3. Описать принципы микроскопии с использованием фазово-контрастного микроскопа

Метод фазового контраста предназначен для получения изображений прозрачных и бесцветных объектов.

Суть метода в том, что даже при очень малых различиях в показателях преломления разных элементов препарата световая волна, проходящая через них, претерпевает разные изменения по фазе (приобретает т.н. фазовый рельеф). Иными словами, в получаемом видимом изображении распределение яркостей (амплитуд) воспроизводит фазовый рельеф. Получаемое таким образом изображение называется фазово-контрастным.

Фазово-контрастное устройство может быть установлено на любом световом микроскопе и состоит из:

• набора объективов со специальными фазовым пластинками;

• конденсора с поворачивающимся диском. В нем установлены кольцевые диафрагмы, соответствующие фазовым пластинкам в каждом из объективов;

• вспомогательного телескопа для настройки фазового контраста.

Благодаря применению этого способа микроскопии контраст живых неокрашенных микроорганизмов резко увеличивается, и они выглядят темными на светлом фоне (позитивный фазовый контраст) или светлыми на темном фоне (негативный фазовый контраст).

4. Описать принципы микроскопии с использованием темнопольного микроскопа

Для микроскопии в темном поле применяются особые конденсоры, у которых центральная часть линзы затемнена, за исключением узкой полоски по периферии. Внутренняя поверхность такого темнопольного параболоид-конденсора зеркальная.

Лучи света попадают в темнопольный конденсор только через узкую полоску по периферии линзы. Затем они отражаются от его зеркальной поверхности и, если в поле зрения нет никакого объекта, то ни один луч не попадает в объектив. Поле зрения кажется совершенно черным. Если же в поле зрения есть какие-то объекты, например, микробы, то лучи, отраженные от них, попадают в объектив, и их можно видеть светящимися на темном фоне.

Преимущество микроскопии в темном поле зрения состоит в том, что при этом можно видеть объекты более мелкие. Кроме того, в темном поле зрения лучше наблюдать в живом состоянии такие микробы, как лептоспиры, которые в водной среде не преломляют света и поэтому в проходящем свете совершенно прозрачны.

5. Методика определения чувствительности бактерий к антимикробным препаратам с использованием серийных разведений

Данным методом определяют минимальную концентрацию антибиотика, ингибирующую (МИК) рост исследуемой культуры бактерий. Вначале готовят основной раствор, содержащий определенную концентрацию антибиотика (мкг/мл или ЕД/мл).

Из него готовят все последующие разведения антибиотика в бульоне (в объеме 1 мл), после чего к каждому разведению добавляют 0,1 мл исследуемой бактериальной суспензии.

В последнюю пробирку вносят 1 мл бульона без антибиотика и 0,1 мл суспензии бактерий (контроль культуры).

Посевы инкубируют при 37°С до следующего дня, после чего отмечают результаты опыта по помутнению питательной среды, сравнивая с контролем культуры. Последняя пробирка с прозрачной питательной средой указывает на задержку роста исследуемой культуры бактерий, под влиянием содержащейся в ней минимальной ингибирующей концентрации (МИК) антибиотика.

6. Фаготипирование микроорганизмов и принципы оценки результатов

Испытуемую суточную бульон­ную культуру бактерий засевают на поверхность питательного агара в чашке Петри, слегка подсушивают в термостате, затем делят на квадраты, на которые пастеровской пипеткой наносят по одной капле различных типоспецифических фагов. После суточной инкубации отмечают на чашке те квадраты, в кото­рых имеется сплошной лизис бактерий. Фаготип бактериаль­ной культуры определяется теми типами фага, который вызывает ее лизис.

Фаготип – самый тонкий из маркеров, и определение фаготипа маркирует штамм сразу по нескольким меткам в строго определённом сочетании.