Рис, 21, Признаки различий между земляничной- и хризантемной нематодами (по э. М. Дроздовскому, 1965):

А — земляничная нематода; Б — хризантемная нематода; а — головной конец; б — кончик хвоста самки; в— хвост самца; 1 — стилет; 2 — мукро; 3 — папиллы; 4 —спикула

вом оцепенении) остается прямым. На черешках, стеб­лях, цветоносах образуются утолщения . . . . . Стеблевая нематода (земляничная раса) — Ditylenchus dipsaci Kuehn.

5(4). Пищевод афеленхоидного типа. Бурса у самцов отсутствует, хвост при тепловом оцепенении загибается на брюшную сторону.

6(7). Хвост самца при тепловом оцепенении загибает­ся на 45...90°. Вентральный отросток спикулы длинный, с выростом. Ооциты в яичнике расположены в один ряд. Конец хвоста самки с одним отделенным шипиком (мукро). Черешки листьев утоньшаются, либо укорачи­ваются и срастаются, образуются беспластинчатые и воронковидные листья . ... . Земляничная нематода — Aphelenchoides fragariae Ritzema-Bos.

7(6). Хвост самца при тепловом оцепенении загибает­ся, на 180°. Вентральный отросток спикулы короткий, без выроста. Ооциты расположены в 2 или более рядов. Ко­нец хвоста самки с несколькими мукро (рис. 21). Симп­томы повреждения на землянике похожие, но слабее выражены ... . . . . . Хризантемная

нематода — Aphelenchoides ritzemabosi Schw.

8(3). Нематоды поражают корни.

9(10). На корнях развиваются некрозы. Червеобразные нематоды живут внутри корня . . . род Пратиленх — Pratylenchus.

10(9). На корнях мелкие галлы. Вздутые самки - внутри галлов . Северная

галловая нематода — Meloidogyne hapla Chitw.

Кроме пратиленхов и галловых нематод, корни могут быть повреждены нематодами — эктопаразитами из ро­дов ксифинема — Xiphinema, лонгидорус — Longidorus и пратиленхами — Pratylenchus.

Описание главнейших видов

Стеблевая нематода (земляничная раса) — pitylen-chus dipsaci Kuehn (отряд шишкоиглые нематоды — Tylenchida, сем. настоящие шишкоиглые — Tylenchidae). Описано около 20 биологических рас этого вида/приуро-ченных к различным группам растений-хозяев, но нераз­личимых морфологически. Длина тела самок составляет 1..Л,6 мм при ширине 0,04...0,06 мм. Задний отдел пище­вода не накрывает начало кишечника. Вершина яичника доходит до пищеводных желез, показатель ^=80%. Бурса охватывает А длины хвоста (рис. 22).

Стеблевая нематода находится внутри растительной ткани, где проходит все фазы развития. Типичное прояв­ление дитиленхоза'— образование утолщений (галлов) на черешках и жилках листьев, цветоносах и усах за счет разрастания паренхиматозных клеток в местах скопления паразита. При этом растения часто стано­

вятся карликовыми, пораженные части искривляются» листовые пластинки скручиваются или становятся гоф­рированными. Ткань на ниж­ней поверхности листа вы­глядит губчатой. Цветы уродливые, ягоды мелкие и жесткие. Сильно поврежден­ные растения почти не пло­доносят. Особенно заметны эти признаки весной и осенью. На старых планта­циях гибнет до 60% расте­ний.

Зимует нематода в сер­дечках, черешках; к маю — июню ее численность возра­стает. Развитие одной гене­рации при температуре 15... 24 °С завершается за 20... 30 дней. Расселение нематод происходит преимуществен­но с посадочным материа­лом, но и в почве нематода может сохраняться до 2 лет. Круг растений-хозяев обши­рен. Кроме земляники, мо­жет поражать огурцы, тома­ты, лук, горох, гречиху и многие виды сорных расте­ний. Встречается во многие областях, где культивирует­ся земляника: в республи­ках Прибалтики, в Белорус­сии, на Украине и в Крыму, в Центрально-черноземном районе и нечерноземной зо­не, в Поволжье, на Кавказе, Урале, в Новосибирской области, республиках Средней Азии и на Дальнем Во­стоке.

