная; д – треугольная; у – серповидная; ж – колбовидная; з, и – удлиненная, мицелевидная
Контрольные вопросы:
Каково строение клетки микроскопических грибов?
Какие классы выделяют у микроскопических грибов и каковы особенности в строении у каждого класса?
Что такое дрожжи?
Какие формы клеток у дрожжей существуют?
Практическая работа №3 Приготовление питательных сред и выращивание микроорганизмов
Цель работы: научиться готовить питательные среды для выращивания микроорганизмов.
Материальное обеспечение:
Приборы и посуда: эмалированная кастрюля, водяная баня, пробирки, марля, вата, предметное стекло, микроскоп.
Материалы и реактивы: агар, бульонные мясные кубики, пептон, хлорид натрия, картофель, желатин, комок почвы, фуксин.
Теоретические сведения
Культивирование микроорганизмов является одним из основных методов микробиологии. От умения культивировать микроорганизмы в лабораторных условиях в значительной степени зависят успехи их изучения и практического применения.
В лабораторных условиях микроорганизмы культивируют на питательных средах, поэтому питательная среда должна содержать все вещества, необходимые для их роста. Основными компонентами любой питательной среды для культивирования микроорганизмов являются соединения углерода и азота. По потребностям в углероде микроорганизмы принято делить на две большие группы - автотрофы и гетеротрофы.
Для развития гетеротрофных микроорганизмов среда должна содержать органические соединения в зависимости от их индивидуальных особенностей: кислоты, спирты, углеводороды, ароматические соединения.
Вторым основным компонентом питательной среды является источник азота. Питательные среды для культивирования некоторых микроорганизмов должны включать одну, несколько или полный набор аминокислот в концентрации от 0,1 до 0,05 г на 100 мл. Потребности микроорганизмов в некоторых аминокислотах часто удовлетворяют, добавляя к среде гидролизат белка.
Многие микроорганизмы требуют наличия в среде факторов роста, к которым относятся витамины, пурины, пиримидины и аминокислоты. Чтобы подчеркнуть потребность микроорганизмов в факторах роста, принято использовать термины «прототрофы» и «ауксотрофы». Прототрофы не нуждаются в факторах роста, для ауксотрофов абсолютно необходимо наличие в среде одного или нескольких факторов роста.
По составу принято выделять естественные, или натуральные, среды и синтетические среды.
Натуральными называют среды, в состав которых входят продукты животного или растительного происхождения. К таким средам относятся овощные или фруктовые соки, животные ткани, разведенная кровь, молоко, воды морей, озер и минеральных источников, отвары или экстракты, полученные из природных субстратов, таких как мясо, почва, навоз, раз-личные части растений, клетки микроорганизмов.
Натуральные среды используются главным образом для поддержания культур микроорганизмов, накопления биомассы и для диагностических целей. К числу натуральных сред, широко применяемых в лабораторной практике, относятся мясо-пептонный бульон, неохмеленное пивное сусло, дрожжевая и картофельная среды, почвенный экстракт.
Мясо-пептонный бульон (МПБ) представляет собой мясную воду, к которой добавляют 1% пептона и 0.5% NaCl. МПБ - богатая питательная среда, но она почти не содержит углеводов. В случае необходимости их добавляют к МПБ чаще всего в количестве 1 - 2 г на 100 мл. МПБ стерилизуют при 1 атм.
Синтетические среды - это среды, в которые входят лишь соединения определенного химического состава, взятые в точно указанных количествах. Синтетические среды широко используют при исследовании обмена веществ, физиологии и биохимии микроорганизмов, для разработки состава синтетических сред, обеспечивающих рост микроорганизмов или усиленный биосинтез какого-либо продукта жизнедеятельности. Синтетические среды могут иметь относительно большой набор компонентов, но могут быть и довольно простыми по составу.
Наряду с натуральными и синтетическими средами выделяют так называемые полусинтетические среды. Главными компонентами полу синтетических сред являются соединения известного химического состава -углеводы, соли аммония или нитраты, фосфаты и т.д. Однако в их состав всегда включаются вещества неопределенного состава, такие как дрожжевой автолизат, почвенный экстракт или гидролизат казеина. Эти среды находят широкое применение в промышленной микробиологии для получения аминокислот, витаминов, антибиотиков и других важных продуктов жизнедеятельности микроорганизмов.
Дифференциально-диагностические среды особенно широко применяются в санитарной и медицинской микробиологии для быстрой идентификации определенных групп микроорганизмов.
По физическому состоянию различают жидкие, сыпучие и плотные среды. Жидкие среды широко применяются для накопления биомассы или продуктов обмена, исследования физиологии и биохимии микроорганизмов, а также поддержания и сохранения в коллекции культур микроорганизмов. Сыпучие среды применяют главным образом в промышленной микробиологии для культивирования некоторых продуцентов физиологически активных соединений, а также в коллекциях для сохранения культур микроорганизмов. К таким средам относятся, например, разваренное пшено, отруби. Плотные среды используют для выделения чистых культур, в диагностических целях для описания колоний, определения количества микроорганизмов, их антибиотической активности, для хранения культур в коллекциях и в ряде других случаев. С целью уплотнения сред применяют желатину или агар.
Агар используют для уплотнения особенно часто. Он представляет собой сложный полисахарид, в состав которого входят агароза и агаропектин. Агар получают из некоторых морских водорослей и выпускают в виде пластин, стебельков или порошка. Агар удобен тем, что большинство микроорганизмов не используют его в качестве субстрата для роста. В воде он образует гель, который плавится примерно при 100 °С и затвердевает при 40 0С. Поэтому на агаризованных средах можно культивировать значительную часть известных микроорганизмов. Чаще всего агар добавляют к средам в количестве 1,5 %. Если необходимо получить более влажную среду, вносят 1,0 %, а более плотную и сухую - 2 - 3 % агара.