Расчет показателей фагоцитоза
Процент фагоцитирующих нейтрофилов (% фагоцитоза) – считают процент клеток, вступивших в фагоцитоз, от общего количества посчитанных нейтрофилов. В норме процент фагоцитоза у взрослых -60-90%, у детей – 30-65%.
Фагоцитарное число – это среднее количество поглощенных бактерий или частиц на 1 клетку (полиморфно – ядерный лейкоцит).
В норме фагоцитарное число после 30 мин инкубации составляет 4,5- 7,5.
Показатель завершенности фагоцитоза (ПЗФ) - оценивают переваривающую функцию нейтрофилов. Это отношение количества переваренных микробов к общему числу поглощенных микробов (переваренных и непереваренных), выраженное в процентах. Норма для взрослых - 64 – 72%.
Индекс завершенности фагоцитоза (ИЗФ). В норме через 30 мин начинается переваривание поглощенных микроорганизмов нейтрофилами, через 2 ч. оно должно закончиться. Поэтому процент фагоцитирующих нейтрофилов и среднее число поглощенных микроорганизмов после 2-часовой экспозиции меньше, чем после 30 – минутной, а ИЗФ - больше 1,0, что указывает на завершенность фагоцитоза. ИЗФ меньше 1, 0 свидетельствует о сниженной киллерной функции нейтрофилов.
ИЗФ – среднее число поглощенных микроорганизмов через 30 мин/ среднее число поглощенных микроорганизмов через 120 мин.
Определение титра лизоцима в слюне
Лизоцим представляет собой термостабильный белок типа муколитического фермента. Он содержится в тканевых жидкостях животных и человека –в слезах, слюне, перитонеальной жидкости, плазме, сыворотке крови, лейкоцитах, материнском молоке и др.
Лизоцим продуцируется моноцитами крови и тканевыми макрофагами. Он вызывает лизис бактерий, но не активен в отношении вирусов.
Для определения титра готовят ряд последовательных разведений слюны в пробирках, в каждую из которых вносят по 1 мл. суспензии суточной культуры Micrococcuslisodecticus, содержащей 1 млрд/мл микробных тел.
(табл)
Протокол определения действия лизоцима слюны на
Micrococcuslisodecticus
-
Титр
Ингредиенты
1:2
1:4
1:8
1:16
Кс
Кф
Кк
1
2
3
4
5
6
7
Слюна
1,0
1,0
_
_
Физ. раствор
1,0
1,0
1,0
1,0
_
1,0
_
Взвесь суточной культуры
Mlisodecticus
1,0
1,0
1,0
1,0
_
_
1,0
Примечание: Из 4- пробирки 1,0 мл вылить в банку с дезраствором.
После инкубации в термостате в течение 3 ч определяют титр лизоцима по последнему разведению, в котором наблюдается полный лизис бактерий – просветление. Более точную оценку активности лизоцима можнопроводить, измеряя спектрофотометрическим методом изменение оптической плотности микробной взвеси после инкубации ее с разведениями лизоцима. Пользуясь калибровочными кривыми или специальными таблицами, активность лизоцима можно выразить в мкг/мл. Уровень содержания лизоцима в слюне здоровых людей колеблется от 50 до 70 мкг/мл.