Земляничная нематода — Aphelenchoides fragariae Rit­zema-Bos. (отряд шишкоиглые нематоды — Tylenchida, сем. афеленхоидиды — Aphelenchoididae). При наличии свежего материала нематод легко выделить, замочив предварительно кусочки растений в часовом стекле в те­чение 20...30 мин. Поскольку земляника может быть за­ражена одновременно и стеблевой нематодой, следует в первую очередь обратить внимание на различия этих видов. Пропорции тела у земляничной нематоды более стройные. Длина самок 0,6...1 мм при ширине 13...18 мкм, самцов — 0,6...0,8 мм при ширине 14...18 мкм. Поскольку у представителей этого семейства пищеводные железы лежат не в ткани Рис. 22. Стеблевая нематода пищевода, а в полости тела, пищевод у них плавно переходит в кишечник, тогда как у (по Э.М.Дроздовскому) стеб­левых задний отдел пищевода увеличен и четко обо­соблен от средней кишки. а – самка; б – голова; в – хвост Различно положение вульвы самок: у земляничной — показатель V=70%, У стебле­вой— самца: 1 – стилет; 2 – средний 80%. Особенно легко различаются по внешнему виду самцы; у самцов земляничной бульбус; 3–пищеводные железы; нематоды отсутству­ет бурса, хорошо развитая у стеблевых, есть только толстая 4 – нервное кольцо; 5 - яичник; клиновидная спикула и 3 пары папилл (рис.21).

6 - яйцо; 7 – матка; 8 – вульва;

6. задняя матка; 10 - анус;

11 – спикула, 12 – рулек;

13 – бурса

Если изучаются живые нематоды, можно подогреть предметное стекло, проведя им несколько раз над пла­менем спиртовки, тогда станет заметно, что у самцов земляничной нематоды хвостовой конец тела загибается на брюшную сторону под углом 45...90° (у стеблевых остается прямым).

Земляничная нематода —эктопаразит. Она заселяет чаще всего почки, где находится между зачатками листьев и цветков, пазухи листьев и бутоны. Различают несколько типов поражений, которые возникают обычно при взаимодействии нематоды и бактерии (Coryneba-cterium fascians Tiff.).

Чаще встречается симптом афеленхоидоза — весенняя карликовость (краснота). Листовые пластинки мелкие, асимметричные, с неровными краями, старые листья же­сткие, темно-зеленые. Черешки листьев теряют опушен-ность, становятся тонкими и у некоторых сортов земля­ники лилово-красными (рис. 23, 4). Цветоносов немного, ягоды мелкие. Симптом «цветная капуста» проявляется в виде укорочения и утолщения большинства побегов, которые ветвятся и часто срастаются, цветочные почки сидят скученно, листовые пластинки становятся узкими и морщинистыми. Цветоносы толстые и короткие с недо­развитыми ветвями и уродливыми бутонами, цветоложе и чашелистики которых сильно разрастаются. Если развиваются цветки, то они обычно уродливы, а лепестки имеют зеленоватую окраску, ягоды также всегда уродливы (рис. 23, 1, 2, 3).

Образование беспластинчатых листьев (шилец) может встречаться самостоятельно или в сочетании с предыдущими типами повреждения. В середине розетки появляются недоразвитые, изогнутые наружу, лишенные листовых пластинок черешки или усы (рис 23,5). Все перечисленные проявления заболевания далеко не всегда встречаются в чистом виде, а часто сочетаются в одном растении или могут быть выражены неполностью. Потери урожая достигают 40...75%, особенно в дождливые годы.

Нематода зимует в почках во всех фазах развития (взрослые особи, личинки, яйцд), легко переносит про­мерзание. Все образующиеся на больном растении мо­лодые розетки заселены паразитом, численность кбто-рого быстро нарастает и достигает максимума в конце июня — начале июля. На развитие одной генерации тре­буется около 2 нед. Помимо земляники повреждает многие виды декоративных и дикорастущих растений, откуда может переходить на садовую землянику. Из сор­няков растений-хозяев следует отметить мокрицу, лап­чатку гусиную, фиалку трехцветную, лютики и некото­рые др.

Обнаружена в Прибалтике, северных, центральных и восточных областях РСФСР, на Дальнем Востоке, в Закарпатье, Узбекистане и Киргизии.

