Приготовление препаратов для микроскопии мокроты.

Микроскопическое исследование состоит из изучения нативных и окрашенных препаратов. Полноценность исследования мокроты целиком зависит от правильного приготовления и количества про­смотренных препаратов.

Чтобы добиться более равномерного распределения в материале клеточных структур, перед исследованием целесообразно гомогенизировать мокроту. С этой целью в мокроту добавляют 1–2,5% водный раствор димексида в соотношении 1:1 и перемешивают смесь в течение 10–15 минут.

Техника приготовления нативных препаратов.

Мокроту, помещенную в чашку Петри, рассматривают на черном и белом фоне. Узким шпателем и иглой (можно пользоваться деревян­ными лучинами) выбирают различные составные части мокроты (комочки гноя, слизи, крови, тканевые клочки). Необходимо также брать для исследования все частицы, отличающиеся формой, окрас­кой, плотностью от фона мокроты. Отоб­ранный материал помещают на предметное стекло. При этом более плотные по консистенции частицы помещают ближе к центру намечаемого препарата, а менее плотные, так же как и слизисто-гнойные, гнойно-слизистые, кровя­нисто окрашенные образования, — по периферии. Мате­риал накрывают покровным стеклом. Обычно на одном предметном стекле готовят два препарата, что обеспе­чивает максимальный просмотр отобранного материала. Отобранный материал помещают на предметное стекло и накрывают покровным. Количество материа­ла, взятого для одного препарата, должно быть таково, чтобы мокрота не выходила за пределы покровного стекла. Если мокрота имеет вяз­кую или тягучую консистенцию, то на покровное стекло слегка надав­ливают, чтобы материал распределился равномерно тонким слоем.

Препараты сначала просматривают под малым увеличением (объ­ектив 8, окуляр 7), затем под большим (объектив 40, окуляр 7) увели­чением микроскопа. Просмотр под малым увеличением дает ориен­тировочное представление о качестве выбранного материала. Просмотр с большим увеличением необходим для детального исследования материала.

Техника приготовления окрашенных препаратов.

Если при исследо­вании нативного препарата возникает необходимость в его окраске, то под контролем микроскопа покровное стекло снимают, перемещая в одну сторону, а предметное стекло — в другую, и отмечают стеклог­рафом на обратной стороне препарата интересующий участок. Затем препарат высушивают и окрашивают. Для исследования морфологии клеточных элементов мокроты исполь­зуют окраску по Романовскому и Папенгейму. При окраске мокроты этими методами необходимо учитывать ее характер (если много слизи, толстый препарат — окраска более про­должительная). При подозрении на наличие злокачественного новообразования экспозиция окраски сокращается.

Для выявления и подсчета количества эозинофилов в мокроте применяют окраску азур-эозином или эозин-метиленовым синим, при которой зерна (гранулы) эозинофилов окрашиваются в красный цвет. Для обнаружения так называемых сидерофагов используют обработку мокроты смесью растворов соляной кислоты и железисто-синеродистого калия (реакция образования берлинской лазури). Для выявления эластических волокон к мокроте добавляют равный объем едкой щелочи (КОН) и нагревают до гомогенного состояния, что ведет к разрушению слизи и клеточных элементов мокроты (эластические волокна при этом не разрушаются). После охлаждения и добавления 2–3 капель 2% раствора эозина, окрашивающего эластические волокна, гомогенат центрифугируют и из осадка приготавливают мазок.

Техника приготовления препаратов для бактериоскопического исследование.

Техника приготовления препаратов. Для бактериоскопического исследования готовят обычно два препарата: один для обнаружения микобактерий туберкулеза, другой — для обнаружения прочих микро­организмов. Для первого препарата отбирают те же частицы, которые были предназначены для микроскопии, для второго — гнойные частицы. Взятый материал рас­пределяют по предметному стеклу до получения достаточ­но тонкой ажурной сеточки (материал на первом стек­ле распределяют на 2/3 его поверхности, на втором — в центре). Затем оба эти препарата фиксируют путем троекратного проведения над пламенем горелки. Первый препарат окрашивают по методу Циля — Нильсена, окрас­ку второго препарата производят по методу Грама.

