Другие методы

Метод рентгеноструктурного анализа основан на явлении дифракции рентгеновских лучей и дает возможность определить про- странственное расположение молекул. Применяется для изучения структуры белков, нуклеиновых кислот и других веществ, входящих в состав цитоплазмы и ядра клетки.

Метод дифференциального центрифугирования основан на разной скорости осаждения (седиментации) отдельных частиц под действием центробежной силы и используется для разделения внутриклеточных структур. Коэффициент седиментации (S) определяется скоростью движения макромолекул в поле с ускорением, равным I, измеряется в единицах, называемых СВЕДБЕРГАМИ. Для определения S используется центрифугирование при высокой скорости (30 000–60 000 об./мин). Исследуемый материал предварительно измельчают в гомогенизаторе. При скоростной седиментации используется среда одинаковой плотности. Компоненты клетки, вначале равномерно распределенные по всему объему пробирки, при центрифугировании оседают каждый со своей скоростью. В результате, содержимое пробирки разделяется на фракции (слои), из которых нижняя представлена самыми тяжелыми структурами, а верхняя — самыми легкими (рис. 5).

В последующем фракции (макросомальную и микросомальную) разделяют на отдельные компоненты, исполь- зуя методы седиментации в градиенте плотности среды. Наиболее распространенным компонентом для получения градиента среды является сахароза. В процессе центрифугирования субклеточные структуры, входящие в одну фракцию, концентрируются в виде отдельных зон в той части пробирки, где молярная концентрация сахарозы обеспечива- ет такую плотность раствора, при которой дальнейшее оседание частиц уже не происходит (рис. 6). Помимо перечисленных методов в цитологии используются и так называемые пограничные методы: ― гибридизация нуклеиновых кислот на срезах; ― иммуноцитохимия с при менением моноклональных антител на световом и электронно-микроскопическом уровне; ― микрохирургия и др.