2.2. Количественное определение Дибазола

Для количественного анализа дибазола существует несколько методов.

1. Неводное титрование Дибазола

Около 1 г (точная навеска) порошка растертых таблеток обрабатывают хлороформом 1 раз 15 мл и 3 раза по 5 мл. Хлороформные извлечения фильтруют в сухую колбу через фильтр, смоченный хлороформом. Хлороформ отгоняют до объема 1 мл, прибавляют 10 мл безводной уксусной кислоты и далее проводят определение прибавляют 5 мл раствора ацетата окисной ртути и титруют 0,1 н. раствором хлорной кислоты до голубовато-зеленого окрашивания (индикатор-кристаллический фиолетовый).

Параллельно проводят контрольный опыт.

1 мл 0,1 н. раствора хлорной кислоты соответствует 0,02447 г, которого в высушенном препарате должно быть не менее 99,0%. и которого должно быть 0,018-0,022 г, считая на средний вес одной таблетки (например 20мг)

.

2. Реакция образования серебряной соли

Около 0,015-0,03 г препарата растворяют в 1 мл воды (при анализе дибазола в жидких лекарственных формах объём раствора, содержащий 0,015-0,03 г препарата, упаривают на водяной бане до 1-1,5 мл), добавляют 5 мл 95% спирта, 1 мл 25% раствора аммиака, и 2-3 капли раствора нитрата серебра, взбалтывают и оставляют стоять в течении 10-15 минут. Фильтруют через небольшой фильтр, колбу и осадок промывают водой (по 1-2 мл на каждое промывание) до отрицательной реакции фильтрата на ион серебра (обычно на промывание расходуется 15 20 мл воды, большое количество воды может привести к частичному растворению осадка). Затем осадок с фильтром переносят в ту же колбу, прибавляют 1-2 мл азотной кислоты (плотность 1,2), слегка подогревают до растворения осадка, охлаждают, прибавляют 30 мл воды и титруют из полу-микропипетки 0,1 н. раствором роданида аммония (индикатор – железоаммониевые квасцы):

1 мл 0,1 н. раствора роданида аммония соответствует 0,02445 г дибазола.

3. Ацидиметрическое определение дибазола после выделения основания

К точной навеске одного порошка прибавляют 2 мл 0,1 н. раствора серной кислоты и по каплям 3% раствор перманганата калия в 0,5 н. растворе серной кислоты до стойкого розового окрашивания (на водяной бане при температуре 60 °C). Избыток перманганата калия разлагают путём прибавления 1-2 капель 5% раствора щавелевой кислоты. Раствор количественно переносят в делительную воронку, добавляют небольшими порциями гидрокарбонат натрия до щелочной реакции на лакмус и основание дибазола извлекают хлороформом (3 раза по 15 мл) хлороформные извлечения фильтруют через безводный сульфат натрия, хлороформ удаляют, остаток растворяют в 2-3 мл спирта, добавляют 20 мл воды и титруют из полу-микропипетки 0,1 н. раствором соляной кислоты до розового окрашивания, индикатор – метиловый оранжевый (V₁ мл); 1 мл 0,1 н. раствора соляной кислоты соответствует 0,02447 г дибазола.

4. Прямая аргентометрия

К массе лекарственной формы, содержащей 0,001 г дибазола, прибавляют 0,5 мл ацетона и 1% раствора ацетата натрия, приготовленного на 1% растворе крахмала, 2 капли 5% раствора хромата калия и титруют 0,01 н. раствором нитрата серебра (в конце медленно, взбалтывая после прибавления каждой капли титранта) до устойчивого буроватого окрашивания.

1 мл 0,01 н. раствора нитрата серебра соответствует 0,001223 г дибазола.

5. Прямое алкалиметрическое определение дибазола.

0,15 г препарата (точная навеска) растворяют в 10 мл. К 5 мл раствора прибавляют 2 капли раствора фенолфталеина, 5 мл спирто-хлороформной смеси (1:1), нейтрализованной по фенолфталеину, и титруют 0,1 н. раствором едкого натра при взбалтывании до слабо- розового окрашивания водного слоя.

1 мл 0,1 н. раствора едкого натра соответствует 0,02447 г дибазола.

6. Фотометрические методы

Разработаны методики количественного определения дибазола и его лекарственных форм спектрофотометрическим методом по внешним образцам сравнения кислоте бензойной и фенолфталеину. Методика характеризуется, хорошей воспроизводимостью. Обоснованы оптимальные условия определения: растворитель – 0,1 М раствор кислоты хлористоводородной, аналитическая длина волны – 270 нм. Определены коэффициенты пересчета. Относительное стандартное отклонение разработанной методики для субстанции составило 0,004 [6, 8].

7. Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ)

Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) – это метод колоночной хроматографии, в котором подвижной фазой (ПФ) служит жидкость, движущаяся через хроматографическую колонку, заполненную неподвижной фазой (сорбентом). Колонки для ВЭЖХ характеризуются высоким гидравлическим давлением на входе в колонку, поэтому ВЭЖХ иногда называют «жидкостной хроматографией высокого давления».

Приведем пример ВЭЖХ разработанной на кафедре фармацевтической и токсикологической химии, Иркутского государственного медицинского университета, под руководством профессора Е. А. Илларионова.

Для ВЭЖХ-анализа таблеток дибазола был выбран обращено-фазный вариант хроматографии. Использованный в работе полимерный сорбент ProntoSIL-120-5-C18 AQ не проявляет ионообменных свойств по отношению к дибазолу, что позволило получить симметричные хроматографические пики определяемого соединения [5, 6, 8].

Подвижная фаза состояла из двух элюентов. Элюент A: 0,2 M лития перхлорат – хлорная кислота (рН 2,8); элюент Б – ацетонитрил с линейным увеличением доли органического компонента 1000 мкл 5–100 % (0–5 мин). Эти элюенты обладают высокой прозрачностью в коротковолновой области ультрафиолетового (УФ) спектра и не содержат УФ-поглощающих примесей, проявляющихся в виде «лишних» пиков на хроматограмме. Известно, что присутствие в подвижной фазе кислоты (рН 2,8) и высокое содержание ионов лития улучшает хроматографирование азотсодержащих лекарственных веществ. Таким образом, предложенная хроматографическая система является оптимальной для определения дибазола.

Методом остановки потока был записан УФ-спектр дибазола и определен его максимум поглощения. Спектр регистрировали во время хроматографического анализа после остановки потока вблизи максимума пика (интервал длин волн 190–360 нм, шаг 2 нм). В качестве базовой для дибазола выбрана длина волны 210 нм, близкая к длине волны максимального поглощения. Нормированный УФ-спектр дибазола приведен на рис. 1.

Рисунок 1. Нормированный УФ-спектр дибазола

Длины волн максимального поглощения и детектирования дибазола приведены в табл. 1.

Таблица 1. Длины воли максимального поглощения и детектирования дибазола.

Определяемое соединение	λmax НМ	λmin НМ	λдет НМ
Дибазол	270,276	248,274	230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300

Спектральные отношения, рассчитанные как отношение площадей пиков, зарегистрированных при длинах волн λх и λбаз, приведены в табл. 2.

Таблица 2. Спектральные отношения для дибазола.

Определяемое соединение	Спектральное отношение, R = Sx/S270
	230	240	250	260	280	290	300
Дибазол	0,750	0,478	0,421	0,619	0,524	0,005	0,000

Дополнительные длины волн используются для расчета спектральных отношений, применение которых существенно повышает надежность идентификации пиков на хроматограмме (рис. 2).

Рисунок 2. Хроматограмма (высокоэффективная жидкостная хроматография) стандартного раствора дибазола в метаноле 0,2 мг/мл

Время удерживания дибазола составляет 3,6 минут.

Количественное определение таблеток дибазола проводили методом внешнего стандарта. В качестве образца сравнения использовали фармацевтическую субстанцию дибазола, перекристаллизованную из спирта метилового, содержание основного вещества в которой не ниже 99,9 %.

Линейность метода оценивали, анализируя раствор модельной смеси с различными концентрациями дибазола (рис.3). Метод характеризуется хорошей линейностью с коэффициентом корреляции 0,9971 для дибазола в диапазоне концентраций 0,15–0,5 мг/мл.

Рисунок 3. Калибровочный график зависимости площади пика дибазола от концентрации

Найденные условия использованы для разработки методики анализа дибазола в таблетках.

На примере модельных смесей таблеток дибазола с тремя уровнями концентраций (от 80 до 120 %) от заявленного количества в лекарственной форме проведена валидационная оценка разработанной методики (табл. 3). Данные табл. 3 свидетельствуют о пригодности предложенной методики.

Таблица 3. Результаты валидационной оценки методики идентификации и количественного определения дибазола в таблетках

Параметры	Критерии валидности	Результаты испытаний
Специфичность		Методика специфична
Пригодность хроматографической системы: Эффективность колонки Коэффициент ассиметрии пика	Не менее 2000 т.т. не более 2	3500 т.т. 1,12
Прецизионность: Сходимость Таблетки 0,02 г Воспроизводимость Таблетки 0,02 г	RSD ≤ 2,0% RSD ≤ 2,0%	RSD = 0,93% RSD = 1,62%
Правильность Таблетки 0,025 г	tвыч < tтабл (tтабл = 2,45), n = 7	tвыч = 1,9
Линейность результатов	r≥0,990	r = 0,9988 y = 77,93x – 1,5143
Стабильность раствора	индивидуально	одни сутки