6.3.2. Взятие материала от мелких млекопитающих

Мелкие млекопитающие (преимущественно грызуны) часто бывают основным объектом исследований при эпизоотологическом мониторинге за природными очагами многих зоонозных инфекций, в т.ч. и вирусной этиологии. Для проведения серологических анализов на инфицированность позвоночных животных арбовирусами требуется, как правило, 1,0 - 1,5 мл сыворотки, которую в таком объеме получают из 4 - 5 мл крови. Однако у мелких грызунов цельной крови обычно удается взять не более 1,5 - 2,0 мл. Поэтому, если нет задачи исследовать животных индивидуально, в пробу с одной точки отлова объединяют 2 - 3 особи одного вида, пола и желательно возраста.

Зверьков после умерщвления вскрывают в течение 5 - 7 мин. Для этого готовят 2 пары ножниц и пинцетов. Одной парой вскрывают кожу (фартуком), второй - грудную клетку, рассекая на несколько частей сердце, и стерильным шприцем забирают кровь. Ее сливают в пробирку по стеклу и, набрав 4,5 - 5,0 мл, ставят при температуре 20 °С на 30 - 60 мин. для образования сгустка. Затем сгусток обводят стерильной пастеровской пипеткой или прокаленной на огне стальной спицей, чтобы отделить его от стенок пробирки. После обведения сгустка пробирки закрывают резиновыми пробками и ставят в прохладное место (холодильник или на лед). Оптимальная температура - 0 °С. Если нет холодильника, пробирки можно сохранять, обернув их мокрым материалом и поместив в тень или на сквозняк. Через 4 - 6 ч сыворотку крови отсасывают стерильными пастеровскими пипетками и переносят в стерильные емкости (пенициллиновые или инсулиновые флаконы, виалки и др.). Сыворотку хранят в холодильнике (или замораживают в сосуде Дьюара). При длительном хранении в холодильнике в сыворотку добавляют консервант (мертиолят натрия 1:10000), чтобы ингибировать постороннюю микрофлору. Длительное хранение без холодильника недопустимо. Пробирки и флаконы заранее этикетируют. На этикетке указывают номер пробы, дату забора крови, вид животного, его пол и возраст (число особей, если от нескольких зверьков), адрес отлова. Эти данные должны совпадать с данными в журнале, где дополнительно записывают, были ли сняты с животного эктопаразиты (если да, то указывают их таксономическую принадлежность и количество).

После взятия крови в первую очередь берут головной мозг, затем сгустки крови и кусочки внутренних органов. При заборе пробы головного мозга первой парой инструментов снимают шкуру, разрезая кожу затылочной области на уровне 1 - 2 шейных позвонков. Кожу срезают по бокам до конца лба и откладывают ее вперед. Края разрезанной кожи и череп обрабатывают 70° спиртом или, в крайнем случае, 5%-ным йодом. Второй парой инструментов срезают по шву верхнюю часть черепа и снимают ее, оголяя головной мозг. Браншами ножниц (стерильных) забирают кусочки мозга и над пламенем спиртовки помещают в стерильный флакон, этикетируют, затем сразу же замораживают в сосуде Дьюара.

Для взятия проб внутренних органов также пользуются двумя парами инструментов. Кусочки органов должны быть объемом 1 - 1,5 куб. см. Пробы каждого органа складывают в отдельные стерильные флаконы, сопровождают соответствующими этикетками и помещают в сосуд Дьюара, где они хранятся до момента исследования.

От животных, добытых давилками или капканами, материал следует брать не позже 2 ч после их гибели (поимки), т.к. в более поздние сроки антигены арбовирусов (особенно в головном мозге) начинают распадаться.