3 2 Тема 1. Определение подлинности растительного сырья

Препараты кожуры плодов и семян готовят после кипячения в 5%-ном растворе калия гидроксида в течение 15—20 мин, с последующим раздавли-ванием и разделением тканей.

Размягчение в растворе хлоралгидрата. Для быстрого приготовления сре-зов коры и подземных органов их размягчают и просветляют кипячением в растворе хлоралгидрата в течение 10—20 мин.

Разрушение тканей. В некоторых случаях требуется разрушение тканей (дез-интеграция). Для изучения отдельных элементов проводящих пучков и меха-нических тканей кусочки сырья длиной 1—2 см или грубый соскоб нагрева-ют (осторожно, под тягой!) в пробирке в смеси 2 мл кислоты азотной кон-центрированной и 0,3 г калия хлората (бертолетовой соли) до образования пены и оставляют на несколько минут до побеления кусочков. Сырье промы-вают несколько раз водой, помещают на предметное стекло, разделяют пре-паровальной иглой на отдельные элементы и просматривают в глицерине.

При исследовании сырья, содержащего секреторные ходы, млечники, вместилища со смолой или эфирным маслом, для разделения тканей без разрушения тонких оболочек клеток применяют следующие способы: а) ки-пячение в 3—5 %-ном растворе щелочи в течение 30 мин; б) нагревание сырья в колбе со шлифом в 25 %-ном растворе аммиака в течение 40 мин. После кипячения частицы сырья промывают водой, помещают на предмет-ное стекло и разделяют ткани препаровальными иглами.

Приготовление временных микропрепаратов. После соответствующей подготовки сырья из него готовят микропрепараты. Техника их приготовле-ния разнообразна и зависит от состояния сырья и его принадлежности к определенной морфологической группе (лист, кора, подземные органы).

Приготовление препаратов с поверхности. Для приготовления микропре-парата листа с поверхности мелкие листья используют целиком, от крупных берут отдельные участки с учетом распределения важнейших диагностиче-ских элементов: край листа, зубчик по краю листа, участок главной жилки, верхушку листа и основание. Лист или его часть вынимают лопаточкой или препаровальной иглой и помещают на предметное стекло в раствор хлорал-гидрата или глицерина. Если объект собирается в складочки, предметное стекло

• воде подводят под кусочек сырья и вынимают его иглой на стекло. Если лист надо рассматривать с двух сторон, кусочек листовой пластинки режут на две части скальпелем на предметном стекле; одну часть осторожно пере-ворачивают и помещают обе части рядом.

Из толстых и кожистых листьев при необходимости готовят давленые препараты или поперечные срезы. При анализе резаных листьев выбирают несколько кусочков с крупной жилкой и краем листа.

Препараты цветков для микроскопического анализа готовят из отдель-ных частей соцветия (цветки, листочки обвертки) и частей цветка (лепест-ки, чашелистики), рассматривая их с поверхности. Для идентификации пло-дов и семян готовят поперечные срезы. Для микродиагностики коры и подзем-ных органов из предварительно размягченного сырья готовят поперечные, реже продольные срезы.

Приготовление срезов. Для изучения тканей и органов, обладающих твер-дой структурой, готовят срезы. Срезы, предназначенные для микроскопиче-ского исследования с учебными целями, делают преимущественно вручную, при помощи бритвы.

Для приготовления среза крупные объекты (корни, корневища, кору, плоды, семена, толстые кожистые листья) можно просто держать в руке. Мелкие объекты, которые неудобно держать пальцами, или тонкие, кото-

Микроскопический анализ ЛРС		3 3

рые гнутся при нажиме бритвы, зажимают в сердцевину бузины, корковую пробку или заливают в парафин.

Сердцевина бузины используется для нежных объектов (листья, цветки, чашелистики и др.), пробка — для более твердых объектов (тонкие корни, кора, плоды, плотные листья и др.). Пробки выбирают мягкие, их предвари-тельно вываривают в воде примерно 15 мин до размягчения. Перед изго-товлением срезов кусочки сердцевины бузины 1—1,5 см длины или размяг-ченную пробку разрезают вдоль на две части. Объект зажимают между двумя половинками и делают срезы, направляя лезвие бритвы вдоль щели. Объект срезают вместе с бузиной или пробкой, кусочки которых потом отделяют иглой от срезов и выбрасывают. Обычно готовят серию срезов от нескольких разных кусочков сырья, чтобы обеспечить наличие в препарате всех диагнос-тических признаков.

Очень мелкие плоды, семена или другие объекты при необходимости за-плавляют в парафин. Из парафина готовят кубик, удобный для удерживания пальцами, затем в одну из поверхностей кубика вкладывают кончик нагре-той препаровальной иглы, в расплавленное углубление быстро погружают объект и ожидают, когда парафин застынет. Срезают верхнюю часть объекта

• отбрасывают, делая затем поперечные или продольные срезы из средней части семени или плода. Их освобождают от парафина и заключают в соот-ветствующую жидкость.

Приготовление фиксированных микропрепаратов. Для хранения и длитель-ного использования готовят фиксированные микропрепараты. На нагретое предметное стекло с помощью стеклянной палочки наносят каплю расплав-ленного глицерин-желатинового реактива. В каплю сразу же помещают раз-мягченный объект или срез, который быстро накрывают покровным стек-лом, избегая образования пузырьков воздуха. К препарату приклеивают эти-кетку с наименованием.

Приготовление глицерин-желатинового реактива. К 1,0 г чистого желатина приливают 50 мл воды для набухания. Излишек воды отцеживают, прибавля-ют 6 мл очищенной воды, нагревают до растворения желатина, к раствору прибавляют 7 г чистого глицерина и перемешивают. На 100 мл реактива в качестве консерванта прибавляют 1—2 кристаллика фенола. Смесь нагревают на водяной бане в течение 10—15 мин, пока раствор не станет прозрачным. Фильтруют на горячей стеклянной воронке через фильтровальную бумагу. Реактив хранят в конической колбе, закрытой корковой пробкой, в центр которой вставлена стеклянная палочка, доходящая почти до дна колбы.

Приготовление микропрепаратов растительных порошков. Микропрепараты растительного порошка всех морфологических групп сырья готовят одинако-во. На предметное стекло вначале помещают 2—3 капли раствора хлоралгид-рата, а затем на кончике скальпеля или увлажненной препаровальной иглы вносят частицы порошка, перемешивают препаровальной иглой до равно-мерного смачивания всех частиц жидкостью, накрывают покровным стеклом

• слегка придавливают ручкой иглы. Избыток жидкости удаляют полоской фильт-ровальной бумаги. Если жидкости под стеклом оказалось мало, ее добавляют пипеткой рядом с покровным стеклом (она быстро затягивается под стекло).

Микропрепараты прогревают над небольшим пламенем горелки или на электроплитке до просветления тканей, не допуская высыхания. Держать препарат при прогревании следует наклонно, под углом 10—15°,— так из объекта лучше удаляются пузырьки воздуха. Нельзя допустить резкого заки-

пания жидкости, так как при этом частицы порошка не просветляются, а препарат заполняется пузырьками воздуха.