В течение сезона развивается 6...8 и более генераций.

Хризантемная нематода — Aphelenchoides ritzemabosi Schw. (отряд шишкоиглые нематоды — Tylenchida, сем. афеленхоидиды — Aphelenchoididae). Близки построению к земляничной нематоде, но крупнее ее: длина самок 0,7...1,2 мм, самцов 0,7... 1 мм. Тело тонкое, стройное, го­лова резко отделена от тела. Ведет преимущественно эндопаразитический образ жизни, обитая в тканях листьев, почках, лепестках, чашелистиках и венчиках цветков, однако при наличии влаги выходит на поверх­ность растения. На листьях поврежденных растений по­являются пятнами участки с измененной окраской, огра­ниченные жилками. Цвет их сначала желто-зеленый» постепенно делается бурым, лист скручивается и засы­хает. Отмирание листьев на растении идет снизу вверх. Цветки хризантем имеют уродливый вид, заселенные не­матодой почки на кустах смородины и крыжовника от­мирают. Признаки повреждения на землянике сходны с таковыми, вызываемыми земляничной нематодой. Зи­муют нематоды в надземных частях растений и в небольшом числе — в почве. Повышенная влажность — обильный полив и дожди — способствуют расселению червей и переходу их на другие растения. Размножаются внутри растительной ткани. Развитие одной генерации проходит за 11...14 дней. Кроме хризантем, паразитируют на других видах декоративных растений, а также на та­баке, смородине, крыжовнике, малине, землянике, В Крыму, например, многие плантации земляники за­селены именно этим видом нематоды. Многие сорняки также служат растениями-хозяевами.

В течение вегетационного периода развивается не­сколько генераций.

Пратиленх — род Pratylenchus Filip. (отряд шишко­иглые нематоды — Tylenchida, сем. хоплолаймиды — Hoplolaimidae). Мелкие нематоды длиной 0,5...0,7 мм при ширине 0,02...0,03 мм. Оба конца тела закругленные, Склеротизация головы выражена хорошо, стилет с мощ­но развитыми базальными головками. Средний бульбус округлый, задний отдел пищевода в виде лопасти покры­вает начало кишки. У самок развит один яичник, вульва смещена к заднему концу: У=68...89%. Бурса у самцов охватывает конец хвоста. У многих видов самцы отсут­ствуют.

Паразитируют пратиленхи внутри корней, приводя к образованию на них бурых некротических пятен и отми­ранию. Растения выглядят угнетенными, отстают в росте, листья или их концы желтеют. Злаки слабо кустятся, колосья мелкие, потери урожая могут быть значитель­ными. Сильно страдает земляника, где часто наблюдает­ся гибель растений от корневых гнилей и вертициллезного увядания. Нематоды обнаружены практически на всех обследованных плантациях ягодных культур. Вре­дят также в древесных питомниках, где бывают особенно угнетены саженцы. Большинство видов этого рода счи­таются опасными вредителями культурных растений. Пратиленхи повсеместно широко распространены.

В корни проникают как личинки, так и взрослые особи. Там они продвигаются по коре. Самка отклады­вает 1...2 яйца в день, развитие происходит в течение 6...8 нед, и за вегетационный период бывает 5...6 генера­ций. При наступлении неблагоприятных условий (низ­кие температуры, засуха) нематоды, особенно личинки, впадают в анабиоз.

Проникающий пратиленх — P. penetrans широко распространен в зоне умеренного климата, где повреждает саженцы древесных культур. Вредит груше, яблоне, сливе, вишне, крыжовнику и черной смо­родине, повреждает зерновые и особенно бобовые куль­туры, картофель, морковь, капусту. Невосприимчивыми оказались все сорта свеклы, поэтому их можно исполь­зовать в севообороте.

Зазубренный пратиленх — P. crenatus вредоносен для злаков, в корнях которых численность его может достигать огромных количеств (до 30 тыс. особей на 10 г корней овса). Повреждает также древес­ные культуры, декоративные растения, клевер красный и белый.

Поскольку угнетение растения и появление на корнях некрозов может быть вызвано и иными причинами, кор­ни исследуемых растений нужно выдерживать в воде сутки и более для выделения из них нематод. От сво-бодноживущих и сапробитических нематод пратиленхи отличаются наличием стилета и более медленными и плавными движениями.

