8. Подлинность и доброкачественность лрс

8.1 Подлинность ЛРС (идентичность) - соответствие исследуемого объекта наименованию, под которым оно поступило для анализа. Подлинность ( идентичность) исследуемого лекарственного растительного сырья устанавливается путём:

• Макроскопический анализ;

• Микроскопический анализ;

• Качественного химического (качественные реакции) анализа;

• Люминесцентного анализа.

8.1.1. МАКРОСКОПИЧЕСКИЕ ПРИЗНАКИ

Смесь цельных или частично измельчённых тонких веточек, листьев, кусочков стеблей толщиной до 1,5 мм и цвет­ков. Листья обычно длиной от 3 мм до 12 мм и шириной до 4 мм; короткочерешковые, ланцетные, эллиптические или продолговато-эллиптические, цельнокрайние, голые или слабоопушённые с резко выступающими жилками на нижней стороне листа. При просматривании ( при увеличении 10 Х) по всей поверхности листа видны многочисленные коричневатые точки ( желёзки), у основания листа- длинные редкие щетинистые волоски. Кусочки веточек тонкие, четырёхгранные, опушенные, зеленовато-коричнвого или желтовато-коричневого цвета, часто с фиолетовым оттенком. Цветки мелкие, одиночные или собраны по нескольку штук в полумутовки. Каждый цветок состоит из двугубой чашечки и двугубого венчика. Чашечка длиной около 4 мм, снаружи опушенная; зубцы чашечки по краю с реснитчатыми волосками. Венчик длиной 5-8 мм, тычиной 4, пестик с четырёхраздельной верхней завязью. Цвет листьев от зелёного до серовато-зелёного, чашечки – коричневато-красный; венчика - сине­вато-фиолетовый. Запах ароматный; вкус горь­коватый, пряный, слегка жгучий.

8.2 МИКРОСКОПИЧЕСКИЕ ПРИЗНАКИ

При рассмотрении листа с поверхности видны клетки эпидермиса верхней и нижней сторон листа с извилистыми стенками; на верхнем эпидермисе иногда заметна складчатость кутикулы и четковидное утолщение стенок. Устьица имеются на обеих сторонах листа и окружены двумя околоустьичными клетками, расположенными перпендикулярно устьичной щели (диацитный тип). Эфиромасличные железки крупные, состоят из 8 выделительных клеток, расположенных радиально; клетки эпидермиса вокруг места прикрепления железки иногда образуют розетку. Волоски трех типов: очень крупные, многоклеточные, бородавчатые волоски, расположенные у основания листа (выше по краю листа встречаются более мелкие волоски); головчатые волоски с овальной одноклеточной головкой на короткой одноклеточной ножке; сосочковидные выросты эпидермиса, гладкие или слегка бородавчатые, чаще встречаются на верхней стороне листа и по краю.

Рис. 60. Препарат листа чаб­реца. Х280.

А — эпидермис нижней сторо­ны листа; Б — эпидермис верх­ней стороны листа; В — волос­ки у основания листа; 1 — го­ловчатые волоски; 2 — желез­ки; 3 — простые волоски; 4 — складчатость кутикулы; 5 — сосочковидные волоски; 6 — четковидные утолщения оболочки.

8.3 КАЧЕСТВЕННЫЕ ХИМИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ

Определение содержания эфирного масла проводят путем его перегонки с водяным паром из растительного сырья с последующим измерением объема. Содержание масла выражают в объемно - весовых процентах в пересчете на абсолютно сухое сырье.

Масса сырья, степень его измельчения, время перегонки, метод и возможные растворители указаны в соответствующей нормативно - технической документации на лекарственное растительное сырье.

Определение проводят одним из четырех описанных ниже методов. Сырье, содержащее эфирное масло, которое при перегонке претерпевает изменения, образует эмульсию, легко загустевает или имеет плотность, близкую к единице, анализируют методами 3 или 4.

Метод 1. Для определения эфирного масла используют прибор, изображенный на рис.1 Навеску измельченного сырья помещают в широкогорлую круглодонную или плоскодонную колбу вместимостью 1000 мл, приливают 300 мл воды и закрывают резиновой пробкой с обратным шариковым холодильником. В пробке снизу укрепляют металлические крючки, на которые при помощи тонкой проволоки подвешивают градуированный приемник так, чтобы конец холодильника находился над воронкообразным расширением приемника, не касаясь его. Приемник должен свободно помещаться в горле колбы, не касаясь стенок, и отстоять от уровня воды не менее чем на 50 мм. Цена деления градуированной части приемника 0,025 мл.

Рис. 1 Прибор для определения содержания эфирного масла

методом 1.

B - широкогорлая круглодонная или плоскодонная колба;D - обратный шариковый холодильник; C - градуированный приемник.

Колбу с содержимым нагревают и кипятят в течение времени, указанного в соответствующей нормативно - технической документации на лекарственное растительное сырье.

Объем масла в градуированной части приемника замеряют после окончания перегонки и охлаждения прибора до комнатной температуры.

После 6-8 определений холодильник и градуированный приемник необходимо промыть последовательно ацетоном и водой.

Содержание эфирного масла в объемно - весовых процентах (X) в пересчете на абсолютно сухое сырье вычисляют по формуле:

V х 100 х 100

Х = ------------- ,

m(100 - W)

где V - объем эфирного масла в миллилитрах; m - масса сырья в

граммах; W - потеря в массе при высушивании сырья в процентах.

