Осаждение гамма-глобулина хлористым натрием

Для осаждения гамма-глобулина готовым насыщенным раствором хлористого натрия берут 390 г химически чистой соли, высыпают её в литровую колбу и доливают до литра горячей дистиллированной водой. После растворения соли получают горячий раствор и фильтруют его через двойной складчатый бумажный фильтр в стерильную посуду, закрывают пробкой и хранят при комнатной температуре. При остывании в нём образуется небольшой осадок соли. Раствор пригоден в течение 2-3 мес. При употреблении насыщенный раствор осторожно сливают с осадка или фильтруют через бумажные фильтры.

При осаждении гамма-глобулина к сыворотке добавляют сухую соль хлористого натрия в количестве 35 % по отношению к объёму взятой сыворотки. После её растворения приливают двойной объём приготовленного насыщенного раствора хлористого натрия.

При достижении необходимой рН наступает сильное помутнение смеси сыворотки крови с солью. После этого сосуд со смесью оставляют до следующего дня при t = +2 - +4⁰ С. При отстаивании в сосуде образуется рыхлый осадок гамма-глобулина. Для его выделения смесь центрифугируют в течение 30 мин при 1500-3000 об/мин.

Полученный плотный осадок гамма-глобулина белого или розового цвета растворяют в физиологическом растворе в объёме в 10 раз меньшем, чем объём взятой сыворотки. После растворения проверяют рН жидкого гамма-глобулина. Если рН ниже 7,0, то к раствору гамма-глобулина прибавляют каплями 10 % раствор безводного углекислого натрия до получения рН 7,2-7,4.

Изготовленный гамма-глобулин ставят на диализ против физиологического раствора в целлофановом мешочке на 2-3 дня, сменяя его каждый день 2 раза. После диализа проверяют процентное содержание белка и рН гамма-глобулина.

Раствор гамма- глобулина консервируют хинозолом 1:1000, фильтруют через пластинки СФ фильтра Зейтца, разливают по флаконам, этикетируют и хранят при t = +2 +4⁰С.

Жидкие гамма-глобулины можно высушивать из замороженного состояния под вакуумом (лиофильное высушивание).

Осаждение гамма-глобулина сернокислым натрием

Сернокислый натрий осаждает все глобулины сыворотки крови при его концентрации 21,5 %. При этом, альбумины остаются в фильтрате.

Осаждение и фильтрацию глобулинов проводят при 37⁰ С, т.к. сернокислый натрий плохо растворяется при комнатной температуре. Однако было установлено, что при фракционировании указанной концентрацией сернокислого натрия, значительное количество альфа-глобулина попадает в альбумин. Поэтому предложили повысить концентрацию соли до 26,8 %, в результате чего альфа-глобулин осаждается полностью. Бета- и гамма-глобулины осаждаются при концентрации сернокислого натрия 19,6 %.

Метод получения гамма-глобулинов с помощью осаждения сернокислым натрием был использован Г.А. Лошаковым и Г.П. Щерба-ковым для производственного изготовления альфа-глобулинов и альфа- бета-глобулинов из гипериммунной противорожистой сыворотки и сывороток против паратифа и колибактериоза телят.

Метод заключается в следующем. Сыворотку разбавляют дистиллированной водой 1:1. Белки осаждаются сернокислым натрием, содержащим 10 молекул воды. Применяют 15,75 %-ное и 19,6 %-ное насыщение сыворотки солью. В первом случае осаждаются альфа-глобулины, во втором альфа- и бета-глобулины. Смесь сыворотки с соляным раствором подогревают до 37-38⁰ С при помешивании, до полного растворения соли. Затем смесь оставляют на 10-12 ч при той же температуре. При добавлении соли в твердом виде наступает постепенное, по мере ее растворения, осаждение белка. При этом образуется компактный осадок с прозрачным надосадочным слоем.

Образовавшийся осадок сепарируют на сепараторе АСГ-3М, при 11000 об/мин. Полученная белковая масса растворяется дистиллированной водой – на 100 г пасты 150-200 мл воды.

Полученный раствор белка содержит 3-4 % сернистого натрия. Для его удаления в 1 л раствора белка добавляют 100 мл 30 % раствора хлористого кальция, в результате чего в осадок выпадает гипс (CaSO₄).

В очищенной таким образом сыворотке остается до 1 % сернистого натрия, до 1,5 % хлористого натрия и хлористого кальция, в количествах, допустимых инструкцией.

Получение гамма-глобулина методом солевого фракционирования является простым по техническому выполнению и не требует дорогого оборудования. Однако, несмотря на это, этот метод имеет и значительные недостатки.

Самым неблагоприятным этапом при солевом фракционировании является диализ, который продолжителен по времени и в результате его проведения повышается риск загрязнения иммуноглобулина посторонней микрофлорой.