В прикорневой почве, промытой через специальные тонкие сита, можно обнаружить эктопаразитических не­матод, вооруженных длинным копьем (лонгидорусы и ксифинемы). При высокой численности они в сильной степени угнетают растения и могут заражать их виру­сами.

Работа 4. ОБСЛЕДОВАНИЕ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ КУЛЬТУР И ПОЧВЫ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ФИТОНЕМАТОД

Оборудование и материалы. Почвенные буры или ложки объе­мом 5 см³, скальпели, пинцеты, ножницы, пакеты из плотной бумаги, полиэтилена или мешочки из плотной ткани, ручные лупы, про­бирки, простой графитный карандаш и бумага для этикеток.

Работа проводится в период летней учебной прак­тики. Выбор обследуемой культуры определяется место­нахождением вуза и сроками практики.

Выявление картофельной цистообразующей нематоды. Отбор почвенных проб. Обследование почвы Можно про­водить в любое время года. На участках площадью до

0,5 га почвенным буром или ложкой отбирают 50 проб объемом по 5 см³ с глубины 5... 10 см, соединяют в один образец (250 см³), помещают в пакет или мешочек и вкладывают туда этикетку. На этикетке должно быть обозначено точное местоположение участка, площадь, дата отбора и фамилия обследователя. Большие участки разбивают на более мелкие, Ш * превышающие 0,5 га, и с каждого отбирают средний образец объемом 250 см³. В семеноводческих хозяйствах с каждого гектара отби­рают 8 средних почвенных образцов объемом по 250 см³.

Обследование путем осмотра корней. Лучшие сроки — с начала июля до сентября. Обследование нужно прово­дить в сухую погоду, когда почва с корней легко осы­пается. Выкапывают низкорослые кусты с поникшими или засохшими нижними листьями, землю осторожно стряхивают, корни осматривают с помощью лупы. С за­селенных кустов отрезают часть корня с цистами и кла­дут его в пробирку с 5%-ным раствором формалина или 70°-ным спиртом для лабораторного анализа. В про­бирку вкладывают этикетку, написанную простым ка­рандашом. Отобранные образцы пересылают в каран­тинную инспекцию.

* Выявление овсяной нематоды. Отбор почвенных проб. Лучшие сроки для обследования почвы — после уборки урожая (до поднятия зяби), а на чистых и занятых па­рах— перед посевом озимых культур. Участок проходят по двум диагоналям, отбирая пробы с глубины пахот­ного слоя через равные интервалы, объем каждой пер­вичной почвенной пробы около 500 см³. С поля пло­щадью до 5 га берут 24 первичные пробы (по <12 проб с диагонали). Поле площадью от 5 до ,100 га делят на 2 равные части и проходят каждую по двум диагоналям, отбирая по 12 проб с каждой. Участки от 100 до 200 га и выше делят на 3 части и обследуют каждую отдельно.

Все 12 проб с каждой диагонали ссыпают в одно ведро, переносят на специально расчищенную и утрам­бованную площадку площадью 1 м² или высыпают на полиэтиленовую пленку или клеенку, перемешивают, от­бирают одну среднюю пробу объемом около 500 см³ и упаковывают ее в снабженный этикеткой пакет или ме­шочек.

Обследование путем осмотра корней. Его целесооб­разно проводить в период начала колошения — в это время белые самки величиной с маковое зерно хорошо заметны на корнях, а на надземных частях растения четко выражены симптомы гетеродероза. При выбороч­ном обследовании отбирают угнетенные растения, а при маршрутном по 5 проб (1 проба содержит 5 растений) с каждой из двух диагоналей, если участок не превы­шает 5 га, и по 20-г-с двух диагоналей на участке от 5 до 100 га, С увеличением участка на каждые 50 га число отбираемых проб увеличивают на 5. Каждые 5 растений осторожно выкапывают в одном месте, корни с налип­шей почвой отрезают и помещают, в пакет или мешочек. Все пробы с одного участка помещают в один мешок и вкладывают в него этикетку.

Выявление галловых нематод. Проводится путем осмотра корней. Мелкие галлы на корнях становятся заметными через 15...20 дней после посадки растений. Со временем число галлрв и размеры их увеличиваются. В теплицах корни нужно просматривать при удалении огурцов и томатов после окончания вегетации. Место, где обнаружено больное растение, отмечается или на­носится на план теплицы, подсчитывается число и про­цент пораженных растений. Корни подвергаются лабо­раторному анализу.