Окраска по Цилю — Нильсену.

Техника окраски. Предметные стекла помещают на мостик с промежутками между кра­ями. Мазки накрывают фильтровальной бумагой. На всю поверхность фильтровальной бумаги, покрывающей стекло, наносят карболовый фуксин Циля (1 г основного фуксина растворяют в 10 мл этилового спирта, раствор выливают в 100 мл 50 г/л раствора карболовой кисло­ты). Стекло с мазком медленно нагревают над пламенем спиртовки до появления пара. Не допускается кипение или высушивание окраши­вающего раствора на предметном стекле. Если раствора недостаточ­но, его можно добавить еще и нагреть второй раз. Мазок с прогретым раствором оставляют на 5 мин, после чего фильтровальную бумагу удаляют пинцетом и помещают в бачок для сбора отходов. Каждое предметное стекло аккуратно ополаскивают отдельно под слабой струей воды из водопроводного крана до полного удаления окрашива­ющего раствора. Мазок держат ребром к струе воды. Не разрешается смывать и обесцвечивать одновременно несколько мазков во избежа­ние перекрестного заражения. Все стекла помещают на мостик и обрабатывают, каждый из них индивидуально, 250 г/л раствором серной кислоты до полного отхождения краски. Смывают каждое предметное стекло, как описано выше. Затем каждый мазок обраба­тывают 96% этиловым спиртом в течение 5 мин и промывают водой. Обесцвеченные, промытые стекла с мазками докрашивают (3 г/л вод­ным раствором метиленового синего в течение 60 с), промывают, как описано выше, оставляют сушить на воздухе.

Окраска по Граму.

Краски и реактивы:

разведенный фуксин Циля;

реактив Люголя.

Техника окраски. На фиксированный препа­рат накладывают белую фильтровальную бумажку, на которую наносят несколько капель 1 % карболового рас­твора кристаллического фиолетового. Через 1—2 мин бумажку сбрасывают и на препарат наливают 1—2 кап­ли реактива Люголя. Через 1—2 мин препарат обесцве­чивают 1—2 каплями 96 % этанола до появления бледно - серой окраски материала, смывают водой, на 10—15с на­носят разведенный фуксин Циля, после чего вновь смывают водой и высушивают. В препаратах могут быть обна­ружены стафилококки, стрептококки, диплококки, спирохеты Венсана и другие микроорга­низмы.

ВОПРОСЫ ДЛЯ ПРОВЕРКИ ЗНАНИЙ ПО ТЕМЕ «ОБЩИЕ СВОЙСТВА МОКРОТЫ»

1. Каковы правила сбора мокроты?

2. Какая посуда используется для сбора мокроты?

3. Каковы правила санэпидрежима при исследовании мокроты?

4. Каковы правила доставки и хранения мокроты?

5. Какие определения входят в клинический анализ мокроты?

6. Как проводят определение физических свойств мокроты?

7. Что входит в определение физических свойств мокроты?

8. Какое диагностическое значение имеет деление мокроты на слои при стоянии?

9. Какое диагностическое значение имеет цвет мокроты?

10. Какой субстрат преобладает в слизисто–гнойной мокроте? В гнойно–слизистой мокроте? В кровянисто-слизистой мокроте?

11. Какова техника приготовления препаратов для микроскопирования мокроты?

12. Как выявляют эластичные волокна в мокроте?

13. Какие методы окраски используют для исследования морфологии клеток в мокроте?

14. Каким способом фиксируют препарат для проведения бактериоскопического исследования?

15. Каким методом окрашивают препараты мокроты для обнаружения микобактерий туберкулеза?