Контрольні питання:

1. Яку сперму вважають густою, рідкою і середньою ? Як вона позначається.

2. Що таке аспермія і олігоспермія?

3. Як визначають % живих і мертвих сперміїв способом зажиттєвого фарбування?

4. Як підраховують патологічні форми сперміїв? Як називають таке явище?

5. Як визначають концентрацію сперміїв за допомогою лічільної камери Горяева?

6. Як визначають концентрацію сперми бугая за допомогою фотоелекрокалориметра.

7. Як визначають концентрацію сперміїв за допомогою стандартів каламутності?

Тема 9 Санітарна оцінка технологічних процесів у роботі зі спермою плідників

Місце проведення заняття: лабораторія технології відтворення сільськогосподарських тварин.

Оснащення робочого місця: сперма, змиви з препуція та інстру­ментів, середовища для розрідження сперми, живильні середовища МПА, МПБ, Кітта-Тароцці, Буліржа, Літмана, Лен НДВІ, Сабура, Чапека, МПА у бактеріологічних чаш­ках, термостат, предметні та покривні стекла, бактеріоло­гічні фарби, мікроскопи.

Візьміть змив із препуція. Зафіксуйте плідника в спеціальному станку, зробіть туалет препуція, вставте в його канал стерильну гумову трубку чи катетер і, з’єднавши її з шприцем, введіть у по­рожнину препуція 5-10 мл стерильного фізрозчину, за­тиснувши край препуція рукою, енергійно помасажуйте його. Наберіть розчин у шприц і вилийте в стерильну про­бірку.

Визначте колі-титр сперми та змиву з пре­пуція. Поставте у штатив сім стерильних пробірок, внісши у першу і мл змиву чи сперми і, додавши 1 мл стерильного фізрозчину, одержите розбавлення 1:1. Наберіть і перене­сіть з неї і мл суміші в наступну пробірку і додайте 10 мл стерильного фізрозчину. Так само перенесіть з другої про­бірки 1 мл суміші в третю й додайте 10 мл фізрозчину, з третьої у четверту і т. д. Таким чином одержите серію роз­ріджень 1:1; 1:10; 1:100; 1:1000; 1:10000; 1:100000; 1:1000000.

З кожного розрідження зробіть висів на середовище Бу­ліржа. Витримавши посіви 24 год у термостаті при температурі 37-37,6 °С, перевірте, чи не змінився колір середовища і чи не з’явився у газових трубочках газ.

Колі-титр сперми не повинен перевищувати 1:1—1:10, змиву з препуція 1:100.

Визначте мікробне та грибкове забрудиеиия сперми та препуція. Візьміть стерильну чашку та градуйовану піпетку. Наберіть у піпетку 0,1 мл сперми чи змиву і, привідкривши кришку чашки, внесіть сперму на поверхню агару. Роз­мажте його рівномірно стерильним шпателем. Поставте бактеріологічну чашку в термостат на 24 год. Після цього підрахуйте кількість колоній і визначте вид мікробів.

Дослідіть сперму та змив із препуція на на­явність синьогнійної палички. Візьміть заздалегідь приготовлені стерильні бактеріаль­ні чашки з МПБ з додаванням 1-2 % цукру і, зробивши посів сперми та змиву з препуція, поставте їх на 6-7 діб у термостат при температурі 37°С, перевіряючи посів кож­них 1-2 дні.

Про наявність синьогнійної палички судять по зелено-голубому забарвленню середовища під впливом виділюва­ного нею піоціаніну.

Дослідіть сперму на наявність анаеробних мікробів. Візьміть дві пробірки із середовищем Кітта-Тароцці і внесіть у них по 0,1 мл досліджуваної сперми. Прогрійте одну з пробірок на водяній бані при 80°С протягом 20 хв для знищення супутної вегетативної мікрофлори і поставте обидві пробірки в термостат на 10 діб при 37°С. Після цього через 3-4 дні необхідно оцінити інтенсивність росту мікробів, характер осаду, наявність та ступінь газоутво­рення, зробити з них мазки, зафарбувати за Грамом і про­цвести мікроскопію.

Дослідіть сперму та змив із препуція на вміст грибів. Зробіть посів сперми та змиву з препуція на одне з спе­ціальних середовищ — Літмана, Лен НДВІ, Сабура чи Ча­пека; прокультивуйте їх в термостаті 10-45 днів при тем­пературі 22-37°С. Перевірте виділені гриби на патоген­ність.

Перевірте стерильність синтетичних середо­вищ для розрідження сперми, користуючись методикою, викладеною в завданні 3.

Проведіть бактеріологічний контроль при­ладів та інструментів, які використовують для одержання та введення сперми. Взявши 5-10 мл стерильного фізрозчину, зробіть зми­ви з підготовленої штучної вапни, шприца-катетера, піхво­вого дзеркала. Внесіть по 0,1 мл змиву в МПБ та середови­ще Кітта-Тароцці.

Дальше дослідження робіть як при визначенні мікроб­ного забруднення сперми.

Визначте мікробне та грибкове забруднення повітря лабораторії, манежу та приміщення для плідників. Поставте на 5 хв у різних ділянках приміщення на відстані 1,5 м від підлоги відкриті бактеріологічні чашки з МПА. Після цього перенесіть їх у термостат і щоденно під­раховуйте кількість колоній та визначте видовий склад мікробів. При виявленні грибів зробіть з них посіви на спе­ціальні середовища для визначення їх видового складу.