При необходимости проверить почву теплицы на на­личие в ней галловых нематод в почву высевают семена огурцов или салата. Семена сеют либо в грунт, либо в вегетационные сосуды или цветочные горшки (10... 15 се­мян в горшок). Корни растений просматривают через 50...30 дней.

Выявление нематод на землянике. Отбор почвенных проб. При обследовании отмечают участки с однород­ными посадками, на них выделяют 10 мелких участков, суммарная площадь которых составляет около 10% обследуемой посадки. С каждого из 10 участков почвен­ным буром отбирают около 20 проб почвы с корнями, ко­торые сразу перемешивают и из них отбирают одну среднюю пробу массой 1...2 кг, снабжая ее этикеткой. На плантациях земляники пробу берут с глубины не ме­нее 25 см, на плантациях ягодных кустарников — не ме­нее 40...60 см.

Обследование путем осмотра растений. Это обследо­вание проводят одновременно с отбором почвенных проб на плантациях. Наиболее отчетливо симптомы повреж­дения растений проявляются весной до начала плодоно­шения и в конце лета. На выделенных участках осматри­шют растения и подсчитывают процент заселенных. .Для анализа отбирают части растения с признаками по­вреждения, а если таковых нет, то пазушные и верхушеч­ные почки, основания розеток листьев, бутоны. Подсу­шенные, без примеси сухих и гнилых частей образцы , помещают в пакеты или мешочки, снабжают этикеткой и отправляют для лабораторного анализа.

Выявление рисового афеленхоида. Обследование про­водится путем осмотра растений. Лучшее время обсле­дования—период, когда растения риса находятся в. фазе трубкования — начала цветения. Если в первую половину вегетации погода была сухой и жаркой, обсле­дование лучше провести в начале фазы восковой — пол­ной спелости. При наличии на участках очагов угнетен­ных растений с побелевшими верхушками листьев и деформированными метелками можно провести выбороч­ное обследование. Если поврежденные растения рассре­доточены по полю, а признаки повреждения выражены нечетко, проводят маршрутное обследование. Для этого отбирают растения с одного обследуемого чека в 15.... 20 местах по диагоналям и в 10... 15 местах по краю поля. Одна проба составляет 5 растений, взятых с пло~ щади 0,25 м² или на 1 пог. м. С площади чека до 1 га берут 5 проб; от 1 до б га — 10 проб; от 5 до 30 га — 20 проб; от 30 га и выше —20 проб и по 1 пробе на каж­дые 5 га свыше 30 га. Растения просушивают, все пробью с одного чека складывают в один сноп и снабжают его этикеткой. Анализ образцов проводят в лаборатории..

Работа 5. ВЫДЕЛЕНИЕ НЕМАТОД ИЗ РАСТЕНИИ, СЕМЯН И ПОЧВЫ

Оборудование и материалы. Микроскопы МБР-1 и МБС-1, руч­ные лупы, штативы или подставки для воронок, скальпели, пинцеты,." ножницы, препаровальные иглы, металлические сетки с ячейками? 2...6 мм, сита диаметром 10...16 см с ячейками 2...3 мм и 0Д..Д2 мм*„ кюветы эмалированные белые, зажимы Мора, воронки диаметром 10... 15 см и 20...25 см, чашки Петри, часовые, предметные и покров­ные стекла, пипетки, стеклянные палочки, пробирки, литровые хими­ческие стаканы или цилиндры, фильтровальная бумага, шпатель, ап­течные весы с разновесами, фарфоровые ступки с пестиками.