Метод 2. Для определения эфирного масла используют прибор, изображенный на рис. 2. Прибор для определения эфирного масла состоит из круглодонной колбы вместимостью 1000 мл, паропроводной изогнутой трубки, холодильника в, градуированной трубки приемника, оканчивающейся внизу спускным краном , и сливной трубкой. В верхней части приемника имеется расширение с боковой трубкой, которая служит для внесения растворителя эфирного масла в дистиллят и сообщения внутренней части прибора с атмосферой. Колба и паропроводная трубка соединяются через нормальный шлиф. Градуированная трубка имеет цену деления 0,02 мл. Для заполнения прибора водой используется резиновая трубка с внутренним диаметром 4,5-5 мм, длиной 450 мм и воронка.

Рис. 2. Прибор для определения содержания эфирного масла

методами 2 и 3.

1 - круглодонная колба; 2 - расширение; 3 - воронка.

Перед каждым определением через прибор пропускают пар в течение 15-20 мин. После 6-8 определений прибор необходимо промыть последовательно ацетоном и водой.

Примечание. Допускается применение такого же разборного прибора, у которого паропроводная трубка сочленена с холодильником через нормальный шлиф, а сливная трубка е заменена каучуковой.

Навеску измельченного сырья помещают в колбу, приливают 300 мл воды, колбу соединяют с паропроводной трубкой и заполняют водой градуированную и сливную трубки через кран при помощи резиновой трубки, оканчивающейся воронкой. Колбу с содержимым нагревают и кипятят с интенсивностью, при которой скорость стекания дистиллята составляет 60-65 капель в 1 мин в течение времени, указанного в соответствующей нормативно - технической документации на лекарственное растительное сырье.

Через 5 мин после окончания перегонки открывают кран, постепенно спуская дистиллят так, чтобы эфирное масло заняло градуированную часть трубки приемника, и еще через 5 мин замеряют содержание эфирного масла в объемно - весовых процентах (X) в пересчете на абсолютно сухое сырье вычисляют по формуле:

V х 100 х 100

Х = -------------,

m(100 - W)

где V - объем эфирного масла в миллилитрах; m - масса сырья в

граммах; W - потеря в массе при высушивании сырья в процентах.

Метод 3. Для определения эфирного масла методом 3 используют прибор, изображенный на рис. 23. Навеску измельченного сырья помещают в колбу, приливают 300 мл воды, колбу соединяют с паропроводной трубкой и заполняют водой градуированную и сливную трубки через кран при помощи резиновой трубки, оканчивающейся воронкой. Затем через боковую трубку при помощи пипетки вливают в приемник около 0,5 мл декалина и точно замеряют его объем, опуская для этого уровень жидкости в градуированную часть трубки. Далее поступают, как описано в методе 2. Содержание эфирного масла в объемно-весовых процентах (X) в пересчете на абсолютно сухое сырье вычисляют по формуле:

(V1-V2)*100*100

X= -----------------------

M*(100-W)

где V - объем раствора масла в декалине в миллилитрах; V1 - объем

декалина в миллилитрах; m - масса сырья в граммах; W - потеря в

массе при высушивании сырья в процентах.

Метод 4. Качественный состав эфирного масла изучают с помощью метода ГЖХ. Эфирное масло растворяют в 95% этаноле до концентрации около 10 мг/мл. 2 мкл полученного раствора с помощью микрошприца вводят в испаритель газового хроматографа. Хроматографирование ведут в изотермическом режиме. Условия хроматографирования: хроматограф «Цвет 106», колонка с 5% OV на хроматоне NAW DMCS с размерами частиц 0,16-0,20 мм, температура колонки 150^О С, температура испарителя 200^О С, детектор ДИП, m(100 - W) газ-носитель – азот. Расход газов: азот – 60 мл/мин, водород – 22 мл/мин, воздух – 300 мл/мин.

Хроматографические методы. Разделение проводят с помощью различных видов хроматографии (газожидкостной, адсорбционной, колоночной, тонкослойной и т.п.).

Для идентификации масел используют масс-спектрометрию, ядерный магнитный резонанс, поляриметрию и рентгеноструктурный анализ.

8.4 ДОБРОКАЧЕСТВЕННОСТЬ ЛРС

Доброкачественность ЛРС – соответствие лекарственного растительного сырья требованиям нормативной документации. Доброкачественность ЛРС определяется количеством действующих веществ, чистотой сырья, естественной степенью измельчения ( для цельного сырья), влажность, содержание золы.

Сумма допустимых примесей : не более 3 %.

Определение проводят из 30 г испытуемого сырья. Допустимые примеси могут состоять из листьев от игольчатой до продолговато- ланцетовидной формы, с сильно завёрнутыми вниз краями; на верхней стороне листа имеются покровные волоски с бородавчатыми стенками, в очертании с остроконечием; на нижней стороне листа – бородавчатые волоски нескольких типов: одноклеточные, прямые или слегка изогнутые, двух- или трёхклеточные, часто коленчато изогнутые, и двух- или трёхклеточные, более или менее прямые ( Thymus vulgaris, Thymus zygis).

Потеря в массе при высушивании не более 13,0% 1,000 г измельченного сырья сушат при температуре от 100 до 105°С.

Общая зола не более 12,0%

Золы нерастворимой в хлористоводородной кислоте не более 5,0%.