Выделение червеобразных нематод из растений. Со­бранные при обследовании надземные части растений? разрезают на кусочки длиной 1...2 см. Если растение имеет явные признаки повреждения, можно сразу про­смотреть кусочки под бинокуляром в чашках Петри или в часовых стеклах в воде. Препаровальными иглами расщепляют ткань вдоль волокна, через 20...30 мин части растения удаляют пинцетом и осадок рассматривают. Взрослые нематоды и личинки выходят в воду. Если растение на вид здорово или нужно выделить по воз­можности всех нематод, нарезанные кусочки в начале занятия ставят на выделение в воронки Бермана. На конец обычной воронки диаметром 10... 15 см надевают кусок резиновой трубки с зажимом Мора или встав­ляют в нее маленькую пробирку. В воронку помещают сетку из латунной проволоки или мельничного газа с от­верстиями 1...3 мм, на сетку кладут расщепленные ку­сочки растения, заливают их водой или 0,15—0,3%-ным раствором перекиси водорода. Слив воды из воронки можно просмотреть под бинокуляром в конце занятия или на следующий день. Таким же способом можно вы­делить стеблевую нематоду картофеля из разрезанного клубня, взяв кусочки на границе здоровой и поврежден­ной части.

В случае необходимости определить вид нематод их отлавливают в каплю воды на предметное стекло. Для этого тонкую препаровальную иглу, сделанную из энто­мологической булавки со слегка изогнутым кончиком, подводят под тело нематоды и легкими толчками подни­мают ее к пленке поверхностного натяжения, затем под­водят иглу под середину тела, быстрым движением вынимают нематоду и переносят ее в каплю воды. Левой рукой постепенно поворачивают винт наводки на резкость, чтобы не выпускать нематоду из поля зрения.

Выделение нематод из семян риса. Образец семян (1 кг) высыпают на гладкую поверхность, разравнивают в виде квадрата толщиной не более 1 см и в шахматном порядке заранее измеренной емкостью отбирают 5 на­весок по 20 г. К навеске добавляют щуплые и деформи­рованные семена из оставшейся части, помещают ее в фарфоровую ступку и осторожно обрушивают до отде­ления чешуек. Далее ставят на выделение в воронки Бермана на 12...24 ч. От небольшого образца отбирают несколько семян, заливают их теплой водой в часовом стекле, препаровальными иглами отделяют и расщеп­ляют покрывающие их чешуйки и через 30 мин просмат­ривают под бинокуляром.

Выделение нематод из корней. На корнях с галлами заметны светло- и темно-коричневые яйцевые мешки са­мок. Один-два небольших галла отрезают и помещают в воду на предметное стекло. Препаровальными иглами под бинокуляром (на темном фоне) разрывают галл со стороны, противоположной яйцевому мешку, и извле­кают из него белых грушевидных самок. Здесь же могут быть и бутылковидные личинки III...IV возрастов и яйца.

Чтобы выделить из корней червеобразных нематод^ корни отмывают от почвы, разрезают на кусочки дли­ной 1... 1,5 см, отбирают навески по 3...5 г, заливают их водой в чашках Петри (не накрывая), а через 48 ч, уда­лив корни и излишнюю воду, осадок просматривают под. бинокуляром или фиксируют.

Выделение цист из почвы. 1). Анализ почвы, просу­шенной до воздушно-сухого состояния. Этот способ осно­ван на способности сухих цист всплывать на поверх­ность воды. Почву просушивают до воздушно-сухого со­стояния на воздухе или в термостате при температуре-не выше 40°С. Комки почвы осторожно измельчают, и почву просеивают через сито с ячеями 2...4 мм для уда­ления крупных частиц. Отбирают навеску в 100 см³,, высыпают в литровый химический стакан или банку, за­ливают водой до ^ZU объема сосуда и тщательно разме­шивают стеклянной палочкой с резиновым наконечни­ком. Взвесь отстаивают 5...10 мин. Цисты и легкие ча­стицы почвы всплывают на поверхность воды. Нельзя оставлять залитую водой почву дольше, так как цисты,, пропитавшись водой, могут опуститься,на дно. Верхний; слой воды сливают, медленно вращая стакан, на филь­тровальную бумагу, предварительно смоченную водой и вложенную в воронку, которая поставлена в штатив, цилиндр или банку. В качестве фильтра можно исполь­зовать капроновую или нейлоновую ткань. Фильтр раз­вертывают на деревянной, пластиковой или стеклянное пластинке и просматривают под бинокуляром. Цисты обычно располагаются в узкой полоске по окружности фильтра.

Для получения более чистого смыва, где цисты за­метны лучше, можно слить воду после отстаивания сна­чала на сито с отверстиями 0,1...0,2 мм, промыть осадок струей из резиновой груши, а затем смыть его на фильтр. Чтобы избежать потери цист, в стакан снова

налить воды, дать ей отстояться 3 мин и еще раз слить на сито.

2), Анализ влажной почвы. Навеску почвы, выде­ленную для анализа, помещают, не просушивая, на ме­таллическое сито с ячейками 2...3 мм, вставленное в сито с ячейками 0,1...0,2 мм, и промывают под сильной струей воды при непрерывном помешивании шпателем до тех пор, пока вода, вытекающая из-под сита, не станет про­зрачной. Мелкие частицы почвы и цисты оседают щ нижнем сите. Осадок с него смывают в химический ста­кан, из которого затем небольшими порциями, помеши­вая, переливают в чашку Петри и просматривают.

Для ускорения анализа почвы применяют несколько приборов: прибор Фенуика, сосуд Шютца, приборы цен­тральной карантинной лаборатории ВЦЛ-1 и ВЦЛ-2 и др.

Выделение подвижных нематод из почвы. Навеску свежей почвы массой 10...50 г, не содержащую корней, рассыпают тонким слоем на ватном фильтре, помещен­ном в плоское сито с отверстиями 2...3 мм диаметром 10...16 см, которое ставят в воронку Бермана, Воду за­ливают сбоку от сита, чтобы она постепенно покрывала почву. Ежедневно в течение 3 сут сливают для анализа по 20 мл жидкости.

Наглядным для студентов и удобным для работы является просмотр под бинокуляром навесок почвы в 1 г, разбавленных в чашках Петри небольшим коли­чеством воды, откуда обнаруженных нематод отлавли­вают.

Работа 6. ИЗГОТОВЛЕНИЕ ПРЕПАРАТОВ

Оборудование и материалы. Микроскопы МБР-1 и МБС-1, пробирки и пенициллиновые флаконы, 40%-ный формалин, глицерин, глицерин-желатина, препаровальные иглы, предметные, покровные «текла, клей БФ-2, тушь, ручки с чертежными перьями, волокна «стеклянной ваты, электрическая плитка и сосуд с горячей водой, спиртовки.

Фиксация. В пробирки или маленькие пенициллино­вые флаконы сливают из воронки Бермана, в которую накануне поместили части растения для выделения нематод, небольшое количество воды с живыми нематодами. Затем пробирки помещают в сосуд с горячей |60...65°С) водой на 5 мин и добавляют в нее 40%-ного турмалина из расчета 1 часть формалина на 9 частей !%оды, чтобы получить 4%-ный фиксирующий раствор.

Временные препараты. Каждому студенту в часовое стекло наливают небольшое количество жидкости с за­фиксированными нематодами, откуда они вылавливают 1 нематод препаровальной иглой и переносят на предмет-Кчиое стекло в.каплю смеси, состоящей из 1 части глице-I рина и 9 частей дистиллированной воды. Туда под бино-k куляром вносят несколько волокон стеклянной ваты, ^А которые размещают по краям капли, и накрывают каплю покровным стеклом.

Постоянные препараты. При изготовлении постоян­ных препаратов можно использовать предварительно |, просветленных, пропитанных глицерином нематод. Для " зтого нематод отмывают от фиксатора, помещая их на 10 мин в чистую воду, а затем переносят в смесь из 74 глицерина и Д дистиллированной воды или из 1 части глицерина и 3 частей 96%-ного спирта, где оставляют на несколько дней до полного испарения воды или спирта.

Пробирку с глицерин-желатином разогревают на ки­пящей водяной бане. Стеклянной палочкой, находя­щейся в пробирке, наносят на предметное стекло каплю расплавленного глицерин-желатина, переносят в нее просветленных нематод, цисты или анально-вульварные пластинки, окружают каплю волокнами стеклянной ваты, быстро накрывают покровным стеклом и слегка подогревают над пламенем спиртовки для равномер­ного распределения состава.

Для предотвращения высыхания покровные стекла окантовывают клеем БФ-2, канадским или пихтовым бальзамом, асфальтовым лаком или лаком для ногтей.

Как на постоянных, так и на временных препаратах на предметном стекле обязательно пишут тушью эти-' кетку, в которой указывают место и время сбора мате--риала, число нематод в препарате и фамилию изготови-У/теля. Чтобы надпись со временем не стерлась, на нее наносят слой клея или лака.